张梦
- 作品数：17 被引量：25H指数：3
- 供职机构：徐州市中心医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 大学生物化学教学中培养学生科研兴趣及创新能力的思考被引量：5
- 2018年
- 以生物化学教学为例,分析教学过程中培养学生科研兴趣的方法与实践,从教学内容、教学方法和教学评价等方面改革大学生物化学课程教学,拓宽学生知识面,培养学生进行科学研究的兴趣,激发其创新思维。
- 王中山张梦
- 关键词：教学评价
- ETAR-C58多肽生物合成及其对黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭的影响被引量：1
- 2021年
- 目的获得ETAR羧基末端58个氨基酸的多肽(ETAR-C58),探讨其对黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭的影响。方法通过PCR方法获得ETAR-C58碱基序列,将其克隆到原核表达载体pWaldoGFPe,转化到大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达后,经镍柱亲和层析和分子筛层析,得到重组融合多肽,SDSPAGE分析多肽表达量和纯度,免疫印迹做进一步的鉴定。最后采用Transwell法测定A375细胞的迁移和侵袭能力。结果成功构建了重组表达载体pWaldo-ETAR-C58,优化表达条件获得了约90%的可溶性蛋白表达量,纯化获得纯度高达95%的融合多肽,免疫印迹的曝光条带和重组多肽的大小相一致,加入2μmol/L ETAR-C58后,A375细胞的迁移和侵袭能力显著下降(P <0.05)。结论 ETAR-C58多肽具有抗黑色素瘤的活性,为下一步的临床应用奠定了良好的基础。
- 张飞飞张梦王中山
- 关键词：黑色素瘤细胞迁移细胞侵袭
- 沙门伤寒杆菌内膜蛋白GsiD的表达纯化与相互作用
- 2017年
- [目的]克隆沙门伤寒杆菌gsiD编码序列并在大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)进行过表达,纯化GsiD蛋白质并研究其相互作用关系。[方法]使用GFP作为融合蛋白质标签,优化蛋白质表达和纯化过程,使用位于GFP末端的8×His作为标签进行Ni柱纯化。Gsi A、B、C和D之间的相互作用通过细菌双杂交方法进行验证。[结果]成功构建gsiD过表达载体,优化了GsiD的表达和纯化条件,每1 L培养基可获得约0.4 mg的GsiD蛋白质;内膜蛋白GsiD能够和内膜蛋白质Gsi C发生相互作用,同时GsiD能够和ATP结合蛋白质Gsi A发生相互作用,却不会和Gsi B发生相互作用。[结论]首次克隆并研究了沙门伤寒杆菌gsiD基因,为进一步研究谷胱甘肽转运的机制奠定基础。
- 王中山张梦夏晓琨
- 关键词：谷胱甘肽膜蛋白蛋白质相互作用
- 高级别卵巢浆液性癌组织中ETAR mRNA表达的临床意义及ETAR来源融合多肽抑癌作用的研究
- 2023年
- 目的探讨高级别卵巢浆液性癌(HGSOC)组织中内皮素A受体(ETAR)表达的临床意义;设计ETAR羧基末端(ETAR-C)氨基酸序列来源的ETAR-C融合多肽,研究其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞的体外抑癌作用。方法(1)选择2007年1月1日至2017年12月31日在徐州市中心医院接受手术治疗、术后病理检查确诊为HGSOC且有完整临床病理资料及随访资料的患者共126例,收集其癌组织标本,采用逆转录-PCR技术检测HGSOC组织中ETAR mRNA的表达,并分析其临床意义。(2)以ETAR-C氨基酸序列为基础设计ETAR-C融合多肽,通过体外表达、纯化ETAR-C融合多肽,采用划痕实验、侵袭实验分别检测ETAR-C融合多肽处理后卵巢癌SKOV3和CAOV3细胞的迁移、侵袭能力,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测ETAR-C融合多肽处理后顺铂耐药卵巢癌SKOV3/cDDP和CAOV3/cDDP细胞的化疗敏感性,蛋白印迹(western blot)法检测ETAR-C融合多肽处理后卵巢癌SKOV3和CAOV3细胞中β抑制蛋白1(β-arrestin-1)的表达。