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杨鹏: 作品数：12 被引量：44H指数：5; 供职机构：广西医科大学药学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广西研究生教育创新计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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微小核糖核酸-24对内皮型一氧化氮合酶基因表达的调节及其对血管内皮细胞管腔形成的影响被引量：5: 2016年; 目的:探讨微小核糖核酸(microRNA)-24(miR-24)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达调节的分子机制及其对血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:构建miR-24及其反义序列的高表达质粒,分别转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据转染质粒将实验细胞分为:miR-24高表达组、miR-24干扰组和空白质粒对照组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测HUVECs增殖能力,划痕和Transwell试验检测细胞的迁移能力,人工基底膜检测细胞的管腔形成能力;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测eNOS和Sp1转录因子m RNA和蛋白表达水平。结果:(1)与空白质粒对照组比较,miR-24高表达组细胞增殖能力降低45.45%(0.36±0.04 vs 0.66±0.08,P<0.05);miR-24高表达组细胞迁移速度明显减缓,且迁移数目降低74.75%(30.25±3.78 vs 119.80±10.94,P<0.01),未能形成明显管腔样结构。(2)与空白质粒对照组比,miR-24高表达组eNOS m RNA降低46.2%(0.49±0.02vs 0.91±0.01,P<0.05),蛋白表达减少49.07%(0.55±0.05 vs 1.08±0.05,P<0.05);同时Sp1 m RNA降低44.9%(0.49±0.01 vs 0.89±0.02,P<0.05),其蛋白质表达量也相应减少54.90%(0.46±0.02 vs 1.02±0.04,P<0.05)。在miR-24抑制组中,上述指标较空白质粒对照组降低,但比miR-24高表达组显著升高,特别是小管形成数量、及管腔长度与空白质粒对照组相近。结论:miR-24显著抑制HUVECs的增殖、迁移和管腔形成的能力,并且与miR-24对eNOS的表达调控有关;miR-24明显抑制eNOS表达,Sp1的参与可能是这一调节过程的重要分子机制之一。; 陈伟莫国君罗雪兰王辉杨鹏欧和生; 关键词：核糖核酸管腔

miRNA-24对血管内皮细胞eNOS表达/活性及其代谢产物NO生成的影响被引量：12: 2017年; 目的探讨微小RNA(miRNA)-24对血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶(e NOS)基因表达、活性调节的分子机制及其代谢产物的影响。方法构建miRNA-24高表达质粒,并转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)。MTT法检测细胞的增殖情况,划痕实验检测细胞的迁移能力,RT-PCR和Western印迹法检测细胞eNOS mRNA和蛋白的表达情况,ELISA法检测eNOS的表达活性,硝酸还原法测定细胞培养上清液中NO的含量。结果与对照组相比,转染miRNA-24后细胞增殖能力下降54.32%、迁移能力下降48.62%;转染miRNA-24后eNOS mRNA降低43.92%,蛋白表达量减少42.71%;转染miRNA-24后eNOS的酶活性降低73.20%,同时NO的合成与释放减少55.29%。结论 miRNA-24高表达抑制eNOS的表达及酶活性;miRNA-24抑制代谢产物NO的合成与释放,这可能成为心血管疾病防治的分子靶点。; 罗雪兰陈伟莫国君杨鹏欧和生; 关键词：内皮细胞内皮型一氧化氮合酶代谢产物

miR-21抑制剂对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞增殖及eNOS表达的影响: 2017年; 目的:探讨miR-21抑制剂对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法:将miR-21抑制剂转染至经AngⅡ诱导的HUVECs,采用MTT法检测细胞的增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,分别采用RT-PCR和western blotting法检测转录因子AP1和eNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果:AngⅡ能促进HUVECs增殖和迁移,并使细胞中AP1、eNOS mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05);miR-21抑制剂转染细胞后,AngⅡ促进HUVECs增殖和迁移的作用发生显著逆转(P<0.05),且AP1、eNOS mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:miR-21抑制剂能够抑制AngⅡ刺激下HUVECs的增殖及eNOS的表达;AP1在AngⅡ诱导细胞eNOS表达中可能起到关键的调控作用。; 莫国君陈伟罗雪兰杨鹏欧和生; 关键词：一氧化氮合酶

