姜平
- 作品数：8 被引量：46H指数：4
- 供职机构：大连大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高校重点实验室项目辽宁省博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 重构猪SLA-I单链复合体及其口蹄疫病毒VP1蛋白限制性表位的筛选被引量：4
- 2007年
- 目前,没有研究猪SLA-I类复合体限制性表位的系统.为了构建猪的SLA-I类复合体,研究其相应重要病毒的限制性表位,亚克隆猪主要组织相容性复合体重链基因SLA-2胞外区和轻链基因β2m成熟肽区,利用一富含甘氨酸和丝氨酸的Linker(G4S)3连接两个基因,通过SOEPCR体外构建了猪可溶性的单链复合体SC-SLA-I[SLA-2-(G4S)3-β2m],计算机方法设计3类口蹄疫病毒VP1蛋白的T细胞表位,经化学合成,分别命名为PepⅠ(FMDV/VP126—34)、PepⅡ(FMDV/VP1157—165)和PepⅢ(FMDV/VP145—53),用以结合单链复合体蛋白SC-SLA-I.酸洗脱结合质谱法测定SC-SLA-I结合表位,同时设定非相关蛋白和多肽的对照试验.结果显示,Pep Ⅰ和Pep Ⅱ均能和SC-SLA-I结合,而Pep Ⅲ及非相关多肽不能结合,对照蛋白MBP的肽结合试验显示阴性.结果表明,多肽Pep Ⅰ和Pep Ⅱ属于SLA-I类限制性表位.
- 高凤山姜平方青美李云岗李新生王钦富迟彦夏春
- 关键词：T细胞表位口蹄疫病毒
- 荷包猪SLA-2-HB01真核表达载体的构建及在PK15细胞中的表达
- 2018年
- 为构建荷包猪SLA-2-HB01真核细胞表达载体,观察其在PK15细胞中的表达情况。首先参考SLA-2-HB01基因编码区序列设计了引物对,以SLA-2-HB01-pMD 18-T为模板PCR扩增获得SLA-2-HB01编码区基因片段,经TA克隆及菌落PCR筛选得到阳性克隆菌。测序正确后大量双酶切回收目的基因片段并与真核表达载体pEGFP N3相连接获得重组质粒SLA-2-HB01/pEGFP N3,重组质粒转化至大肠杆菌经大量克隆后,抽提阳性重组质粒并通过脂质体介导转染至PK15细胞,通过荧光显微镜观察转染后PK15细胞的荧光强度,进一步通过Western Blotting检测PK15细胞中SLA-2-HB01蛋白的表达情况。结果显示PCR成功扩增得到SLA-2-HB01,大小为1 104 bp,并成功构建重组质粒SLA-2-HB01/pEGFP N3,酶切鉴定证实插入片段大小为1 092 bp。SLA-2-HB01/pEGFP N3重组质粒转染PK15细胞后具有绿色荧光,Western Blotting显示SLA-2-HB01-EGFP融合蛋白分子量大小为70 kD,与理论值相符。成功构建了SLA-2-HB01/pEGFP N3重组质粒,并初步确认SLA-2-HB01-EGFP融合蛋白成功在PK15细胞中表达,为下一步进行SLA-2-HB01递呈多肽表位的研究奠定基础。
- 翟晓鑫高花姜平许崇波张宗辉李文哲高凤山
- 关键词：荷包猪PK15细胞SLA-2真核表达载体
- 荷包猪SLA-DRa基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2015年
- 为研究中国特色品系荷包猪SLA-DRa基因(又称SLA-DRa-HB),本试验设计引物,RT-PCR扩增3个个体荷包猪SLA-DRa全基因编码区,并克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,经酶切鉴定后筛选阳性克隆测序,比较分析与其他SLA-DRa等位基因的差异,并绘制分子进化树。结果显示,RT-PCR成功扩增出目的基因条带,大小约800bp。经克隆测序后分析,SLA-DRa-HB基因全长为779bp,编码区为1—759,共编码252个氨基酸。序列对比分析结果显示,SLA-DRa-HB的特征性变异集中在135、159、202位点。而穿膜区和胞浆功能区(203—252)变异位点为206、248。分子进化树分析显示,SLA-DRa-HB自成一系,且与其他等位基因的进化关系较近。本研究成功克隆荷包猪SLA-DRa基因,为进一步研究其功能奠定基础。
- 姜平高凤山额尔敦木图
- 关键词：荷包猪克隆
- 全身麻醉分子机制研究进展被引量：6
- 2016年
- 全身麻醉简称全麻,是指麻醉药物经过静脉、呼吸道或肌内注射等途径进入体内,引起中枢神经系统产生抑制,并在临床上表现为全身痛觉消失、反射抑制、意识不清等症状。对中枢神经系统抑制的程度与血液内药物浓度有关,并且可以控制和调节[1-2]。而且,这种抑制是完全可逆的,当药物被代谢分解或从体内排出后,患者的神志及各种反射就会逐渐恢复[3]。目前,全身麻醉的临床技术已经非常成熟。然而,关于全身麻醉分子机制的研究,
