张耀林
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：宁夏医科大学检验学院更多>>
- 发文基金：宁夏回族自治区科技厅科技攻关项目宁夏回族自治区自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人胎盘MSCs对异基因小鼠皮肤移植排斥的免疫调节作用被引量：3
- 2013年
- 目的观察人胎盘MSCs(placental-derived MSCs,PMSCs)对异基因小鼠皮肤移植的影响。方法取自愿捐赠人胎盘胎儿侧组织,分离培养PMSCs,并以第3代细胞进行实验。选择30只6～8周龄C57BL/6小鼠作为受体,背部制作直径12 mm圆形皮肤缺损;以1～2日龄Vr∶CD1(ICR)乳鼠皮肤作为供体,建立小鼠异基因皮肤移植排斥模型。将30只受体小鼠随机分为3组,每组10只。A组为自体皮肤移植组,B组为同种异体皮肤移植+PBS尾静脉注射组,C组为同种异体皮肤移植+人PMSCs(1×105个/只)尾静脉注射组。观察各组移植皮片成活情况,检测术后7 d受体小鼠血液白细胞数量、腹腔液巨噬细胞活化率,采用ELISA、RT-PCR法检测受体小鼠血液、脾脏中IL-4、IL-17及IFN-γ表达量的变化。结果 A、B、C组移植皮片成活时间分别为(58.33±4.04)、(3.80±0.92)、(6.80±0.82)d,A组明显优于B、C组,C组优于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后7 d,A、B、C组小鼠血液白细胞计数分别为(6.32±0.45)×109/L、(7.45±0.52)×109/L、(6.35±0.39)×109/L,A、C组显著低于B组(P<0.05),A、C组间差异无统计学意义(P>0.05)。A、B、C组小鼠巨噬细胞活化率分别为6.87%±2.40%、7.84%±0.44%、15.98%±2.87%,C组显著高于A、B组(P<0.01)。ELISA检测示,3组血液中IL-4含量差异无统计学意义(P>0.05);C组IL-17和IFN-γ含量显著低于B组(P<0.05);B组IFN-γ含量明显高于A组(P<0.05);其余各指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测示,B、C组IL-4、IL-17和IFN-γmRNA相对表达量与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05);C组IL-4和IFN-γmRNA相对表达量明显低于B组(P<0.05),IL-17 mRNA相对表达量与B组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论异基因小鼠皮肤移植后尾静脉注射人PMSCs可抑制免疫排斥反应,其机制可能与减少IL-17及IFN-γ等相关细胞因子分泌有关。
- 王琼刘婷张耀林陈冬梅王立斌李玉奎魏军
- 关键词：免疫排斥异基因
- pri-mir-302/367重组慢病毒载体的构建及其下游调节基因的鉴定
- 2013年
- 目的:构建可诱导表达pri-mir-302/367的慢病毒载体,并研究miR-302/367家族基因miR-302a/b/c/d和miR-367及其下游调节基因OCT4、SOX2和NANOG在HeLa细胞中的诱导性表达。方法:以正常人基因组DNA为模板,PCR扩增pri-mir-302/367基因。经双酶切后连接入pLV-TRE质粒,构建pLV-TRE-302慢病毒重组体,酶切及测序予以鉴定。将重组质粒和辅助质粒共同转染293 FT细胞,并测定病毒滴度。用病毒转染HeLa细胞,强力霉素(doxycline,DOX)诱导后,通过real-time PCR测定miR-302/367家族基因及其下游调节基因的表达。实验分为诱导组(DOX+)、非诱导组(DOX-)和空白组(blank)。结果:酶切及测序证实重组慢病毒载体pri-mir-302/367构建成功,病毒滴度为5×106TU/ml;DOX诱导72 h后,real-time PCR结果显示诱导组高于非诱导组和空白组(P<0.05,其中miR-302a:P DOX+vs.DOX-=0.032,P DOX+vs.blank=0.048;miR-302b:P DOX+vs.DOX-=0.001,P DOX+vs.blank=0.001;miR-302c:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.000;miR-302d:P DOX+vs.DOX-=0.002,P DOX+vs.blank=0.047;miR-367:P DOX+vs.DOX-=0.001,PDOX+vs.blank=0.001;OCT4:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.001;SOX2:P DOX+vs.DOX-=0.000,P DOX+vs.blank=0.000;NANOG:P DOX+vs.DOX-=0.000,PDOX+vs.blank=0.000),而非诱导组与空白组相比差异无统计学意义(P>0.05,其中miR-302a:P blank vs.DOX-=0.057;miR-302b:P blank vs.DOX-=0.832;miR-302c:P blank vs.DOX-=0.445;miR-302d:P blank vs.DOX-=0.979;miR-367:P blank vs.DOX-=0.161;OCT4:P blank vs.DOX-=0.051;SOX2:P blank vs.DOX-=0.060;NANOG:P blank vs.DOX-=0.078)。结论:成功构建了携带人miR-302/367可控性慢病毒载体,为后续的重编程研究奠定了实验基础。
- 张耀林马海滨陈冬梅范恒李玉奎
- 关键词：HELA细胞
