曹蕾
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 供职机构：天津医科大学基础医学院药理学系更多>>
- 发文基金：天津市应用基础与前沿技术研究计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 生长分化因子15过表达对心肌缺血再灌注的保护作用及与其自噬的关系被引量：2
- 2017年
- 目的通过构建生长分化因子15(GDF15)稳定过表达的心肌细胞株,探讨其对H9c2心肌细胞缺血/再灌注(I/R)损伤凋亡和自噬的影响。方法建立H9c2 I/R损伤模型,用靶向GDF15过表达慢病毒和阴性空载体病毒转染H9c2细胞,筛选出GDF15稳定过表达细胞株。分为3组:对照组、空载体组和GDF15过表达组。用MTT法检测I/R后细胞存活率,以LDH试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶活力,以免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-B的表达。结果 I/R 2 h,对照组、空载体组和过表达组的细胞存活率分别为(60.47±5.03)%,(63.21±17.13)%,(74.93±10.03)%,过表达组细胞活性较对照组与空载体组均增高,差异有统计学意义(P<0.01)。对照组和过表达组LDH活力值分别为108.72±7.20,50.29±10.05,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。在I/R干预下,凋亡相关蛋白Caspase-3在对照组和过表达组的灰度值分别为99.73±0.61,67.68±0.47,过表达组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。Bcl-2/Bax在对照组、空载体组和过表达组的灰度值分别为72.52±2.05,39.55±0.46,82.52±1.39,过表达组明显高于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.01)。在I/R后,自噬相关蛋白Beclin-1在对照组、空载体组和GDF15过表达组的灰度值分别为58.93±0.64,36.71±0.35,88.39±0.72,过表达组明显高于对照组和空载体组,差异有统计学意义(P<0.01)。LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ在空载体组和GDF15过表达组的灰度值分别为2.11±0.02,3.32±0.04,过表达组明显高于空载体组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论上调H9c2细胞的GDF15水平可保护H9c2大鼠心肌细胞,其作用机制可能通过促进细胞的自噬作用得以实现。
- 曹蕾郭谦王彰昭张新然焦建杰何景华强兆艳
- 关键词：生长分化因子15慢病毒感染心肌细胞
- 慢病毒介导生长分化因子15基因沉默增强胶质瘤U373细胞的化疗耐药性被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨慢病毒介导的生长分化因子15(growth differentiation factor 15,GDF15)基因低表达对胶质瘤U373细胞对化疗药物替尼泊苷(teniposide,VM-26)和顺铂(cisplatin,DDP)耐药性的影响及其可能的机制。方法:将靶向GDF15的GDF15-RNAi克隆入慢病毒载体GV248,构建shRNA慢病毒LV-GDF15-RNAi,用无关序列构建阴性对照慢病毒LV-RNAi,分别稳定转染U373细胞,Western blotting检测转染对细胞内GDF15表达的影响。用梯度质量浓度的VM-26(0.1、0.5、2.5和12.5μg/ml)和DDP(0.08、0.4、2和10μg/ml)处理LV-GDF15-RNAi组和LV-RNAi组细胞48 h,MTT法、Hoechst/PI双染检测LVGDF15-RNAi转染对U373细胞VM-26、DDP耐药性的影响,Western blotting检测LV-GDF15-RNAi转染对U373细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-x L、P53和Caspase-3表达的影响。结果:成功构建稳定低表达GDF15的U373细胞系,LV-GDF15-RNAi组细胞内GDF15表达较LV-RNAi组和野生型U373细胞显著降低(0.013±0.001 vs 0.622±0.068、0.601±0.004,均P<0.01)。VM-26和DDP在最低浓度时,LV-GDF15-RNAi组细胞存活率即显著高于LV-RNAi组[VM-26 0.1μg/ml:(91.84±2.64)%vs(80.71±2.66)%,P<0.01;DDP 0.08μg/ml:(102.35±6.79)%vs(85.10±3.69)%,P<0.01],随药物浓度升高差异更加显著。相同浓度的VM-26或DDP处理下,LV-GDF15-RNAi组细胞凋亡数均少于LV-RNAi组;同时,LV-GDF15-RNAi组的Bcl-2和Bcl-x L的表达量比LV-RNAi组显著增多(P<0.05或P<0.01),Caspase-3和P53的表达量显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:下调胶质瘤U373细胞中GDF15水平能够增强细胞对VM-26和DDP的耐药性,其机制可能与GDF15调控Bcl-2、Bcl-x L、P53和Caspase-3的表达有关。
- 张欢郭谦胡宇千曹蕾盖克克强兆艳
- 关键词：胶质瘤慢病毒耐药性
- HDAC1过表达诱导胶质瘤细胞产生耐药性被引量：2
- 2016年
- 目的:构建组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase 1,HDAC1)过表达胶质瘤U87细胞系,探讨HDAC1过表达对胶质瘤细胞化疗药耐药性的影响。方法:分别用HDAC1重组过表达慢病毒载体p CDH-CMV-MCS-HDAC1-EF1-Puro和阴性空载体病毒p CDH-CMV-MCS-EF1-Puro转染U87MG细胞,通过嘌呤梯度浓度筛选出HDAC1稳定过表达细胞系U87MGHDAC1和空载体对照细胞系U87MG-Control,经Western Blotting鉴定,用不同浓度替尼泊苷(VM-26)和顺铂(cisplatin,DDP)对两种细胞进行处理,MTT法检测存活率,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡,Western Blotting检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果:成功构建U87MG-HDAC1稳定过表达细胞系。与U87MG-Control组相比,U87MG-HDAC1组中U87MG-HDAC1蛋白的表达显著升高[(1.148±0.024)vs(0.580±0.003),P<0.01];药物处理后,U87MG-HDAC1细胞存活率显著升高[0.1μg/ml VM-26:(95.57±0.45)%vs(68.8±1.49)%,P<0.01],[0.08μg/ml DDP:(99.20±7.4)%vs(72.48±2.03)%,P<0.01];凋亡细胞个数比例明显下降(均P<0.05),Caspase-3蛋白表达量显著降低(P<0.01),Bcl-2/Bax蛋白表达量比值明显升高(P<0.01)。结论:胶质瘤U87MG细胞中HDAC1过表达明显增强细胞对化疗药耐药性与Caspase-3和Bcl-2/Bax表达有关。
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- 关键词：组蛋白去乙酰化酶胶质瘤耐药性
