白红妹
- 作品数：27 被引量：12H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金云南省应用基础研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 序列优化的小鼠IL-33基因在哺乳动物细胞中的有效分泌表达被引量：1
- 2019年
- 目的:白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用,在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达,为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法:根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(m IL-33)的氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成优化的m IL-33基因片段,通过搭桥PCR将编码人CD8α信号肽的核酸序列分别与优化或未优化的m IL-33基因连接,并与绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别构建到双表达单元质粒p Bud CE4. 1的不同启动子下;重组质粒经lipofectamine 3000和PEI转染293FT细胞;以Western blot和ELISA检测重组蛋白的表达;收集表达的m IL-33刺激巨噬细胞Raw264. 7,ELISA检测培养上清的TNFα水平,以证明IL-33的生物学活性。结果:重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功; lipofectamine 3000转染效率较PEI转染更高; Western blot和ELISA结果显示密码子优化的m IL-33表达水平较未优化序列更高,在EF-1α启动子和CMV启动子指导下m IL-33在293FT细胞表达水平相当,CD8α信号肽成功引导m IL-33的分泌,产物具生物学活性。结论:密码子优化操作显著改善了m IL-33在哺乳动物细胞中的表达水平,为进一步研究奠定了基础。
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- 外膜蛋白Omp22作为鲍曼不动杆菌疫苗靶点的应用
- 本发明涉及分子生物学及免疫学领域，具体的说，本发明提供了一种鲍曼不动杆菌的亚单位疫苗抗原蛋白与其应用方法。鲍曼不动杆菌外膜蛋白Omp22的基因核酸序列如序列表SEQ？IDNO:1所示，其编码的蛋白即为鲍曼不动杆菌亚单位疫...
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- 新型纳米级基因工程疫苗构建的关键技术及应用
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- 传统的基于病原体灭活或减毒活疫苗具生产成本高、含毒性致病物质、减毒株突变及部分疾病用传统的疫苗防治收效甚微等缺点，且一些不能体外培养或具免疫病理作用的病原体无法研制减毒及灭活疫苗，另外还有很多危害严重的传染性疾病无法通过...
- 关键词：
- 关键词：基因工程疫苗传染性疾病
- 呈递SARS-COV-2的RBM不同区域肽表位的病毒样颗粒疫苗构建方法
- 本发明涉及一种呈递SARS‑COV‑2的RBM不同区域肽表位的病毒样颗粒疫苗构建方法，包括以下步骤：在SARS‑COV‑2的RBM中筛选不同的肽表位，将该基因插入到乙肝病毒核心抗原HBcAg的78‑79位氨基酸之间，得到...
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- 文献传递
- 共表达构建呈现人白细胞介素-13抗原肽的Qβ噬菌体病毒样颗粒被引量：1
- 2018年
- 目的：构建呈现人白细胞介素-13（interleukin-13,IL-13）抗原肽的Qβ噬菌体病毒样颗粒（virus-like particles,VLPs）疫苗。方法：将人IL-13抗原肽经基因重组插入Qβ噬菌体衣壳蛋白（CP）的C端。在BL21细菌中,经IPTG诱导CP及C端接有IL-13抗原肽的CP（CP/IL-13）同时表达。以硫酸铵沉淀及蔗糖密度梯度离心进行VLPs纯化及分析嵌合VLPs的存在,以HPLC分析VLPs纯度,以电镜观察颗粒形态。小鼠经皮下免疫VLPs后采集血清,以ELISA检测人IL-13特异性Ig G抗体水平。结果：重组蛋白CP与CP/IL-13获得成功表达,两者在密度梯度离心中有一致的、与QβVLPs相同的沉降行为,而CP/IL-13单独无Qβ颗粒行为。经纯化获得了高纯度颗粒,嵌合颗粒与Qβ颗粒形态相似。此外,该VLPs疫苗诱导小鼠产生了IL-13特异的抗体应答。结论：利用共表达策略可成功构建呈现人IL-13抗原表位的嵌合VLPs,为以主动免疫方式调控IL-13在疾病中的病理作用,提供了具有临床应用潜能的疫苗形式。
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- 关键词：白细胞介素-13病毒样颗粒
- 重组人VEGF多肽肿瘤疫苗
- 本发明公开了一种重组人VEGF多肽肿瘤疫苗，利用人工合成的方法获得人VEGF抗原表位核酸序列，将其插入噬菌体Qβ外壳蛋白基因的C末端，利用共表达系统在大肠杆菌BL21（DE3）中同时表达噬菌体Qβ外壳蛋白以及C末端插有人...
