孙明宽
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：东南大学生命科学研究院发育与疾病相关基因教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗醛糖还原酶单克隆抗体的制备与特性鉴定
- 2005年
- 目的: 制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1) mAb进行比较. 方法: 经RT-PCR获得AR基因, 将基因插入Pgex- 4T-1(His)6C中, 构建重组质粒Pgex- 4T-1(His)6C-AR, 以重组质粒转化E.coli Rosetta诱导表达GST-AR蛋白.以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb.应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定.使用Clustalx和 Antheprot软件, 比较AR与ARL-1的同源性, 表达GST-Dar[80～142氨基酸(aa)], 与ARL-1差异较大; 并分析AR的抗原性, 表达GST-Da1(1～79 aa)、GST-Da2(80～99 aa)、 GST-Da3(111～142 aa)、 GST-Da4(143～316 aa).利用AR全长及截短蛋白, 采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位.结果: 获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、 AR7B3G4和ARF10.3株抗GST-AR的 mAb均为IgG1(κ型), 腹水mAb效价为1∶ 4×105, 细胞培养上清mAb效价为1∶ 1×104, 3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应, 而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应.它们分别为抗GST-Da1、GST-Da3和GST-Da4蛋白的mAb.结论: 成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的 1～79、111～142、143～316位氨基酸.将它们与抗ARL-1 mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能, 并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具.
- 马达金俊飞孙明宽单军张建琼谢维
- 关键词：醛糖还原酶单克隆抗体
- 抗果蝇ECP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的: 制备抗果蝇ECP蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法: 用大肠杆菌表达并纯化的GST-ECP融合蛋白, 免疫6～8 wk的雌性BALB/c小鼠, 取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 经间接ELISA筛选和克隆化培养制备杂交瘤细胞系.用间接ELISA及Western blot等方法对mAb的Ig亚类(型)、腹水效价及特异性进行鉴定.结果: 获得1株杂交瘤细胞株, 命名为8G9.Ig亚类(型)鉴定表明, 此株mAb为IgG1(κ型).腹水mAb的效价为 1∶ 1×105.Western blot分析表明, 该株mAb可与果蝇的幼虫、蛹及成虫组织中表达的ECP特异性结合, 可特异性的识别ECP抗原的231～300aa区段.结论: 获得1株能稳定分泌抗ECP mAb的细胞株, 为进一步研究ECP的功能奠定了基础.
- 刘加彬汪道涌孙明宽徐敏刘琍谢维
- 关键词：黑腹果蝇ECP单克隆抗体抗原表位
- 果蝇神经粘附分子Neuroligin及其相关蛋白在突触发育中的功能研究
- 神经细胞的分化、发育与细胞间非对称联结密切相关，其中跨膜蛋白在细胞间的信息传递方面起着十分重要的作用。Neurexin和Neuroligin是一对异源性相互作用的神经粘附分子，它们在跨突触前、后膜的桥接中起着重要的作用。...
- 孙明宽
- 关键词：果蝇突触发育跨膜蛋白
- 利用DNRX-Gal4研究果蝇Neurexin的时间和空间表达模式被引量：1
- 2015年
- 果蝇Neurexin(DNRX)在突触的结构发育和突触功能上发挥着重要的作用.然而迄今为止,DNRX的时间和空间表达模式还没有被系统地研究.本研究建立了一株新的DNRX-Gal4转基因果蝇品系,评价了这株转基因Gal4品系在三龄幼虫脑中的表达模式,发现其与内源性的DNRX的表达模式是一致的.接下来利用DNRX-Gal4/UAS-Reporter系统地分析了DNRX在时间和空间上的表达模式.结果显示,DNRX在胚胎、幼虫和成虫时期均表达在中枢神经元和运动神经元,而在神经胶质细胞没有表达.在果蝇神经肌肉接头(NMJs)中,DNRX既表达在突触前也表达在突触后区域.DNRX也被发现表达在唾液腺、肠、翅膀和腿.在成虫脑中,DNRX表达在许多不同的脑区,包括蘑菇体(MBs)、触角叶(AL)和视盘.有趣的是,DNRX在控制节律的颜料释散因子(PDF)阳性的clock神经元里也有表达,同时发现DNRX在蘑菇体的表达是与果蝇的嗅觉联想式学习记忆相关的.
- 孙明宽曾宪坤谢维
- 关键词：果蝇NEUREXIN运动神经元神经肌肉接头
