周亚
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：北京市科委科技计划项目北京市海淀区科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性被引量：3
- 2013年
- 目的 原核表达、纯化HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白,并分析其免疫原性。方法 生物信息学方法预测鼠血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的B细胞抗原表位,采用重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）法将VEGF抗原表位基因插入到HBcAg基因的免疫优势区内,合成HBcAg-VEGF基因序列,克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-HBcAg-VEGF,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。表达产物经羟基磷灰石CHT层析、Sephacryl S-400HR凝胶过滤层析纯化后,与Al（OH）3佐剂混合,分别于第0、7、14、21天经肌肉免疫BALB/c小鼠1次,第28天采血,ELISA法检测血清中抗VEGF抗原表位抗体,VEGF受体结合抑制试验筛选具有良好免疫原性的VEGF优势抗原表位。对筛选出的优势抗原表位融合蛋白进行表达及纯化条件的优化。结果 生物信息学软件预测了6个VEGF的B细胞抗原表位;6个重组表达质粒经菌落PCR及测序证实构建正确;表达的HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白相对分子质量为14400～20100,纯度均在85%以上,除HBcAg-VEGF3以单体形式存在、不形成颗粒外,其他融合蛋白均能形成VLP;各组HBcAg-VEGF融合蛋白免疫小鼠后,均刺激机体产生了针对VEGF抗原表位肽的特异性抗体,其中HBcAg-VEGF1组抗体水平最高,且抑制VEGF与VEGFR结合的能力最强;采用优化的条件表达、纯化的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白纯度达95%以上。结论 筛选得到的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白显示出较好的免疫原性,为进一步研究其抗肿瘤效应奠定了基础。
- 张占东徐静李计来李树香周亚王欣怡刘敬张云涛
- 关键词：乙型肝炎核心抗原抗原表位融合蛋白原核细胞免疫原性
- 血管内皮生长因子定量检测试剂盒的研制
- 2011年
- 目的 研制血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）检测试剂盒（酶标法）.方法 以一株特异性抗VEGF单克隆抗体作为捕获抗体,另一株单克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘滴定法确定两抗体的最佳浓度组合.制备冻干VEGF165参考品,并对样本稀释液、封闭液等实验条件进行优化.检测自制试剂盒的特异性并对其进行初步应用.结果 棋盘滴定法确定捕获抗体的质量浓度为10μg/ml,检测抗体的稀释倍数为1：20 000.冻干VEGF165的质量浓度为720～880 pg/ml,样本间变异系数〈10%.以5%牛血清白蛋白作为封闭液和样本稀释液最为合适.自制试剂盒与10种细胞因子均无交叉反应,具有较高的特异性和灵敏度.结论 成功研制出VEGF检测试剂盒.
- 李树香王欣怡刘敬周亚徐静邹检平
- 关键词：血管内皮生长因子类试剂盒
- 血管内皮生长因子检测试剂盒质控标准的确定
- 2012年
- 目的确定血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)检测试剂盒的质控标准。方法对已制备的VEGF检测试剂盒反应体系的线性范围、最低检出限、精密性、准确性、稳定性进行质量评价,确定质控标准。结果 VEGF检测试剂盒的线性范围为0～400 pg/ml;最低检出限为0 pg/ml;检测不同浓度VEGF样品的批内精密性为9.83%～13.73%,不同时间检测VEGF的批内精密性为5.47%～14.08%,批间精密性为7.88%;检测不同浓度VEGF的回收率为94%～105%,确定试剂盒的质控标准为批内、批间精密性<15%,回收率在90%～110%之间。3批试剂盒于4℃分别放置6个月,各项指标均符合已确定的质控标准。结论已确定了VEGF检测试剂盒的质控标准,为其进一步应用于临床奠定了基础。
- 李树香王欣怡刘敬周亚徐静邹检平
- 关键词：血管内皮生长因子
- HBcAg—VEGF1抗原表位融合蛋白抗肿瘤作用的实验研究
- 2014年
- 目的通过BALB／c小鼠肿瘤模型观察HBcAg．VEGFl（血管内皮生长因子）抗原表位融合蛋白的抗肿瘤作用。方法将接种了10。个CT-26结肠癌细胞的BALB／c肿瘤小鼠随机分为HBcAg—VEGFl组、HBcAg组和生理盐水（NS）组，每组10只。HBcAg—VEGFl组、HBcAg组分别肌肉注射含铝佐剂的HBcAg—VEGFl、HBcAg蛋白各20斗g／100ill每只；NS组注射生理盐水，每周1次共免疫4次。检测小鼠血清中抗VEGF抗体和VEGF浓度的变化趋势、肿瘤体积、生存率、肿瘤重量及微血管密度等指标，分析其抗肿瘤效果。结果在其抗肿瘤实验中，HBcAg．VEGFl组血清中产生了较高滴度的抗VEGF抗体，其VEGF浓度显著低于HBcAg组和Ns组；肿瘤体积、生存率等指标与HBcAg组和Ns组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；HBcAg—VEGFl组、HBcAg组和Ns组的肿瘤组织微血管密度分别为（18．6±2．7）、（39．8±4．9）和（38．4±6．1），肿瘤重量分别为（3．937±0．370）g、（6．039±1．016）g和（6．363±0．941）g，HBcAg—VEGFl组与其他两组比较，差异均有统计学意义（p〈0．01）。结论HBcAg—VEGFl抗原表位融合蛋白能够刺激肿瘤小鼠机体产生免疫应答，产生特异性的抗VEGF抗体，并且能够通过减少血管新生来抑制CT-26肿瘤组织的生长。
- 张占东徐静李计来李树香周亚王欣怡刘敬张云涛
- 关键词：融合蛋白免疫应答抗血管生成
- 血管内皮生长因子和抗肿瘤血管新生药物研究进展被引量：2
- 2009年
- 肿瘤的生长与迁移离不开新血管的形成,这使得抗血管新生成为肿瘤治疗的重要途径之一。血管内皮生长因子(VEGF)是针对内皮细胞作用最强、特异性最高的血管新生促进因子,因而VEGF是抗肿瘤治疗的重要靶点。我们简要介绍了VEGF的一些生物学特点及肿瘤血管新生,着重介绍了一些抗血管新生药物的最新研究成果及其临床应用。
- 周亚徐静邹检平
- 关键词：血管内皮生长因子肿瘤血管新生贝伐单抗
