谭国强
- 作品数：31 被引量：23H指数：3
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划)项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 真核细胞顺乌头酸酶活性检测新技术——胶内酶活性分析法被引量：4
- 2015年
- 顺乌头酸酶(aconitase,Aco)是细胞内重要的铁硫蛋白酶,它催化细胞内柠檬酸经中间产物顺乌头酸生成异柠檬酸.真核细胞中顺乌头酸酶有两种,分别定位在细胞质的顺乌头酸酶1(cAco)和定位在线粒体的顺乌头酸酶2(m-Aco).检测它们活性的变化能敏感地反映出细胞中能量代谢、自由基产生、铁硫簇组装及铁代谢水平的改变.顺乌头酸酶活性的传统检测方法通常是测定细胞中总的顺乌头酸酶活性,该方法难以准确区分出c-Aco和m-Aco各自的活性变化.因此我们建立一种胶内酶活性分析法检测顺乌头酸酶活性.该方法利用非变性电泳技术将c-Aco和m-Aco浓缩分离,通过泡染底物显色,条带颜色深浅反映了酶活性的强弱.同时,比较了胶内酶活性分析法和分光光度法检测细胞内c-Aco和m-Aco的活性,并对比检测了过氧化氢处理细胞前后Aco活性的变化.结果显示,这两种方法均可敏感地检测出Aco的活性改变,并有广泛的细胞系实用性,但胶内酶活性分析法可区别测定c-Aco和m-Aco活性,不需繁琐的细胞质和线粒体分离,简便易行.文中介绍的线粒体分离纯化技术也为线粒体功能深入研究提供了一个快速、高效的分离纯化方法.
- 杜璟李艳纯任雪营谭国强吕建新
- 关键词：分光光度法铁硫蛋白
- 铜对线粒体中铁硫蛋白功能的毒性机制研究被引量：2
- 2016年
- 该文探讨了铜对线粒体内铁硫蛋白的毒性机理。通过包装慢病毒将Hep G2细胞中铜转运蛋白ATP7B(ATPase copper transporting beta)基因敲低,并用铜离子处理构建高铜细胞模型。通过免疫印迹、胶内酶活、紫外–可见光分光光度法检测细胞线粒体内铁硫蛋白、非铁硫蛋白及铁硫簇组装蛋白量和活性的改变;用电镜观察高铜模型中线粒体的形态改变;用海马能量代谢分析仪检测铜离子对细胞能量代谢的影响。结果发现,高铜细胞模型线粒体内铁硫簇组装蛋白ISCA2(ironsulfur cluster assembly 2)及ISCU(iron-sulfur cluster assembly enzyme)水平下降,抑制了铁硫簇的组装,并进一步影响了线粒体内[2Fe-2S]型及[4Fe-4S]型铁硫蛋白功能,但并不影响非铁硫蛋白。高铜状态也影响了呼吸链复合体活性及线粒体能量代谢,并导致线粒体形态发生改变。这些结果表明,异常累积的铜离子也会通过抑制线粒体中铁硫簇的组装,影响线粒体内铁硫蛋白的功能。
- 李艳纯杜璟刘若兰任雪营林楚贤李江辉谭国强吕建新
- 关键词：铁硫簇铁硫蛋白能量代谢
- 利用非离子去污剂提取PBMC中线粒体筛查线粒体功能紊乱性疾病
- 线粒体作为真核细胞中重要的细胞器,在人体生命活动中扮演着许多重要的角色。它们通过氧化磷酸化为机体提供能量,参与了脂肪酸氧化、尿素循环、氨基酸和一些蛋白辅基的生物合成等过程。这些功能使得线粒体成为细胞生命活动中必不可少的一...
- 李艳纯任雪营杜璟吕建新谭国强
- 文献传递
- 一种对重金属铜高度敏感的生物传感器的制备方法及其产品
- 本发明涉及大肠杆菌生物传感器制备方法及其产品，制备方法的技术方案是：(1)利用Red重组系统，敲除野生型大肠杆菌E.coli MC4100基因组中copA、cueO和cusA三个基因；(2)利用交叉PCR技术构建融合报告...
- 谭国强李东王娟娟赵建国洪旭芬
- 文献传递
- 一种大肠杆菌冷休克助溶型表达质粒的构建方法及其应用
- 本发明涉及一种大肠杆菌助溶型表达质粒的构建方案及应用其制备水溶性异源多肽的方法。所述利用无缝克隆技术构建一类由冷休克基因的启动子控制小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)与外源基因融合表达的冷休克助溶型表达质粒。将一种嵌合型...
