金姝
- 作品数：26 被引量：75H指数：5
- 供职机构：上海市普陀区人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市高等学校科学技术发展基金上海市卫生局青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌DNA提取方法的改进被引量：3
- 2016年
- 目的研究适用于PCR法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的核酸提取方法。方法 MRSA在不同孵育条件下分别经含溶菌酶、溶葡萄球菌酶或chelex100R的裂解液裂解获得DNA,用PCR法检测目的基因。结果同时使用溶菌酶、溶葡萄球菌酶、chelex100R裂解得到的DNA,在用PCR法检测mecA基因时,获得的循环阈值(Ct值)明显低于其他组分的裂解液。采用56℃一步法孵育裂解细菌的效果,与37、56℃二步法比较,差异无统计学意义(P>0.05),但简化了步骤。结论含溶菌酶、溶葡萄球菌酶、chelex100R等的裂解液同时与细菌于56℃孵育30min的方法,是获取MRSA细菌DNA既便捷又高效的方法,可以立即用于下一步PCR,为PCR法快速检测临床MRSA感染奠定了基础。
- 金姝邹玉涵闫佩毅黄德魁张骥
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌聚合酶链反应
- 猪FasL基因在猪软骨细胞上的表达和鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的: 实现猪Fas配体(FasL)基因在猪软骨细胞中表达和鉴定。方法: 用RT- PCR扩增猪FasL基因片段, 构建重组pGCEN-FasL逆转录病毒载体, 并转染PA317细胞。经G418筛选获得高滴度的病毒液, 感染猪软骨细胞, 应用FACS和Westernblot检测软骨细胞上FasL的表达。结果: 经酶切分析、测序证明, 成功地构建pGCEN- FasL逆转录病毒载体。转染的软骨细胞表面FasL的表达率为 57%。Westernblot显示, 在Mr为 37 000处有 1条特异性蛋白带, 具有诱导Fas+细胞凋亡的作用。结论: 成功地构建重组猪FasL基因的逆转录病毒载体, 并在转染的软骨细胞上高表达具有生物学活性的FasL, 为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。
- 王树军王颖张惠珍金姝沈天伟葛瑜葛海良
- 关键词：软骨细胞FASL基因逆转录病毒载体
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a的真核表达及其在抗体鉴定中的应用
- 2012年
- 目的利用杆状病毒表达系统表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a（PBP2a）。方法用EcoRI和BamHI双酶切pGEMT-meeA重组质粒DNA，回收目的基因mecA，与pFastBacl质粒连接转化入含有穿梭载体bacmid的大肠埃希菌DHl0Bac中，筛选重组穿梭载体Bacmid-mecA并转染Sf9细胞，获取完整的重组杆状病毒。用免疫荧光（IFA），Westernblot法进行蛋白鉴定。结果成功地获得含mecA基因的重组杆状病毒。杆状病毒感染Sf9细胞形态变化明显，能够表达出与PBP2a多克隆抗体相结合的蛋白。结论利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统成功地表达了PBP2a蛋白。
- 邹玉涵朱祖怀闫佩毅朱元黄德魁朱晴晖金姝
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2A真核表达
- 肿瘤相关线粒体蛋白12对肝癌细胞凋亡的抑制作用
- 2009年
- 目的:探讨肿瘤相关线粒体蛋白12(TAMP12)对肿瘤细胞凋亡的抑制作用。方法:(1)构建重组逆转录病毒表达载体并转染包装细胞PA317,将获得的病毒颗粒感染TAMP12低表达的肝癌细胞株HepG2。应用RT-PCR检测TAMP12 mRNA表达变化;激光扫描共聚焦显微镜(CLSM)观察双色荧光标记蛋白的亚细胞定位和定量表达。(2)应用Hoechst 33258染色和FACS检测5-氟尿嘧啶(5-FU)处理后对诱导HepG2细胞凋亡的影响。结果:(1)CLSM检测显示TAMP12主要表达于HepG2细胞线粒体中。转染细胞中TAMP12基因和蛋白呈稳定高表达。(2)5-FU诱导细胞发生凋亡后,转染细胞的核形态较为完整,但对照细胞的染色质发生凝聚、边缘化、核固缩;且FACS检测显示转染细胞的凋亡率显著低于对照细胞(P<0.05或P<0.01)。结论:TAMP12具有抑制肝癌细胞凋亡的作用。
