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张睿: 作品数：13 被引量：83H指数：6; 供职机构：首都医科大学中医药学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市教育委员会科技发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>

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TwHMGR过表达对雷公藤甲素和雷公藤红素生物合成的影响被引量：9: 2018年; 雷公藤3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(Tripterygium wilfordii 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A reductase,Tw HMGR,Gen Bank:ALU11310.1 3)是MVA途径中的第一个限速酶,是细胞质中萜类代谢途径中的重要调控位点。为探讨Tw HMGR对雷公藤甲素和雷公藤红素生物合成的影响,对其进行了过表达研究。利用Gateway技术将Tw HMGR的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)构建到过表达载体中,通过基因枪介导过表达载体转入雷公藤悬浮细胞。q RT-PCR结果显示Tw HMGR的基因相对表达量在过表达组显著提高,是空载体组基因相对表达量的1.75倍;UPLC结果显示雷公藤甲素及雷公藤红素含量在过表达组中分别提高为空载组的163.93%和190.04%。本实验中Tw HMGR在雷公藤悬浮细胞中成功过表达,表现为基因相对表达量的上升和雷公藤甲素及雷公藤红素含量的上调,证明了Tw HMGR在雷公藤萜类成分生物合成途径上的正向调节作用,为雷公藤重要活性萜类成分的合成生物学研究奠定了基础。; 王家典赵瑜君张逸风张逸风卢鋆卢鋆周家伟张睿张睿高伟; 关键词：过表达雷公藤甲素雷公藤红素基因枪

不同浓度脱落酸对雷公藤悬浮细胞萜类次生代谢产物累积的影响被引量：10: 2018年; 目的:研究不同浓度脱落酸(Abscisic acid,ABA)对雷公藤悬浮细胞中萜类次生代谢产物的诱导效应,探讨脱落酸的毒物效应(Hormesis)。方法:雷公藤悬浮细胞继代培养10 d后,分别加入不同浓度(10μM,20μM,50μM,100μM,150μM,200μM,500μM)的ABA诱导,并设置空白对照组,每组生物学重复4次。分别采用HPLC和UPLC检测诱导后0 h和240 h的样品,测定悬浮细胞中雷公藤甲素、雷酚内酯、雷公藤红素和雷公藤内酯甲4种萜类成分的含量。结果:当ABA浓度为10μM和20μM时,诱导组与对照组无差异;50μM时,与对照组比较,雷酚内酯含量明显升高,雷公藤红素含量升高至2.4倍,雷公藤内酯甲含量升高至4.7倍;当诱导浓度超过100μM时,与对照组比较,除雷公藤内酯甲外,雷公藤甲素、雷酚内酯、雷公藤红素含量均显著降低。结论:ABA在10~500μM范围内对不同的雷公藤萜类成分影响作用不同,从整体趋势看,呈现为β曲线,符合Hormesis效应特点;50μM时ABA对雷公藤红素含量的积累有显著促进作用,为后期研究ABA影响雷公藤红素合成机制奠定基础。; 张睿吴晓毅马宝伟陈上王秀娟高伟黄璐琦; 关键词：脱落酸雷公藤悬浮细胞萜类成分

HPLC法测定民族药材青阳参中青阳参苷乙的含量被引量：1: 2016年; 目的：建立反相高效液相法测定民族药材青阳参中青阳参苷乙的含量。方法：采用YMC-Pack ODS-A C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-水（53∶47）,检测波长223 nm,流速为1.0 m L·min-1,柱温为30℃。结果：青阳参苷乙在20.16～1008μg·m L-1范围内线性关系良好,该方法的精密度、稳定性、重复性、加样回收率试验RSD均小于2%,平均加样回收率为97.14%。结论：该方法准确、简便、灵敏度高,可作为青阳参药材的含量测定方法。; 昝珂张睿郑健过立农马双成; 关键词：青阳参 HPLC