结果(1)HGSOC组织中ETAR mRNA的相对表达水平为18.6±5.1,X-Tile软件分析显示最佳截断值为61.7%,据此将HGSOC患者分为ETAR mRNA高表达(76例)和低表达(50例)。ETAR mRNA高表达与HGSOC患者的腹水量、铂类药物耐药和血清癌抗原125(CA125)水平均显著有关(P均<0.05),而与HGSOC患者的年龄、术后残留灶大小无关(P均>0.05);ETAR mRNA高表达和低表达患者的5年无进展生存率分别为18.4%、28.0%,5年总生存率分别为38.2%、52.0%,两者分别比较,差异均有统计学意义(P=0.046,P=0.034)。(2)划痕实验和侵袭实验结果均显示,内皮素1(ET-1)、ET-1+ETAR-C分别处理后SKOV3和CAOV3细胞的划痕愈合率和细胞侵袭率分别比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。MTT比色法检测显示,加入不同浓度(4、6、8、10、12、24μg/ml)顺铂后,ETAR-C融合多肽处理后的SKOV3/cDDP和CAOV3/cDDP细胞的抑制率均显著高于对照细胞(P均<0.05)。western blot法检测显示
- 张艳玲夏晓琨张梦
- 关键词：细胞运动
- TAT介导多肽药物过表达纯化和穿膜活性检测被引量：1
- 2018年
- 目的:获得NR2B羧基端多肽(NR2Pep),探讨TAT-NR2Pep在细胞中的跨膜特性。方法:利用酶切连接方法构建p Waldo-TAT-pep质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,检测不同浓度诱导剂和不同温度对蛋白质表达的影响;利用镍柱亲和层析及分子筛方法纯化TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白,利用GFP发荧光的特性采用In-gel检测蛋白质的表达情况;以融合蛋白C端His标签特异性抗体,通过Western印迹确定融合蛋白的表达;荧光显微镜下观察TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白在CHO和C2C12等细胞中的跨膜活性。结果:构建了TAT-NR2Pep-GFP表达载体,重组菌经0.1 mmol/L IPTG于22℃诱导20 h能够表达较多高质量的目标蛋白;In-gel荧光检测证实融合蛋白TATNR2Pep-GFP拥有正确构象,GFP能够发出绿色荧光;Western印迹分析表明融合蛋白相对分子质量符合预期;细胞穿膜实验证实TAT能够介导多肽穿过细胞膜。结论:原核表达并纯化得到TAT-NR2Pep-GFP融合蛋白,该蛋白散发绿色荧光,能够穿过细胞膜。
- 王中山张梦张美娴陈淑漫朱焘方佳炜杨静戴毅
- 一种多肽TAT-M3R1C及其应用
- 本发明公开了一种多肽TAT‑M3R1C及其应用，该多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；其中，1‑11位为穿膜肽TAT，12‑54位为M3R1C。本发明提供的多肽TAT‑M3R1C来源于M3R羧基末端，该多肽TA...
- 张梦张艳玲王中山
- 大肠杆菌UvrB基因的克隆、表达与功能研究被引量：1
- 2020年
- [目的]在大肠杆菌表达系统表达UvrB蛋白,优化其表达和纯化的条件,并初步研究其对抗紫外线伤害的功能。[方法]克隆大肠杆菌MG1655菌株UvrB编码序列,采用酶切连接的方法构建表达载体p Waldo-GFP-UvrB,并转入BL21(DE3)表达菌株诱导蛋白质表达,采用Ni-NTA亲和层析以及分子筛层析的方法纯化蛋白质,采用紫外光刺激的方法研究其细胞内功能。[结果]成功构建UvrB表达载体,获得UvrB在BL21(DE3)中重组菌株,其表达条件为22℃,0. 2 mmol/L IPTG诱导20 h,UvrB以可溶蛋白的形式存在。SDS-PAGE结果显示UvrB蛋白质分子量约76 k Da与预期相符;经纯化后UvrB蛋白质得率约为0. 6 mg/L培养基,纯度> 85%,为其进一步研究奠定了基础。[结论]研究克隆并构建了大肠杆菌UvrB蛋白的原核表达体系,优化了其纯化方案,得到纯度> 85%的可溶UvrB蛋白质,为进一步研究UvrB蛋白质功能奠定了基础。