27nt-miRNA对人脐带间充质干细胞定向内皮细胞分化和管腔形成的影响及其分子机制被引量：2: 2018年; 目的探讨27nt-miRNA对人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)定向内皮细胞分化和分化后细胞管腔形成能力的影响,并探讨其分子机制。方法构建27nt-miRNA、anti-27nt-miRNA及对照慢病毒载体。将h UCMSCs分为27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组、对照组,分别转染27nt-miRNA、anti-27nt-miRNA及对照慢病毒载体后观察转染效率,诱导分化并观察细胞形态变化,MTT检测分化后细胞增殖能力,硝酸还原酶法检测分化过程中细胞的一氧化氮(NO)产量,人工基底膜检测分化后细胞的成管能力,RT-PCR、免疫细胞化学和Western blotting分别检测分化后细胞的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和蛋白。结果与对照组相比,27nt-miRNA组h UCMSCs分化程度低,未见管腔样网络结构;分化第9天,27nt-miRNA组细胞NO产量较对照组降低33.49%(P<0.05)、eNOS mRNA表达量较对照组降低23.81%(P<0.01)、eNOS蛋白表达较对照组降低24.56%(P<0.05);anti-27nt-miRNA组的上述指标较对照组及27nt-miRNA组升高(P<0.05或P<0.01)。结论 27nt-miRNA明显抑制h UCMSCs定向内皮细胞分化及管腔形成能力,其作用机制与27nt-miRNA抑制eNOS蛋白表达及NO合成有关。; 陶晓静杨鹏沈凤颜渊鸳李丹罗雪兰甘娜覃裕旺欧和生; 关键词：非编码RNA 干细胞分化间充质干细胞人脐带间充质干细胞内皮细胞

microRNA-24对自噬的调节及血管内皮细胞管腔形成的影响被引量：5: 2018年; 目的探讨microRNA-24(miR-24)对自噬相关基因LC3Ⅱ和Beclin-1的调节及其对血管内皮细胞管腔形成能力的影响。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)随机分为空白对照组、雷帕霉素+miR-24高表达组以及雷帕霉素组。其中空白对照组的细胞不作任何处理;雷帕霉素+miR-24高表达组的细胞先转染miR-24高表达质粒,再用1 000 nmol/L的雷帕霉素干预6 h建立自噬模型;雷帕霉素组的细胞同样用1 000 nmol/L的雷帕霉素干预6 h建立自噬模型;然后分别用MTT法检测HUVECs的增殖能力、细胞划痕实验检测HUVECs迁移能力及Matrigel实验检测HUVECs管腔形成能力,进一步用蛋白免疫印迹法(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测LC3II和Beclin-1的蛋白和mRNA表达水平。结果 (1)与空白对照组相比,雷帕霉素组、雷帕霉素+miR-24高表达组细胞增殖能力和迁移比例降低(P<0.05),雷帕霉素组的管腔形成数量、长度与空白对照组相近,而雷帕霉素+miR-24高表达组则基本没有形成明显管腔样结构。(2)与空白对照组相比,雷帕霉素+miR-24高表达组和雷帕霉素组的LC3II和Beclin-1 mRNA和蛋白表达量均不同程度增加(P<0.05)。(3)在雷帕霉素+miR-24高表达组中,上述指标较雷帕霉素组均降低(P<0.05),特别是管腔形成数目明显减少。结论 miR-24可在转录后水平调控自噬相关基因LC3II和Beclin-1的表达,进而下调细胞自噬水平。这很有可能是miR-24抑制HUVECs增殖、迁移和管腔形成的机制之一。; 杨鹏欧和生莫国君罗雪兰沈凤陶晓静吕冬宁; 关键词：管腔自噬 BECLIN-1

27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化的影响被引量：2: 2019年; 为探讨27nt-miRNA对间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化影响,构建27nt-miRNA过表达、反义序列Anti-27nt-miRNA以及阴性对照的表达质粒,慢病毒包装后分别转染人脐带间充质干细胞(hUCMSC),加入Ⅳ型胶原诱导hUCMSC定向分化为血管平滑肌细胞。四唑盐(MTT)比色法检测分化后细胞活力,免疫细胞化学染色法检测分化后细胞SM22α(兔抗平滑肌22α,smooth muscle 22α)的表达,Western印迹法和RT-PCR检测分化后细胞内的SMA (兔抗平滑肌肌动蛋白,smooth muscle actin) mRNA、SM 22α mRNA及其蛋白质表达情况。经检测,27nt-miRNA过表达分化组与阴性对照组相比,细胞活力下降20.48%(P<0.05),SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白质表达量明显升高(P<0.05);而Anti-27nt-miRNA分化组细胞活力上升了18.07%(P<0.05),SMA mRNA、SM22α mRNA及其蛋白质表达量下降(P<0.05)。综上所述,27nt-miRNA能够促进间充质干细胞向血管平滑肌细胞分化,并且抑制分化后的细胞活力。; 沈凤杨鹏陶晓静颜渊鸳李丹欧和生; 关键词：间充质干细胞血管平滑肌细胞 SMA