雷公藤MCT基因RNAi对雷公藤萜类活性成分生物合成的影响被引量：6: 2018年; MCT是萜类生物合成MEP途径上重要的关键酶,本研究利用Gateway克隆重组技术构建TwMCT基因的RNAi表达载体,得到了大小为484 bp的载体片段。通过基因枪技术将TwMCT RNAi载体转入到雷公藤悬浮细胞。采用UPLC测定雷公藤萜类活性成分的含量,结果显示细胞中雷公藤甲素和雷公藤红素的含量相对于对照组p K7GWIWG2D分别下降了23.4%和42.8%。同时利用q RT-PCR检测TwMCT基因及萜类合成途径上主要基因的表达量,结果表明,相对于对照组p K7GWIWG2D,TwMCT表达量下降了29.2%,TwDXR、TwGGPS、TwHMGR和TwHMGS的相对表达量分别下降了36.3%、31.3%、62.2%和29.1%,但TwDXS的表达量上调了114.2%,而TwFPS没有显著性变化。本研究在体内验证了干扰TwMCT的表达对雷公藤萜类活性成分雷公藤甲素和雷公藤红素的积累有显著抑制作用,为进一步探究MCT基因对雷公藤萜类成分生物合成的调控机制奠定基础。; 宋雅迪赵瑜君陈上胡添源张睿王家典卢鋆王秀娟高伟黄璐琦; 关键词：雷公藤雷公藤甲素雷公藤红素

UPLC-MS/MS同时测定雷公藤悬浮细胞中8种萜类成分被引量：2: 2018年; 目的建立超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography triple quadrupole tandem mass spectrometry, UPLC-QQQ-MS/MS)同时测定雷公藤悬浮细胞中8种萜类成分的定量分析方法。方法采用Waters HSS T3 C18色谱柱,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.3 ml/min,柱温30 ℃。采用电离子喷雾源,选择正负离子交替扫描多反应离子检测模式。结果雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、去氢松香酸、雷酚内酯、去甲泽拉木醛、雷公藤褔啶、扁塑藤素和雷公藤红素8种萜类成分的检测限和定量限范围分别为0.009 6~0.248 0 ng和0.019 2~0.496 0 ng,线性关系良好,线性相关系数r在0.996 6~0.999 3之间,平均加样回收率为95.04%~105.20%,RSD为2.14%~6.31%。结论该定量分析方法简便、快捷、灵敏度强、准确性高,可同时定量测定雷公藤悬浮细胞中8种萜类成分的含量,为雷公藤及其植物组织培养物的研究和质量控制提供方法学依据。; 吴晓毅张可一张睿贾怡余慧芳; 关键词：雷公藤萜类悬浮细胞化学定量分析

基于网络药理学研究一贯煎治疗肝纤维化的有效成分及作用机制被引量：1: 2023年; 背景中药复方具有多成分综合调节的特点,在肝纤维化防治中显示出独特的优势.一贯煎始载于魏之琇所著《续名医类案》,是滋阴疏肝的著名方剂,能够改善肝纤维化症状,研究其抗肝纤维化机制有助于药物开发和推广.目的通过网络药理学探究一贯煎治疗肝纤维化的机制并实验验证.方法利用文献和TCMSP数据库收集一贯煎成分及靶点,GeneCard、OMIM数据库收集肝纤维化疾病靶点.通过STRING数据库构建一贯煎-肝纤维化蛋白互作网络(protein-protein interaction,PPI)子网络,应用重启随机游走算法获得关键基因,通过DAVID数据库进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析及京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析.动物实验验证,18只SD大鼠随机分为正常组、模型组、一贯煎组.模型组、一贯煎组大鼠采用腹腔注射50%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))橄榄油溶液造模6周,正常组注射等量橄榄油.造模结束后一贯煎组每天灌胃一贯煎溶液(6.67 g/kg)共4 wk,其他组灌胃等量蒸馏水,取血和肝脏.全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST).HE、Masoon染色观察肝脏病理学变化.Western blot法和qRT-PCR法检测肝脏关键蛋白表达水平和mRNA转录水平.结果筛选得到一贯煎成分52个,潜在作用靶点186个,肝纤维化疾病靶点1080个,得到一贯煎治疗肝纤维化的关键基因,其中亲和度前10的基因为STAT6、SRC、MAPK3、STX1A、EP300、STAT3、PLG、CTNNB1、CDKN1B、CANX,亲和度前50的基因KEGG富集得到PI3K-Akt信号通路、FoxO信号通路等134条.动物实验结果发现,一贯煎能够改善CCL4肝纤维化大鼠肝功能和减轻纤维化,降低α-肌动蛋白表达,促进信号转导和转录激活因子6(signal transducer and activator of transcription 6,STAT6)磷酸化,提高过氧化物酶体增殖物激活受体-γ; 崔欣怡姜晓丹李汶航张睿油红捷唐佐青马赟杨铮车念聪刘文兰; 关键词：一贯煎肝纤维化

