杨庆云
- 作品数：5 被引量：19H指数：2
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 嗜热脂肪芽孢杆菌中耐热蛋白酶基因的克隆被引量：17
- 1991年
- 用鸟枪法把嗜热脂肪芽孢杆菌313-1(供体菌)染色体上的蛋白酶基因克隆到质粒pPL603上,并在枯草杆菌中得到表达。此基因位于6.6kb的EcoRI酶切片段上,带有重组质粒的枯草杆菌所产生的蛋白酶活性比供体菌株约提高30倍左右。该酶的最适反应温度为75℃,最适pH为7.0左右,是一个中性蛋白酶,在80℃作用30min后仍保留85%以上的酶活。
- 杨庆云江行娟吴琳崔玉良杨树青
- 关键词：基因克隆基因
- 嗜热脂肪芽孢杆菌313-1启动基因在枯草杆菌中的克隆和表达
- 1991年
- 以启动子探测质粒pPL603为载体,克隆了嗜热脂肪芽孢杆菌313-1染色体中有启动功能的DNA片段。经酶切、连接,转化枯草杆菌,获得了6株氯霉素抗性水平达100 μg/ml的转化子。将重组质粒pPL603-2的插入片段(1.2 kb)移到载体pPL703中,仍能表现出启动功能。经同源性分析表明,重组质粒的插入片段确实来自嗜热脂肪芽孢杆菌。EcoR I,Bgl II,Hind III等11种限制性内切酶对该片段均不能酶切。经Bal-31酶切,将此插入序列缩小到0.54 kb后仍具有启动功能。
- 江行娟崔玉良杨庆云吴琳杨树青陈孝康
- 关键词：芽孢杆菌枯草杆菌克隆
- pUB110 DNA分子的紧密型结构被引量：1
- 1989年
- 经0.1%鸭血烯酸钠处理或经37℃溶菌酶作用的Bacillus subtilis BD366菌体,按碱法提取pUB110 DNA,可得到SC(超螺旋),OC(开环)和CT(Com-pact type,紧密型)结构的分子。SO和OC分子均可被EcoRⅠ,BamHⅠ和BglⅡ切成线状分子,但CT分子却不能。对pUB110DNA具有多切点的限制性内切酶Sau 3AⅠ对CT分子也不起作用。经86℃保温或沸水浴处理,CT分子能转变成SC和OC型,并可被Sau 3AⅠ酶切降解,推断CT结构可能是质粒的原始构型。
- 杨树青江行娟杨庆云崔玉良刘玉顺刘铁军
- 关键词：枯草杆菌脱氧核糖核酸
- 产耐热蛋白酶菌株的分离和酶性质的研究被引量：2
- 1993年
- 从南汇县黄路乡一草堆下的土壤中分离到一株产耐热蛋白酶的链霉菌.该酶的最适反应温度为70℃.在60℃时稳定,当80℃时处理10min,尚余84%活性.在Ca^(2+)存在的条件下,酶的热稳定性有显著提高.酶反应的最适pH为8.5,在pH5～9之间稳定,因此属于微碱性蛋白酶.通过抑制剂试验,该酶基本上被PMSF(苯甲基磺酰化合物)抑制,但不被金属螯合剂(EDTA,双吡啶)抑制.金属离子Cu^(2+),Zn^(2+),Fe^(2+)和Co^(2+)对酶有抑制作用,Ca^(2+)对酶有激活作用.
- 江行娟杨庆云陈孝康瞿史文胡斌崔玉良
- 关键词：链霉菌蛋白酶发酵
- 绛红色小单孢噬菌体MPh1在大肠杆菌中有启动子功能的DNA片段的克隆及顺序测定
- 1995年
- 从绛红色小单孢噬菌体Ｍｐｈ１ＤＮＡ中，用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＧＡ４６克隆到在大肠杆菌中具有启动子功能的ＤＮＡ片段，筛选到的启动子功能片段具有抗四环素能力达１００μｇ／ｍｌ以上。对这些活性片段进行分子杂交，证明确实来自绛红色小单孢噬菌体Ｍｎｈ１。在此基础上，对其中一个２５０ｂｐ长的片段从克隆位点的一端进行了ＤＮＡ序列分析，其结构类似于大肠杆菌启动子。并进行了Ｇ＋Ｃ百分比的统计和限制性内切酶位点分析。
- 周健明陈孝康杜艳王建红汪训明王顺德江行娟杨庆云
- 关键词：噬菌体克隆DNA测序