人骨髓间充质干细胞定向血管内皮细胞诱导分化前后eNOS表达/活性及其代谢产物的差异被引量：4: 2017年; 目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)定向血管内皮细胞诱导分化前后内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达、活性及其代谢产物的差异。方法建立hBMSCs定向血管内皮细胞诱导分化系统。应用倒置显微镜观察细胞形态的改变,Transwell实验检测细胞的迁移能力,细胞免疫荧光及Western blot检测eNOS的蛋白表达,ELISA法检测eNOS的活性,硝酸还原法检测细胞培养上清液NO含量。结果与未分化组相比,分化后的细胞形态发生明显改变;细胞的迁移能力增强238.10%(73.000±7.002 vs.21.000±4.359,P<0.05);eNOS蛋白的表达增加114.72%(0.423±0.011 vs.0.197±0.079,P<0.05);eNOS的活性增强157.49%(4.967±0.073 vs.1.929±0.103,P<0.05);NO合成与释放增加155.67%(184.909±1.853 vs.72.323±0.426,P<0.05)。结论 hBMSCs定向内皮细胞诱导分化后eNOS基因表达增加、活性增强,其代谢产物NO的合成与释放增加。本结果可能为干细胞在心血管疾病等防治提供依据。; 罗雪兰陈伟莫国君杨鹏欧和生; 关键词：人骨髓间充质干细胞血管内皮细胞代谢产物

内含子源性27nt-miRNA对内皮型一氧化氮合酶表达调节及血管内皮细胞管腔形成的影响被引量：2: 2015年; 目的:探讨内含子源性27nt-miRNA对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达调节的分子机制及其对血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:构建wt-27nt-miRNA、mut-27nt-miRNA和空白对照序列的高表达质粒,分别转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),采用RT-PCR、Western blotting检测eNOS mRNA和蛋白表达水平;MTT检测HUVECs增殖能力,划痕和Transwell实验检测HUVECs的迁移能力,Matrigel检测HUVECs的管腔形成能力。结果:(1)与空白质粒对照组比较,wt-27nt-miRNA表达组HUVECs eNOS mRNA降低39.51%(0.49±0.02vs 0.81±0.02,P<0.05),其蛋白质表达量下降47.41%(0.71±0.07vs 1.35±0.06,P<0.05)。(2)与空白质粒对照组相比,wt-27nt-miRNA表达组HUVECs增殖明显减少,抑制率为41.86%;wt-27nt-miRNA表达组HUVECs迁移速度明显减缓,且迁移数目降低75.55%(28.75±1.71vs117.60±4.45,P<0.01),未能形成明显管腔样结构。在mut-27nt-miRNA表达组中,上述指标比空白质粒对照组降低(P<0.05),但比wt-27nt-miRNA表达组显著升高(P<0.05),特别是管腔形成数量及管腔长度与空白质粒对照组相近。结论:内含子源性27nt-miRNA显著抑制HUVECs的增殖、迁移和管腔形成的能力,并与内含子源性27nt-miRNA对eNOS表达的调控相关。; 陈伟莫国君罗雪兰杨鹏欧和生; 关键词：管腔形成内皮型一氧化氮合酶

microRNA-24通过自噬途径影响人脐静脉内皮细胞管腔形成的机制研究: 目的1研究microRNA-24(miR-24)对自噬的调控作用及相关分子机制。2基于自噬探讨miR-24对雷帕霉素诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,H...; 杨鹏; 关键词：自噬 BECLIN-1 管腔形成; 文献传递

27nt-miRNA对血管平滑肌细胞SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响被引量：10: 2019年; 目的:探讨27nt-微小RNA(27nt-miRNA)对血管平滑肌细胞(VSMCs)中平滑肌22α蛋白(SM22α表达的调节及其对细胞活力、迁移和表型改变的影响。方法:构建27nt-miRNA高表达、反义序列(anti-27nt-miRNA)以及阴性对照的表达质粒,经慢病毒包装后分别转染大鼠原代VSMCs,加入血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)诱导VSMCs表型转换。MTT实验检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移能力,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学染色法检测细胞中SM22α的mRNA和蛋白表达情况。结果:与正常组相比,PDGF-BB组的细胞活力上升(P <0.05)、迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05);与阴性对照慢病毒组相比,27nt-miRNA高表达组的细胞活力下降(P <0.05),迁移能力下降(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量明显升高(P <0.05);而anti-27nt-miRNA组细胞的细胞活力上升(P <0.05),迁移能力上升(P <0.05),SM22α的mRNA及蛋白表达量下降(P <0.05)。结论:27nt-miRNA促进SM22α表达,同时抑制VSMCs的活力及迁移,并有可能抑制VSMCs从收缩型转变为合成型。; 沈凤杨鹏陶晓静李丹颜渊鸳罗雪兰秦祖杰覃裕旺欧和生; 关键词：血管平滑肌细胞表型血小板源性生长因子

杨鹏

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