植物激素对次生代谢产物的调控研究被引量：21: 2020年; 植物激素参与调节植物的生长发育进程,具有显著的生理活性。而植物的次生代谢产物是重要的药物和化工业原料来源,因其经济及药用价值受到广泛关注。随着生物技术的发展,研究发现植物激素对次生代谢产物的合成具有重要的调控作用。该文主要介绍植物中的常见激素如生长素、细胞分裂素、赤霉素、脱落酸、乙烯和茉莉酸甲酯的合成路径、信号传导机制及其对次生代谢产物的调控进展,从分子角度探讨其调节次生代谢物形成积累机制,有助于更好地了解植物激素的形成及其在次生代谢过程中发挥的关键作用,同时为合理利用植物激素,使其科学高效地提高植物内次生代谢产物的产量提供参考。; 张睿王秀娟高伟; 关键词：植物激素次生代谢产物

基于多指标综合评分和正交设计优化雷公藤悬浮细胞总萜类物质的提取工艺被引量：1: 2018年; 目的优化雷公藤悬浮细胞总萜类物质的提取工艺。方法采用UPLC-QQQ-MS测定雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素、雷酚内酯和雷公藤红素的含量。色谱条件为:Waters HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);0.1%甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱;柱温30℃;流速0.3 mL/min;进样量5μL。以3种萜类成分含量的综合评分为指标,在单因素试验的基础上,设计L9(34)正交试验优化甲醇浓度、提取时间和溶剂用量3个参数,并通过验证试验判断该工艺的可行性。结果雷公藤悬浮细胞萜类成分最佳提取工艺为:加入50倍量80%甲醇,浸渍12 h后,超声提取0.5 h,在此条件下,雷公藤甲素、雷酚内酯和雷公藤红素的提取量分别为(52.36±0.60)、(170.73±1.57)、(388.14±5.89)μg/g,综合评分稳定。结论基于多指标综合评分法和正交设计优化的雷公藤悬浮细胞总萜类物质提取工艺合理可行、重复性好,具有一定的实用性,适用于雷公藤悬浮细胞总萜类物质的大规模提取,可为雷公藤药用资源的开发利用提供参考依据。; 吴晓毅张可一张睿王昌海; 关键词：雷公藤悬浮细胞

款冬花中吡咯里西啶生物碱类成分质量控制研究进展被引量：10: 2021年; 款冬花是常用中药材之一,除有效成分外,还含有多种吡咯里西啶生物碱类成分,该类成分具有较强的肝毒性,但现行的质量标准中均没有对该类成分的限量控制和风险提示,长期服用该药材,存在较大的用药安全风险。本文对近年来款冬花中吡咯里西啶生物碱的化学成分、毒性研究和质量控制进行综述,以期为该药材的质量评价和用药安全提供参考。; 昝珂张睿李耀磊王莹刘丽娜王丹丹马双成金红宇; 关键词：款冬花吡咯里西啶生物碱肝毒性

一贯煎联合骨髓间充质干细胞调控RhoA/ROCK1通路抑制大鼠肝纤维化的实验研究被引量：11: 2022年; 目的:探究一贯煎联合骨髓间充质干细胞在治疗肝纤维化过程中对RhoA/ROCK1通路的作用。方法:将72只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、干细胞组、一贯煎+干细胞组;四氯化碳腹腔注射6周制备肝纤维化动物模型,干预4周后取材。记录大鼠阴虚表征情况;检测血清谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)含量;HE、Masson染色观察病理改变;实时PCR、蛋白质印迹法检测肝组织中RhoA、Rho相关激酶1(ROCK1)、α-SMA和COL-1 mRNA及蛋白表达;IHC检测α-SMA、COL-1阳性面积。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠具有明显阴虚表征,肝脏出现明显炎症浸润和纤维增生,肝组织RhoA、ROCK1、α-SMA、胶原蛋白-1(COL-1)mRNA与蛋白表达显著升高(P<0.05),α-SMA、COL-1阳性面积显著增加(P<0.05);与模型对照组比较,一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、骨髓干细胞、一贯煎+干细胞组大鼠的阴虚表征、肝脏炎症和纤维化程度减轻,RhoA、ROCK1、α-SMA和COL-1 mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05),α-SMA、COL-1阳性面积显著减少(P<0.05),其中一贯煎+干细胞组较一贯煎中剂量组、干细胞组效果更优(P<0.05)。结论:一贯煎与骨髓干细胞可通过调控RhoA/ROCK1通路抑制肝星状细胞活化从而发挥抗纤维化的作用,二者协同作用效果优于各自单独作用效果。; 李汶航张睿崔欣怡唐佐青油红捷杨铮付修文马赟刘文兰; 关键词：一贯煎肝纤维化骨髓干细胞冻干粉阴虚行为学

张睿

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