- 方佳炜张梦杨一鸣叶依杨王中山
- 关键词：UVRBDNA损伤切除修复蛋白表达蛋白纯化
- TAT-MC4R1的表达纯化及其减重作用
- 2023年
- [目的]体外表达并获得有活性的TAT-MC4R1,探讨其减重作用。[方法]PCR法克隆MC4R羧基末端序列并构建pWaldo-MC4R1质粒,转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3),优化表达温度和诱导剂IPTG浓度;利用镍柱亲和层析与分子筛层析方法纯化得到TAT-MC4R1蛋白质;构建小鼠模型,检测TAT-MC4R1对小鼠体重的影响。[结果]成功构建pWaldo-MC4R1表达载体,0.1 mmol/L IPTG、25℃诱导培养20 h,蛋白质以可溶形式高效表达;动物模型证实TAT-MC4R1能够安全有效减重。[结论]以0.1 mmol/L IPTG于25℃诱导培养20 h,每1 L细胞培养基可获得约1.2 mg的TAT-MC4R1蛋白,蛋白纯度超过90%。最终获得的TAT-MC4R1能够安全有效减轻小鼠体重。
- 李俊良李健王中山张梦
- 关键词：减重多肽蛋白表达
- 情景模拟结合应急演练对妇产科医师规培教学效果的影响
- 2022年
- 就妇产科医师规培教学,将情景模拟+应急演练应用的效果加以明确。方法 样本名称:妇产科进行规范化培训实习医生,二零一八年十一月、二零二一年十一月为规培最远、最新记录,从规培的先后区分病人,使其进入2组,单组组成人数是40名,常规的教学方法实践于半数归为对照组,情景模拟结合应急演练实践于半数归为观察组。结果 就观察组、对照组的学生评判性思维测评各项目评估分值可以看出,教学措施实施前,2组无差别,差异教学后,前者的该分数相较于后者优势大一点,差别大(P<0.05);就观察组40例、对照组40例的自我管理能力、学习合作能力和信息能力评分考量一下看出,教学措施实施前,2组无差别,差异教学后,前者的该分数相较于后者优势大一点,差别大(P<0.05)。结论 就妇产科医师规培教学,将情景模拟+应急演练应用时,其规培教学效果明显好一些。
- 尹凤玲张梦贺厚光
- 关键词：情景模拟应急演练妇产科医师
- RRM2基因过表达卵巢癌细胞株SKOV3的构建及对顺铂敏感性观察被引量：2
- 2017年
- 目的构建核糖核苷酸还原酶亚基M2(RRM2)基因过表达的卵巢癌细胞株SKOV3,并观察RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性。方法提取SKOV3细胞总RNA,反转录得到c DNA,以其为模版进行PCR反应,获得RRM2基因。通过酶切(XhoⅠ、Bam HⅠ)连接的方法,将RRM2基因插入慢病毒表达载体p LVX-IRESZs Green1中,得到重组质粒p LVX-IRES-RRM2。利用脂质体将重组质粒转染293FT细胞,包埋病毒。将SKOV3细胞分为实验组和对照组,实验组转染p LVX-IRES-RRM2慢病毒,96 h后测算慢病毒感染效率。对照组不进行转染。采用Western blotting法检测两组细胞中的RRM2蛋白;流式细胞仪检测两组凋亡细胞与死亡细胞,反映细胞对顺铂的敏感性。结果重组质粒p LVX-IRES-RRM2经限制性内切酶XhoⅠ和Bam HⅠ双酶切验证,各片段大小符合预期,测序结果显示RRM2基因序列正确。实验组、对照组细胞中RRM2 mRNA相对表达量分别为0.280±0.055、0.102±0.022,RRM2蛋白相对表达量分别为0.582±0.049、0.228±0.032,实验组高于对照组,说明RRM2基因过表达的SKOV3细胞构建成功。实验组、对照组凋亡细胞比例分别为0.39%±0.08%、9.60%±1.20%,死亡细胞比例分别为26.65%±2.20%、44.96%±2.80%,实验组凋亡细胞比例和死亡细胞比例均低于对照组(P均<0.01)。结论成功构建了RRM2基因过表达的SKOV3细胞,RRM2基因过表达的SKOV3细胞对顺铂的敏感性降低。
- 王中山张梦张冬梅杨新慧
- 关键词：卵巢癌卵巢癌细胞株顺铂药物耐受性