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- 文献传递
- 埃博拉病毒GP和VP40蛋白在哺乳动物细胞中的共表达及病毒样颗粒装配被引量：1
- 2016年
- 目的:制备基因重组埃博拉病毒样颗粒,为疫苗研究及埃博拉病毒特异抗原、抗体检测提供基础。方法:根据埃博拉病毒扎伊尔株的GP和VP40蛋白氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成GP和VP40基因片段并分别构建于表达质粒pcDNA3.1或同时构建到具有双表达单元的质粒pBudCE4.1;重组质粒经lipofectamine2000转染293FT细胞;以Western blot检测重组蛋白GP和VP40的表达;通过电镜观察病毒样颗粒。结果:构建的重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功;Western blot结果显示,共转染分别表达GP和VP40的两个质粒或转染共表达两个蛋白的质粒都发现GP特异反应条带产生,且大小与预期相符,此外,转染共表达质粒产生的GP蛋白表达明显强于两个质粒共转染,并同时可检测到VP40的表达;电镜观察到典型的丝状的埃博拉病毒样颗粒。结论:在293FT细胞中基因优化的埃博拉病毒GP和VP40可有效表达并装配为病毒样颗粒,为进一步研究奠定了基础。
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- 关键词：埃博拉病毒病毒样颗粒
- 自组装肽折叠形成的纳米纤维抗肿瘤疫苗及方法
- 本发明涉及一种自组装肽折叠形成的纳米纤维抗肿瘤疫苗及方法，属于分子生物学及免疫学技术领域。本发明将HPV16 E7<Sub>44‑62</Sub>肽通过Ser‑Gly‑Ser‑Gly，连接到自组装肽Q11的N段，在1×P...
- 马雁冰李思瑾张启书谢航航白红妹黄惟巍孙文佳
- 一种通用的细菌疫苗的制备方法和应用
- 本发明提供了一种通用的细菌疫苗的制备方法和应用，本发明的制备方法是利用超高压强驱动细菌通过裂缝后形成稳定的细菌生物膜囊泡(BBV)，通过该方法，可驱动包括多种革兰氏阴性及革兰氏阳性耐药细菌，以及非耐药细菌产生BBV。BB...
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- 文献传递
- 重组小鼠白细胞介素-33的原核表达制备及其粘膜免疫佐剂活性
- 2017年
- 目的:白细胞介素(IL)-33对树突状细胞、巨噬细胞及T细胞等免疫细胞具有重要调控作用。利用大肠杆菌制备重组小鼠的IL-33,并初步考察其作为粘膜免疫佐剂应用的潜能与特点。方法:以IPTG诱导硫氧还蛋白(Trx)/IL-33融合蛋白在大肠杆菌DH5α中的表达,并通过QSepharose离子交换和Ni^(++)金属螯合亲和层析纯化Trx/IL-33,进一步经肠激酶切割获得成熟形式的IL-33。重组HBcAg混合纯化的IL-33后经滴鼻免疫小鼠,考察HBcAg特异的IgA及IgG_1、IgG_(2a)的应答。结果:纯化的重组IL-33具有与标准品相当的促巨噬细胞RAW264.7表达TNF-α的体外细胞生物学活性。作为佐剂可显著增强滴鼻粘膜免疫激发的不同粘膜组织中HBcAg特异的IgA应答,以及血清与支气管肺泡灌洗液中特异IgG_1的应答水平,而抑制IgG_(2a)应答。结论:利用大肠杆菌可制备活性IL-33,其具有粘膜免疫佐剂的应用潜能。
- 冯雪军龙琼龙琼黄惟巍刘存宝黄惟巍孙文佳刘存宝马雁冰
- 关键词：白细胞介素-33粘膜免疫佐剂
