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原代结直肠癌相关成纤维细胞培养及特征分析被引量：2: 2015年; 目的分离培养结直肠癌相关成纤维细胞（CAF），分析其与正常成纤维细胞（NF）的特征差异。方法取新鲜结直肠癌及对应的正常结肠组织标本，采用组织块培养法分离培养CAF和NF，光镜、Westernblot和免疫荧光技术鉴定所分离的细胞，荧光定量聚合酶链反应（qPCR）、免疫荧光技术、电镜观察和流式细胞术分析成纤维细胞的活化和生长特征。结果组织块培养法成功分离CAF和NF，形态上NF为长梭形，呈束状、编织状、旋涡状排列生长，CAF呈胖梭形、星形或多边形，散在分布、排列无规则，胞质中可见较明显的肌动蛋白骨架；免疫表型上，二者均表达纤维连接蛋白，不表达上皮细胞钙黏蛋白、CD31和钙结合蛋白（caldesmon）。qPCR结果显示，CAF成纤维细胞活化蛋白mRNA表达高于NF，而成纤维细胞特异蛋白1mRNA表达则低于NF。Western blot结果显示NF和CAF平滑肌肌动蛋白α（α-SMA）表达量差异无统计学意义（P〉0．05），免疫荧光显微镜观察显示CAF胞质中α—SMA呈束状、平行、规则地沿细胞长轴排列，NF中α-SMA则无此特征。电镜显示CAF胞质中可见密集、排列规则的肌丝，而NF则无。流式细胞术检测显示CAF中S期和G2期细胞比例明显低于NF，qPCR结果显示CAF相比NF转化生长因子β1、基质源性因子和血小板源性生长因子（PDGF）DmRNA表达下降，PDGFCmRNA表达升高，表明CAF相比NF增殖下降，细胞因子分泌存在差异。结论CAF与NF在形态、活化特征及部分细胞因子分泌方面存在较大差异，CAF相比NF生长增殖能力下降。; 文欢聂倩倩姜支农邓红; 关键词：结直肠肿瘤成纤维细胞细胞

原代结直肠癌相关成纤维细胞特征分析: 目的:分离培养结直肠癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs),分析其与正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)的特征差异。方法:取新鲜结直肠癌及对应的...; 聂倩倩文欢姜支农邓红; 关键词：结直肠癌癌相关成纤维细胞原代培养; 文献传递

人结肠成纤维细胞下调经典Wnt信号通路抑制结直肠癌细胞EMT: <正>研究目的:探究人结肠成纤维细胞在结直肠癌EMT过程中的影响以及相应机制。实验材料与方法:借助Western blot和免疫荧光来鉴定正常成纤维细胞(NF)和癌相关成纤维细胞(CAF)。用β-Galactosidas...; 聂倩倩朱紫菱邓红; 文献传递

人结直肠癌相关成纤维细胞和结肠正常成纤维细胞对结直肠癌细胞EMT的影响及机制: 结直肠癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，据世界癌症协会2015年的研究表明，结直肠癌的发病率和死亡率仍然高居第三位。虽然针对结直肠癌的化学治疗和靶向治疗已经取得了显著进展，但是仍有60％的手术后病人会发生原位复发和远处转...; 聂倩倩; 关键词：结直肠癌上皮间质转化成纤维细胞; 文献传递

肿瘤相关成纤维细胞CD10表达在结直肠腺瘤癌变和复发中的意义被引量：3: 2016年; 目的：探讨肿瘤相关成纤维细胞（ TAF） CD10在结直肠腺瘤癌变和复发中的作用，评价TAF CD10表达在诊断腺瘤癌变中的应用价值。方法：分别收集结直肠低级别腺瘤、高级别腺瘤和结直肠腺癌组织各50例，取配对结直肠腺癌标本远端切缘为正常对照，采用免疫组织化学Envision法测定TAF CD10和肿瘤细胞p53、Ki-67、β-catenin及CyclinD1的表达，分析TAF表达CD10与肿瘤细胞表达p53、Ki-67、βc-atenin 和CyclinD1的相关性。同时收集低级别腺瘤100例，分复发组（43例）和非复发组（57例）两组，其中复发组中复发为结直肠腺癌16例和复发为腺瘤27例，比较CD10在复发组与非复发组间差异及复发为结直肠腺癌与腺瘤间差异。结果：正常黏膜不存在 TAF，其CD10在结直肠低级别腺瘤、高级别腺瘤和腺癌中的阳性率分别为22％、50％和78％，呈逐渐升高趋势（均P ＜0．05）；Ki-67、β-catenin在低级别腺瘤、高级别腺瘤、腺癌中瘤细胞的表达逐渐升高（均P＜0．01）；CyclinD1在高级别腺瘤中表达高于腺癌和低级别腺瘤（均P ＞0．05）；p53在结直肠腺癌和高级别腺瘤中表达高于低级别腺瘤（均P＜00．1）；CD10的表达水平与肿瘤细胞p53、Ki-67、β-catenin核阳性表达均呈正相关（ r＝0．264、0．307、0．320，均P＜0．01），而与CyclinD1、β-catenin膜阳性表达无明显相关（r＝0．012、－0．073，均 P ＞0．05）。 CD10在低级别腺瘤复发组表达高于非复发组（P＜0．05），在复发为结直肠腺癌组织的表达又高于复发为腺瘤者（ P＜0．05）。结论：TAF CD 10可能在腺瘤癌变中起重要作用；TAF CD10高表达的腺瘤容易复发且癌变；TAF CD10联合肿瘤细胞p53、Ki-67、β-catenin检测有助于诊断结直肠腺瘤癌变和预测腺瘤复发。; 郑江江朱音李昌水李银亚聂倩倩朱紫菱邓红; 关键词：成纤维细胞