- 金姝王俐王颖谢国化陈惠娟王树军张惠珍张勇葛瑜葛海良
- 关键词：线粒体逆转录病毒载体HEPG2细胞氟尿嘧啶细胞凋亡
- 肿瘤抗原-线粒体蛋白12对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2011年
- 分析高表达肿瘤抗原-线粒体蛋白12(tumor antigen-associated mitochondrial protein 12,TAMP12)对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,探讨该蛋白的生物学功能。构建pcDNA3.1-TAMP12载体转染的人肝癌细胞株(SMMC-7721),获得稳定高表达TAMP12的SMMC-TAMP12细胞株.通过Realtime-PCR检测TAMP12 mRNA表达含量,激光扫描共聚焦显微镜观察双色荧光标记蛋白的表达和亚细胞定位。采用MTT法检测细胞的增殖速率,并应用不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-Fluoron-racil,5-FU)处理肿瘤细胞,检测细胞的生长周期和凋亡,以及凋亡相关酶的活性。结果显示转染细胞中mRNA和蛋白呈稳定高表达,定位于细胞线粒体中。TAMP12具有促进肿瘤细胞增殖作用,抑制细胞凋亡作用,并与胱天蛋白酶3/8/9(caspase3/8/9)的活性有关。
- 金姝王颖张勇王树军张仁峰葛海良
- 关键词：线粒体5-FU
- tst和pvl基因阳性金黄色葡萄球菌流行情况及分子特征被引量：10
- 2016年
- 目的了解中毒性休克综合征毒素-1的tst基因和杀白细胞素的pvl基因阳性金黄色葡萄球菌(金葡菌)流行情况及其附属基因调节子(agr)和葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)型别。方法收集上海市及浙江省共7所医院的916株金葡菌,聚合酶链反应(PCR)检测tst、pvl、mec A和mec C基因,并对tst或pvl基因阳性菌株作agr及SCCmec(针对甲氧西林耐药金葡菌,MRSA)遗传学分型。结果 916株金葡菌中tst阳性208株,阳性率22.7%;pvl阳性35株,阳性率3.8%;mec A阳性665株(MRSA),未检测到mec C基因。在665株MRSA中,tst阳性198株(29.8%),agr和SCCmec分型均以2/Ⅱ型为主,分别占97.0%和94.4%;pvl阳性14株(2.1%),agr分型以1型(85.7%)为主,SCCmec分型以Ⅲ型(42.9%)和Ⅳa型(28.6%)为主。在251株甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)中,tst阳性10株(4.0%);pvl阳性21株(8.4%)。tst阳性率在MRSA菌株中较MSSA中高,而pvl检出率则在MSSA菌株中较高,且浙江地区MRSA中pvl的阳性率高于上海菌株,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 tst基因在MRSA菌株中阳性率较MSSA高;pvl阳性率相对较低,但因其与某些严重的金葡菌感染相关,临床应予以关注。
- 赵焕强邹玉涵金姝舒文汤荣刘庆中
- 关键词：金黄色葡萄球菌PVL基因
- 线粒体异常与肿瘤的关系被引量：2
- 2005年
- 线粒体生物氧化功能的改变、线粒体激活介导的细胞凋亡途径异常、线粒体DNA突变和缺失均与肿瘤的发生发展密切相关,为线粒体为靶点的肿瘤诊断和治疗奠定基础。现综述与肿瘤相关线粒体异常的研究进展。
- 金姝葛海良
- 关键词：肿瘤线粒体细胞凋亡
- FasL^+组织工程化猪软骨细胞的同种异体移植被引量：1
- 2007年