- 庞一林谭国强吕建新李江辉杜璟张涛孙倩倩韩琴霞
- 基于大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶检测L-丝氨酸的方法
- 本发明公开了基于大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶检测L‑丝氨酸的方法，属于氨基酸检测技术领域。该方法包括：将含有L‑丝氨酸的待测样品与大肠杆菌半胱氨酸脱硫酶体外反应生成红色物质，通过观察红色物质的颜色或者测定其含量，定性或定量检测...
- 李江辉谭国强梁枫庞一林
- 低表达线粒体蛋白ISCA2对线粒体功能影响的机制研究被引量：2
- 2018年
- 该文探讨了ISCA2蛋白低表达对细胞内铁硫蛋白和能量代谢的影响。在HeLa细胞内将ISCA2基因敲低,通过免疫印迹、顺乌头酸酶胶内酶活性分析法分析线粒体内外铁硫蛋白水平和活性改变;用紫外–可见分光光度法检测细胞线粒体内氧化磷酸化复合体活性;用海马能量分析仪分析细胞内能量代谢的改变。结果表明,ISCA2蛋白低表达后,氧化磷酸化复合体中各铁硫蛋白亚基都出现不同程度的下调,且对于线粒体[4Fe-4S]型铁硫蛋白亚基影响显著,但对线粒体[2Fe-2S]型铁硫蛋白亚基以及胞质[4Fe-4S]型铁硫蛋白亚基影响较小。同时,ISCA2蛋白低表达后对线粒体复合体活性和线粒体能量代谢影响显著,细胞有氧呼吸降低,细胞外乳酸含量增加。这些结果表明,ISCA2蛋白低表达后抑制铁硫簇的组装,导致铁硫蛋白功能障碍,影响线粒体复合体活性和氧化磷酸化系统,使得细胞能量代谢紊乱。
- 杨玲刘若兰牛欢胡立李艳纯王伟龙李江辉谭国强吕建新
- 关键词：铁硫簇铁硫蛋白能量代谢
- 检测外周血单个核细胞中顺乌头酸酶活性筛查铁硫蛋白病
- 铁硫簇是一类古老而功能众多的蛋白辅基,它的组装是需多种组装蛋白参与、有序进行的催化反应。成熟的铁硫蛋白参与了细胞中各种生命活动,如物质代谢、能量产生、DNA复制与修复、基因转录与翻译等。所以,铁硫簇组装过程中任何一个环节...
- 杜璟李艳纯任雪营吕建新谭国强
- 文献传递
- 一种大肠杆菌冷休克助溶型表达质粒的构建方法及其应用
- 本发明涉及一种大肠杆菌助溶型表达质粒的构建方案及应用其制备水溶性异源多肽的方法。所述利用无缝克隆技术构建一类由冷休克基因的启动子控制小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)与外源基因融合表达的冷休克助溶型表达质粒。将一种嵌合型...
- 庞一林谭国强吕建新李江辉杜璟张涛孙倩倩韩琴霞
- 一种检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株的构建被引量：1
- 2020年
- 目的:构建一种能够检测生活饮用水和污水中生物有效性铜离子的微生物报告菌株。方法:首先采用交叉PCR将增强型绿色荧光蛋白与铜离子“外排泵”基因copA的启动子融合构建响应铜离子的CopAp::gfpmut2-pET28a感应元件。然后利用Red重组系统分别敲除野生型大肠杆菌(E.coli)MC4100体内负责外排转运铜离子的基因,并将感应元件转化至突变菌中完成菌株的构建。最后优化出最佳检测条件,并将其初步应用于检测水环境中铜离子。结果:相对野生型菌株,E.coliΔcusA-ΔcopA-ΔcueO突变菌对铜离子的敏感性提高了64倍,从而使报告菌株的荧光信号显著增强,且荧光信号强度与铜离子浓度呈剂量依赖关系;报告菌株的线性检测范围为0.05~2.5μmol/L(0.0032~0.16 mg/L)Cu2+;与原子吸收光谱法相比,其对生活饮用水中0.05 mg/L和1 mg/L铜离子的回收率分别为87.90%和104.37%。结论:本研究构建报告菌株的灵敏度能够有效覆盖国标中针对生活饮用水和污水中铜离子的限制,从而为报告菌株的应用奠定了技术基础。
- 周怀彬王娟娟赵建国洪旭芬庞一林李江辉谭国强
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白RED重组系统