原代癌相关成纤维细胞和正常成纤维细胞特征比较及对结直肠癌细胞EMT影响被引量：3: 2016年; 目的：观察原代癌相关成纤维细胞（ cancer associated fibroblasts， CAFs）和正常成纤维细胞（ normal fibroblasts， NFs）特征及其对结直肠癌细胞SW620上皮间质转化（ epithelial？mesenchymal transition， EMT）的影响。方法鉴定 NFs和 CAFs，比较两者活化和衰老程度。通过间接共培养实验观察两者对SW620细胞EMT和迁移能力影响。结果 NFs 和 CAFs 表达纤连蛋白（ Fibronectin ）和α？平滑肌动蛋白（α？smooth muscle actin，α？SMA），不表达 E？钙黏蛋白（E？Cadherin）。 CAFsα？SMA 表达和衰老程度高于NFs。 CAFs促进SW620细胞E？Cadherin下调、波形蛋白（ vimentin）和Fibronectin上调， Wnt信号蛋白磷酸化的β？连环蛋白（Ser552， S552）和蓬乱蛋白（Dishevelled 3， DVL3）上调，促进其迁移。 NFs对SW620细胞EMT和迁移能力无影响。结论 CAFs活化和衰老程度大于NFs； CAFs促进结直肠癌细胞EMT、迁移和Wnt信号上调； NFs对结直肠癌细胞EMT和迁移能力无影响。; 聂倩倩朱紫菱姜支农邓红; 关键词：结直肠癌成纤维细胞上皮间质转化衰老

CD10在癌相关成纤维细胞中的表达及其对结直肠癌形成和演进的影响被引量：3: 2016年; 目的探讨癌相关成纤维细胞（CAF）CD10的表达及其在结直肠癌形成和演进中的作用。方法收集浙江宁波市鄞州第二医院有详细随访资料的结直肠癌手术切除标本226例，应用免疫组织化学法检测肿瘤组织中心区、癌旁腺瘤组织及切缘正常黏膜组织间质成纤维细胞CD10表达和肿瘤细胞Ki－67、p53、cyclin D1及β－catenin的表达，观察CD10在间质CAF中表达情况，分析其与肿瘤细胞表达Ki－67、p53、cyclin D1及β－catenin和临床病理参数的相关性。结果正常肠黏膜间质成纤维细胞不表达CD10，结直肠癌组织中心区和癌旁腺瘤区CAF CD10的表达率分别为80.1%（181/226）和58.4%（132/226），CD10阳性的细胞同时表达平滑肌肌动蛋白（SMA），不表达结蛋白。Ki－67在结直肠癌组织中心区和癌旁腺瘤区的肿瘤细胞表达率分别为84.1%（190/226）和63.7%（144/226），正常肠黏膜上皮表达率为7.1%（16/226）。p53在结直肠癌组织中心区和癌旁腺瘤区肿瘤细胞表达率分别为50.4%（114/226）和53.1%（120/226），在正常肠黏膜上皮的表达率为8.8%（20/226）。cyclin D1在结直肠癌组织中心区和癌旁腺瘤区肿瘤细胞表达率分别83.6%（189/226）和48.7%（110/226），在正常肠黏膜上皮不表达。β－catenin在正常肠黏膜上皮全部定位于细胞膜，癌旁腺瘤区肿瘤细胞膜表达率为53.1%（120/226），细胞质表达率为95.6%（216/226），细胞核表达率为10.6%（24/226）；肿瘤中心区癌细胞膜表达率为17.7%（40/226），细胞质表达率为100.0%（226/226），细胞核表达率为49.1%（111/226）。随着CAF CD10在癌旁腺瘤区和癌组织中心区的表达逐渐增高，周围肿瘤细胞Ki－67、p53、cyclin D1和β－catenin核表达也逐渐增高（P〈0.05）。CAF CD10在不同性别、不同年龄段和不同分化程度的癌组织中的表达率有差异（P〈0.05）；而与浸润深度、有无淋巴结转移及脉管癌栓; 朱音郑江江杨芳聂倩倩朱紫菱邓红; 关键词：结直肠肿瘤成纤维细胞脑啡肽酶 Β连环素 WNT蛋白质类

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