- 姜龙梁小东姜平
- 关键词：全身麻醉分子机制
- 荷包猪SLA-DRB基因cDNA的克隆及分子进化特征分析被引量：2
- 2015年
- 旨在研究荷包猪SLA-DRB基因的分子特征,设计引物用RT-PCR扩增3头荷包猪DRB基因c DNA,并克隆至p MD18-T Vector,阳性克隆测序并做序列分析,分别进行同源性、分子进化及主要氨基酸变异位点分析。结果表明,成功从3头荷包猪中扩增得到SLA-DRB基因,分别命名为SLA-DRB-HB01-03,经序列测定后,证实c DNA全长为836 bp,其中1-801为ORF区,共编码266个氨基酸。同源性分析显示,SLA-DRB-HB与其他SLA-DRB等位基因的同源性介于90.3%-99.8%之间。分子进化分析表明,荷包猪SLA-DRB-HB独立分支,与其他等位基因相比较,进化更加原始。氨基酸变异位点和多态性分析结果显示,SLA-DRBHB本身存在一定的多态性。
- 姜平额尔敦木图高凤山
- 关键词：荷包猪SLA-DRB分子进化多态性
- 动物麻醉方法和麻醉药物研究现状被引量：20
- 2014年
- 动物麻醉是动物诊疗及手术过程顺利进行的先决条件,动物麻醉按照不同分类标准分为不同的麻醉类型。常见的有吸入麻醉、口服麻醉、肌肉或皮下注射麻醉、静脉注射麻醉、局部麻醉、全身麻醉、单一麻醉、复合麻醉等。每种麻醉方法都对应各自的麻醉药物。常见的动物麻醉药物包括α2受体激动剂、麻醉性镇痛药和镇痛安定药等。论文综述了动物麻醉的方法及常用麻醉剂的研究现状。
- 姜龙张晓燕姜平
- 关键词：动物麻醉方法麻醉药物
- 我国巴马小型猪SLA-2基因克隆及分子特征被引量：11
- 2007年
- 为研究我国巴马小型猪SLA-Ⅰ分子特征,设计引物克隆了SLA-Ⅰ类分子SLA-2基因（SLA-2bm）,并通过分子生物学软件分析其分子特征。经克隆及序列测定分析,SLA-2bm为1119bp,其中3-1097为ORF区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键。氨基酸同源性分析显示SLA-2bm与其它SLA-2、SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为88.4%-96.4%、88.3%-90.5%和87.7%-92.7%。系统进化树显示SLA-2bm与其它SLA-2等位基因在遗传关系上相对独立,进化程度较低;各功能区分析,SLA-2bm与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点。结果表明,SLA-2bm属于一个新的等位基因,巴马小型猪是保留原始基因特征的品种。
- 高凤山姜平李新生李云岗夏春
- 关键词：巴马小型猪等位基因分子特征
- 荷包猪SLA-3-HB 01基因四聚体前体链的构建及表达
- 2018年
- 为了构建荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链原核表达载体,并获得SLA-3-HB01表达蛋白,试验以SLA-3-HB01/pMD18-T为模板进行PCR扩增四聚体前体链SLA-3-HB01-BSP,并克隆至pMD19-T载体中,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选阳性克隆并测序,目的基因连接至表达载体pET-21a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况,提取包涵体并进行检测。结果显示,PCR成功扩增得到SLA-3-HB01-BSP,大小为896bp左右。酶切鉴定证实,目的基因成功克隆至pMD19-T载体中,插入片段大小为876bp,阳性克隆经测序后所获序列与原序列一致,并在3′端带有BSP标签序列。酶切鉴定进一步证实成功构建SLA-3-HB01-BSP/pET-21a(+)重组表达载体,经转化及诱导表达,SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子质量在33.5ku左右。包涵体蛋白分子质量约33.5ku,与菌体中目的蛋白大小一致,经凝胶成像系统UVP扫描分析,包涵体蛋白纯度接近于90%,符合进行相关结构和功能研究的要求。本研究成功构建了荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链的pET-21a(+)重组表达系统,并获得了一定纯度的包涵体蛋白。
- 高花翟晓鑫姜平甘慧张宗辉许崇波高凤山
- 关键词：密码子优化包涵体
