杨毅
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
- 供职机构：武汉大学中南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 自噬对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响被引量：5
- 2016年
- 目的观察自噬对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度雷帕霉素诱导人宫颈癌HeLa细胞,吖啶橙染色观察自噬小体的形成,Western blot检测自噬相关基因LC3B以及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况,采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。应用自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)阻断宫颈癌细胞自噬后,采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。构建带有绿色荧光蛋白的LC3B质粒,转入HeLa细胞,通过G418药物筛选转染阳性细胞,荧光显微镜观察LC3B的细胞定位,Western blot检测LC3B表达。RTCA仪器实时检测野生型和LC3B过表达HeLa细胞的增殖能力,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达。结果雷帕霉素诱导后,宫颈癌HeLa丑细胞自噬水平增高,增殖和迁移能力有所下降;PI3K/Akt/rnTOR通路蛋白表达改变(P<0.05)。自噬抑制剂3-MA诱导HeLa细胞增殖和迁移水平下降(P<0.05)。荧光显微镜和Westem blot结果显示构建的LC3质粒成功转入Hela细胞中并且能够抑制宫颈癌细胞的增殖(P<0.05)。结论在一定范围内,随着自噬水平的升高,HeLa细胞增殖和迁移能力降低,可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用。通过基因靶向扰乱自噬关键基因(如LC3等)而改变宫颈癌细胞自噬水平可能为宫颈癌的治疗带来新策略。
- 杨毅丁妍于爱清严世荣
- 关键词：自噬宫颈癌细胞雷帕霉素LC3
- 自噬对宫颈癌细胞干性及增殖能力的影响被引量：3
- 2017年
- 目的:研究自噬对宫颈癌细胞干性及增殖能力的影响。方法:采用悬浮培养法分离HeLa肿瘤干细胞,免疫荧光检测干细胞标志基因CD133和Nanog,吖啶橙染色观察自噬小体的形成;Western blot检测贴壁细胞和肿瘤干细胞中自噬相关基因Beclin1和LC3B的表达情况;贴壁细胞和肿瘤干细胞平衡盐溶液EBSS饥饿处理4 h和8 h后,吖啶橙染色观察自噬小体的形成,Western blot检测Beclin1和LC3B表达,实时细胞检测系统检测野生型和饥饿处理后HeLa细胞的增殖能力;自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)阻断宫颈癌贴壁细胞和干细胞的自噬后,Western blot检测Beclin1和LC3B表达,实时细胞检测系统检测野生型和自噬抑制剂处理后HeLa细胞的增殖能力;运用CRISPR/Cas9基因编辑技术降低自噬基因Beclin1的表达,通过实时细胞检测系统检测野生型和Beclin1突变HeLa细胞的增殖能力。结果:基础水平下,HeLa肿瘤干细胞比HeLa贴壁细胞自噬水平高。饥饿诱导处理后,HeLa肿瘤干细胞和HeLa贴壁细胞自噬水平均增高,均在4 h最强,8 h后有所减弱,且HeLa肿瘤干细胞在饥饿诱导各时间点均比HeLa贴壁细胞强;HeLa细胞饥饿处理4 h和8 h后增殖能力均有所下降,8 h下降更明显。应用3-MA后,HeLa肿瘤干细胞和HeLa贴壁细胞自噬均减弱,且HeLa贴壁细胞自噬减弱更为明显;细胞增殖能力也明显减弱。Beclin1突变后HeLa细胞较野生型HeLa细胞增殖能力增强。结论:自噬参与维持宫颈癌HeLa细胞的干性。同时,自噬也能影响宫颈癌HeLa细胞的增殖能力。通过基因打靶扰乱自噬关键基因(如Beclin1或LC3B等)而改变宫颈癌细胞自噬水平可为宫颈癌的治疗带来新的治疗策略。
- 杨毅丁妍于爱清严世荣
- 关键词：BECLIN1
- TALENs介导的Nanog基因表达下调对宫颈癌HeLa细胞恶性行为的影响被引量：3
- 2016年
- 目的研究Nanog表达下调对宫颈癌HeLa细胞恶性行为的影响。方法通过基因编辑工具转录激活样效应器核酸酶(TALENs)介导Nanog下调表达,基因测序分析Nanog的突变情况;挑取单个细胞培养以筛选出Nanog明显下调表达的单克隆HeLa细胞;RT-PCR检测mRNA表达水平;Western blot检测蛋白表达水平;HeLa细胞的集落形成能力、侵袭性及耐药性分别通过集落形成实验、Transwell侵袭实验及药物敏感性实验检测。结果 TALENs成功介导Nanog基因突变并导致其下调表达,Nanog突变的单克隆HeLa细胞Nanog mRNA和蛋白表达水平较野生型HeLa细胞均下调表达(P<0.05)。Nanog突变单克隆HeLa细胞相对于野生型HeLa细胞表现出明显减弱的侵袭、集落形成及化疗药物抵抗能力(P<0.05)。结论 Nanog突变减弱HeLa细胞的恶性行为,下调或沉默Nanog表达有望成为一种新型的治疗宫颈癌策略。
- 于爱清李成林杨毅严世荣
- 关键词：NANOGHELA细胞宫颈癌
- Nanog调控细胞周期相关蛋白影响HepG2细胞增殖能力被引量：2
- 2016年
- 目的研究多能性因子Nanog对HepG2细胞周期相关蛋白表达的影响,进而探索其对HepG2细胞增殖能力的影响。方法本研究通过基因编辑工具TALENs介导Nanog突变而下调其表达,T7E1内切核酸酶和基因测序分析Nanog突变率,Western blot检测Nanog蛋白表达水平,RT-PCR检测Nanog mRNA表达水平,实时细胞活性检测系统检测野生型HepG2细胞和Nanog突变的单克隆HepG2细胞的增殖能力。结果 TALENs成功介导Nanog基因突变,两次转染Nanog-TALENs质粒后,T7E1酶切分析混合细胞的打靶效率近40%。突变的单克隆HepG2细胞Nanog mRNA表达水平较野生型HepG2细胞表达下调3.4倍,而Nanog蛋白表达水平表达下调3.6倍。Nanog突变的单克隆HepG2细胞细胞周期相关蛋白CyclinD1/D3、CyclinE1和CDK2较野生型HepG2细胞表达均下调,Nanog突变的单克隆HepG2细胞表现出明显减弱的增殖能力。结论本研究证实了Nanog通过调控细胞周期相关蛋白CyclinD1/D3、CyclinE1和CDK2影响HepG2细胞增殖,下调Nanog表达可能通过调控细胞周期相关蛋白的表达而抑制HepG2细胞增殖能力。
- 杨晓文于爱清杨毅
- 关键词：HEPG2细胞肝癌