- 目的:探讨表达FasL的猪组织工程化软骨细胞在同种异体内的生长状况和免疫排斥反应。方法:实验于2002-09/2004-03在上海交通大学医学院,上海市免疫学研究所进行。①分离制备猪软骨细胞。②制备FasL+软骨细胞,构建重组pGCEN-FasL反转录病毒载体,转染PA317细胞。经G418筛选获得分泌pGCEN-FasL病毒颗粒的PA317细胞克隆,选择高滴度的病毒液,感染猪软骨细胞。再经过G418筛选获得FasL+的软骨细胞克隆,扩增培养。③FACS检测FasL的表达,应用JAM试验测定FasL+的软骨细胞诱导Fas+的Jurkat细胞及活化的T细胞的凋亡率。同时制备转染pGCEN反转录病毒空载体的软骨细胞为对照。④取FasL+的软骨细胞与可注射性生物材料PluronicF127混合,注射于同种异体猪的腹壁皮下。在第4,5周取材,通过组织病理和免疫组织化学等方法,检测软骨细胞生长和免疫排斥反应。结果:①经转染的软骨细胞表面FasL的表达率为57%。②FasL+的软骨细胞具有明显诱导Fas+细胞和活化的同种异体T细胞的凋亡,最大的凋亡率分别为53.41%,30.38%(效/靶=10∶1),对照组分别为32.27%,13.16%(效/靶=10∶1)。③组织工程化猪软骨结节的结构与正常软骨组织基本一致,可见清晰的软骨凹陷和软骨膜,仅细胞排列较正常软骨略显混乱、不均匀现象。④免疫组织化学染色显示FasL+的组织工程化猪软骨结节的Ⅱ型胶原蛋白分布均匀,形状清楚,与正常软骨比较基本一致。⑤第5周的软骨细胞表面的FasL分子表达明显,周围的炎性细胞浸润相对较少。而对照组的软骨细胞周围可见到大量浸润的炎性细胞。结论:成功构建FasL+软骨细胞并有效表达,抑制免疫排斥反应,为建立同种异体软骨细胞移植的免疫耐受提供了实验依据。
- 王树军张惠珍王颖金姝丁永霞葛瑜沈天伟葛海良
- 关键词：软骨细胞
- 青霉素结合蛋白2a单克隆抗体的研制和初步应用
- 2015年
- 目的 研制青霉素结合蛋白2a（PBP2a）单克隆抗体（McAb）,为建立耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）免疫层析检测方法提供检测用抗体.方法 以基因工程抗原rPBP2a免疫BALb/c小鼠,通过常规小鼠B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体,采用免疫印迹技术（Western blotting）分析单克隆抗体特异性.选取敏感、特异的单克隆抗体进行金标记和硝酸纤维膜包被,建立胶体金免疫层析检测方法.结果 共获得11株分泌抗rPBP2a的杂交瘤细胞,其中6株分泌的单克隆抗体能够与天然PBP2a呈阳性反应.用其中2株单克隆抗体建立的PBP2a胶体金免疫层析方法,可在5～ 20 min内完成检测.结论 获得了特异性针对PBP2a蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测PBP2a蛋白的胶体金免疫层析检测方法,为临床快速、简便检测产生PBP2a的细菌提供了检测方法.
- 郑佐娅金姝谈景婴朱晴晖
- 关键词：青霉素结合蛋白2A单克隆抗体胶体金免疫层析法
- TIL识别的HLA-A2限制性人黑色素瘤特异抗原肽的研究
- 2005年
- 目的探讨TIL识别的人黑色素瘤HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽特性。方法通过亲和层析柱从三种肿瘤细胞系(624-Mel、Chap-Mel和JY)中纯化HLA-A2蛋白和结合的多肽分子,经弱酸高温处理和离心超滤后,应用反相-高效液相色谱层析(RT-HPLC)分离各多肽组份,并将其各组份与T2细胞共同孵育、进行重建TIL识别的人黑色素瘤特异表位试验,鉴定肽分子生物活性,通过质谱分析所获活性肽分子特性,参照活性肽序列,制备人工合成肽加以进一步证实。结果从RT-HPLC层析的624-Mel的肽组份,经特异表位鉴定发现3个活性峰(P19、P25和P31)。其中P31,TIL杀伤率达67%,质谱分析表明肽分子量为948,氨基酸序列为H+Ala Lue Trp Lue Phe Phe Gly Val Lue OH-的9肽分子。经特异表位测定表明人工合成肽具有纯化活性肽的生物活性特征。结论分离鉴定的这一9肽分子是一种TIL识别的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽,为肿瘤防治、合成肽疫苗的研究奠定了可靠的实验基础。
- 葛海良李美星金姝陈影张勇
- 关键词：TILHLA-A2限制性肿瘤抗原肽疫苗
