王宁宁
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 发文基金：国家自然科学基金吉林省教育厅基金吉林省科技厅国际合作项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 致病性阿米巴原虫疫苗研究进展被引量：2
- 2019年
- 阿米巴原虫在自然界广泛分布,可通过粪-口途径、黏膜直接接触等多途径进行传播,可产生特殊的酶类侵入并寄生在人体。由于早期诊断不及时、缺乏有效抗阿米巴感染的药物、难以阻断传播途径,所以预防至关重要。因此研发抗阿米巴原虫感染的疫苗对疾病的预防与传播具有重要意义。
- 王宁宁王宁宁曲寿月姜晓明时文艳时文艳冯宪敏
- 关键词：棘阿米巴疫苗研究
- 噬菌体治疗细菌感染的机制及现状被引量：5
- 2019年
- 噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌和螺旋体等微生物的病毒,具有体积小、无细胞结构、严格寄生的特性。根据其在敏感细菌体内增殖并裂解细菌的特性,可有效地治疗细菌感染。文章对噬菌体治疗细菌感染的机制及治疗现状做一综述。
- 王宁宁王宁宁尚津宇张浩肖波李佳佳冯宪敏
- 关键词：细菌感染
- FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌发酵表达条件的优化被引量：1
- 2016年
- 本研究对影响FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌发酵条件的因素进行了优化。采用正交试验确定FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌的最佳LB培养基配方,利用SDS-PAGE电泳检测不同发酵条件对FGF21(L^(59)R)突变体蛋白表达情况。LB培养基最佳配比(g/L):蛋白胨11,酵母粉6,氯化钠10,葡萄糖1;在此基础上优化基因工程菌发酵条件,确定LB培养基p H 6.5~7.2,装液量(溶解氧)20%,菌体密度(A_(600))1.0,IPTG浓度0.6 mmol/L,37℃条件下诱导5 h,突变体蛋白的表达量由优化前的12%提高至35%。结果表明,培养基配方、p H、装液量(溶解氧)、菌体密度(A_(600))、IPTG浓度、温度、诱导时间均对FGF21(L^(59)R)突变体基因工程菌表达量有影响。
- 陈秋池王会岩朱文赫董媛王宁宁李艳
- 关键词：基因工程菌发酵
- 棘阿米巴HSP20蛋白的原核表达及免疫原性鉴定被引量：1
- 2020年
- 目的重组表达棘阿米巴热休克蛋白20(Heat shock protein 20,HSP20),并对HSP20作为疫苗候选分子的免疫活性进行验证。方法以棘阿米巴滋养体cDNA为模板,PCR扩增HSP20基因,构建pET-22b-HSP20原核表达载体,并将其转化大肠杆菌感受态细胞BL21;采用1mmol/L IPTG诱导重组HSP20蛋白(Recombinant heat shock protein 20,rHSP20)表达,并进行可溶性分析。采用His亲和层析法纯化r-HSP20,并免疫家兔制备兔多克隆抗体;采用ELISA试剂盒检测多克隆抗体IgG1及IgG2a分型;Western blot鉴定r-HSP20的免疫反应性。结果经PCR扩增得到579bp的目的基因片段,与预期大小一致;经菌落PCR及双酶切证明成功构建pET22b-HSP20原核表达载体;经可溶性分析r-HSP20主要存在于重组菌超声破碎上清中;经SDS-PAGE鉴定柱层析300mmol/L咪唑洗脱的蛋白为高纯度r-HSP20;用该蛋白免疫获得的兔多克隆抗体效价为1∶12800,其抗体亚型IgG1及IgG2a含量分别为183.8mg/ml和21.4mg/ml;Western blot鉴定r-HSP20能被兔多克隆抗体识别。结论成功构建pET-22b-HSP20原核表达载体,获得高纯度r-HSP20蛋白。抗体分型检测证明r-HSP20具有高效诱导体液免疫应答和细胞免疫应答的免疫原性,并具有良好的免疫反应性。
- 王宁宁郑文彧郑文彧孙宏宇王月华李婷婷曲寿月冯宪敏冯宪敏
- 关键词：棘阿米巴原核表达载体多克隆抗体制备
- pEASY-TAZ-5原核表达载体的构建及在大肠杆菌中表达
- 2016年
- TAZ基因在心磷脂代谢异常导致线粒体功能障碍中起重要作用。本研究旨在构建人TAZ-5(h TAZ-5,Δ5)的基因工程菌,用乳糖诱导TAZ-5蛋白的表达,为后续h TAZ-5纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定基础。以h TAZ全长为材料,通过PCR方法扩增人h TAZ-5基因,将其插入到原核表达载体p EASY中。经菌落PCR筛选阳性克隆,并通过DNA测序确定原核表达载体p EASY-TAZ-5构建成功。将p EASY-TAZ-5转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞Transetta(DE3)中,用乳糖诱导蛋白表达,分别对诱导剂浓度、时间、时机及温度等条件进行优化,确定最优的乳糖诱导条件,并对表达产物进行可溶性分析。结果表明PCR扩增出约786 bp的目的产物,与预期的片段长度一致;h TAZ-5蛋白最优表达条件为终浓度2.0 g/L乳糖、A600=0.8、37℃下诱导4 h,可以达到良好的诱导效果;收集菌体中的上清和沉淀,进行可溶性分析,目的蛋白以包涵体的形式存在。Western Blot分析表明重组蛋白TAZ表达成功。成功构建p EASY-TAZ-5原核表达载体,乳糖可诱导h TAZ-5(Δ5)基因表达,且效果很好。
- 王宁宁王会岩许会静张茹叶陈秋池李光宇
- 关键词：TAZ原核表达载体重组蛋白表达
- TAZ原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达
- 2015年
- 通过PCR方法扩增心磷脂酰基转移酶全长基因tafazzin,将其插入到原核表达载体p EASY中。经菌落PCR筛选阳性克隆,并通过DNA测序确定原核表达载体p EASY-TAZ构建成功。将p EASY-TAZ分别转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21(DE3)、BL21(DE3)pLys S和Transetta(DE3)中,以不同浓度的IPTG在不同温度条件下诱导TAZ蛋白表达,选择蛋白表达量较高的Transetta(DE3)菌株作为工程菌。结果显示,重组蛋白表达量随IPTG浓度的提高而增加;温度对TAZ蛋白原核表达有重要影响,低温条件(16℃)可以提高重组蛋白的可溶性。经Western blot试验证实重组蛋白TAZ表达成功。
- 许会静王宁宁刘磊董媛王会岩
- 关键词：TAFAZZIN原核表达重组蛋白表达
