黄俊
- 作品数：6 被引量：1H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 原发性色素性结节状肾上腺皮质病一例报告
- 2015年
- 患者,女,23岁.2015年3月10日因体质量增加、出现皮肤紫纹2年,血压升高1个月入院.未婚未育.口服硝苯地平控释片30 mg,2次/d,血压控制不佳;无糖尿病史.心脏黏液瘤手术史5年.发病以来月经不规律.查体：血压最高达240/190 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）;满月脸,水牛背,皮肤明显紫纹,可见痤疮和多毛.实验室检查：血浆促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone,ACTH）＜0.2 pmol/L（正常值1.6～ 13.9 pmol/L）,血皮质醇628 nmol/L （正常值171～563 nmol/L）;大、小剂量地塞米松试验均不能被抑制,尿儿茶酚胺正常.
- 黄俊黄晨陈立军吴世奎
- 关键词：血浆促肾上腺皮质激素硝苯地平控释片血压控制不佳皮肤紫纹体质量增加心脏黏液瘤
- K-ras原核表达载体的构建及生物学功能研究
- 2017年
- 目的:构建带Myc标签的K-ras原核表达载体,并初步鉴定其生物学活性。方法:利用PCR技术从人乳腺文库中扩增人K-ras结构域的基因编码序列,插入载体p XJ-40得到重组质粒,经Bam HⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定后,Western印迹检测其在人293T细胞中的表达;利用GST pull down实验检测与Raf1-RBD的结合情况,验证其生物性活性。结果:用PCR技术从人乳腺文库中扩增得到约570 bp的目的片段,插入载体p XJ-40后构建了Myc-K-ras重组质粒,并经酶切鉴定及测序证实无误;Myc-K-ras能在293T细胞中正确表达,并能与Raf1-RBD结合,具有生物学活性。结论:为进一步研究K-ras的生物学功能奠定了重要基础。
- 陈思禹崔越洪甜李玲晋帅黄俊尤文叶韩笑叶棋浓刘阳王钰琦
- 关键词：原核表达
- 人ERK2基因对人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞生长的影响
- 2017年
- 目的:构建携带Myc标签的人细胞外信号调节激酶2(ERK2)的真核表达载体,表达Myc-ERK2融合蛋白,检测其对人视网膜母细胞瘤细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从乳腺文库中扩增人ERK2基因序列,将其插入pXJ-40载体;将重组质粒与空载体转染人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞系后,Western印迹检测表达情况,并进行生长曲线实验。结果:双酶切和测序鉴定表明Myc-ERK2真核表达质粒构建成功;转染WERI-Rb-1细胞后融合蛋白获得表达,生长曲线实验结果表明ERK2可促进肿瘤细胞的生长。结论:携带Myc标签的人ERK2基因的真核表达载体能在人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞中表达,且能促进该细胞的生长。本实验为进一步研究ERK2在肿瘤尤其是眼恶性肿瘤中的功能奠定了基础。
- 韩笑刘莹梁迎春闫志风徐小洁梁九思洪甜尤文叶陈思禹黄俊叶棋浓刘丹
- 关键词：真核表达
- 人Six1基因促进肺腺癌细胞A549的增殖被引量：1
- 2017年
- 目的:构建带有Flag标签的Six1基因的慢病毒表达载体,并对表达产物Flag-Six1的生物学功能进行初步鉴定。方法:以实验室构建的真核表达载体myc-Six1为模板,根据实验需求合成引物,经PCR扩增,酶切后插入pCDHFlag载体,Western印迹检测其在人293T细胞中的表达;经Western印迹鉴定无误后,与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染人肺癌细胞A549,经嘌呤霉素筛选2周,收集部分细胞,用Western印迹验证蛋白水平的表达,并通过细胞生长实验检测Six1对A549细胞生长的影响;提取RNA,通过qRT-PCR检测细胞中血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)在mRNA水平的变化。结果:构建的慢病毒表达载体pCDH-Flag-Six1能够在293T细胞中正确表达;包装成慢病毒,感染肺癌细胞A549后可正常表达;生长曲线表明Flag-Six1可促进人肺癌细胞A549的繁殖;qRTPCR结果表明Six1可升高肺癌细胞A549的VEGF-C转录水平。结论:构建了带pCDH-Flag标签的人Six1基因慢病毒表达载体,Flag-Six1能够在肺癌细胞系A549中表达,并能促进细胞增殖,这为进一步研究Six1的生物学功能奠定了重要基础。
- 陈思禹李玲晋帅洪甜黄俊尤文叶韩笑崔越叶棋浓王钰琦
- 关键词：慢病毒表达载体生物学功能
- 人酪蛋白激酶1激酶区真核表达载体的构建及鉴定
- 2016年
- 目的:构建带Flag标签的酪蛋白激酶1α(CK1α)激酶区截短突变体CK1α(1-285aa)的真核表达载体,获得其表达产物,并验证该激酶区与已知相互作用蛋白Myc-Cdc25A之间的相互作用。方法:用PCR技术从人全长CK1α真核表达载体中扩增CK1α(1-285aa),将其克隆到Flag载体中,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测其在人293T细胞中的表达情况,免疫共沉淀分别检测Flag-CK1α全长、Flag-CK1α(1-285aa)与Myc-Cdc25A的相互作用。结果:双酶切和基因测序鉴定显示Flag-CK1α(1-285aa)真核表达载体克隆构建成功;Western印迹结果表明Flag-CK1α(1-285aa)转染人胚肾细胞293T细胞后获得表达;免疫共沉淀结果显示Flag-CK1α全长、Flag-CK1α(1-285aa)与Myc-Cdc25A在蛋白质水平上具有相互作用,证实其具有生物学活性。结论:构建了Flag-CK1α(1-285aa)的真核表达载体,为进一步探讨Flag-CK1α激酶区对细胞信号通路的调节作用奠定了实验基础。
- 尤文叶褚春雨徐小洁梁迎春洪甜黄俊韩笑叶棋浓杨俊兰李瑛
- 关键词：真核表达CDC25A
- 人赖氨酸乙酰基转移酶7结构域蛋白的原核表达及纯化
- 2016年
- 目的:克隆人赖氨酸乙酰基转移酶7(KAT7)的2个功能结构域基因,获得其原核表达产物,并纯化蛋白。方法:采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人KAT7基因的2个功能结构域(1-330aa)和(331-611aa)编码片段,将其克隆到p ET28a载体中,在大肠杆菌Rossate中表达后,对原核表达产物进行纯化,以SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达与纯化产物。结果:从人乳腺文库中分别扩增获得约990和840 bp的DNA片段,并克隆至p ET28a载体,测序结果表明与目的序列完全一致;在大肠杆菌Rossate中诱导表达出相对分子质量分别约为42 000和36 000的目的蛋白,经纯化后获得了纯度较高的重组蛋白KAT7(1-330aa)和(331-611aa)。结论:获得了重组蛋白KAT7(1-330aa)和(331-611aa),为后续研究KAT7与肿瘤调控奠定了实验基础。
- 黄俊麦海星徐小洁梁迎春尤文叶李玲高风叶棋浓陈立军
- 关键词：原核表达纯化
