朱戈丽
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
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- 高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响被引量：5
- 2017年
- 目的:观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法:体外培养人腹膜间皮细胞株第5~10代[HMr SV5,DMEM/F12培养基含10%(体积分数)胎牛血清],观察1.5%、2.5%、4.25%(质量分数)葡萄糖腹膜透析液(dextrose)及线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂鱼藤酮(rotenone),线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮(thenoyltrifluoroacetone,TTFA),线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂抗霉素A(antimycin A)对细胞IL-1β表达的影响(免疫印迹);通过小RNA干扰技术下调NLRP3的表达,免疫印迹分析4.25%高糖腹膜透析液作用下细胞IL-1β的表达;通过白藜芦醇(resveratrol,RSV)诱导自噬,3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)、自噬相关蛋白5(autophagy related gene 5,ATG5)siRNA、自噬相关蛋白(Beclin1)siRNA抑制自噬,流式细胞仪分析细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS),免疫印迹分析IL-1β的表达。结果:对照组、1.5%高糖腹膜透析液、2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮(10μmol/L)、抗霉素A(50 mg/L)、噻吩甲酰三氟丙酮(10μmol/L)各组细胞上清IL-1β的相对表达依次为0、0.175±0.082、0.418±0.163、2.357±0.288、2.642±0.358、3.271±0.462、0.123±0.091,提示2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮、抗霉素A作用细胞IL-1β表达明显升高,应用NLRP3 siRNA可阻断上述效应;此外,对照组、阴性对照siRNA(negative control,NC siRNA)、RSV(50μmol/L,诱导自噬)、3-MA(10 mmol/L,抑制自噬)、ATG5 siRNA(抑制自噬)、Beclin1 siRNA(抑制自噬)各组总线粒体荧光强度分别为1.76±0.42、1.83±0.55、1.85±0.62、7.36±0.92、5.35±0.77、5.06±0.62,超氧化线粒体荧光强度分别为821.68±95.12、868.15±102.82、723.39±92.56、1 660.08±113.65、1 433.01±107.24、1 562.36±112.88,结合免疫印迹结果,提示抑制自噬可增强线粒体ROS产生和提高IL-1β表达,诱导自噬对ROS、IL-1β无明显影响。结论:长期应用高糖腹膜透析液,
- 李相友伍军罗丹陈晚先朱戈丽张艳霞毕智敏封宝红
- 关键词：人腹膜间皮细胞NLRP3IL-1Β
- 微小RNA-22-3p负性调控人腹膜间皮细胞NLRP3的表达及功能
- 2020年
- 目的:探讨微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对人腹膜间皮细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达及功能的影响。方法:将NLRP3基因的3'-非翻译区(3'-UTR)序列及其突变体克隆到双萤光素酶报告基因载体psiCHECK2中,构建野生型及突变型重组双萤光素酶报告质粒,与miR-22-3p mimic和miR-22-3p in⁃hibitor共转染LPS预处理的人腹膜间皮细胞株HMrSV5,检测萤光素酶活性;HMrSV5细胞随机分为以下6组:miR-22-3p NC+LPS组、miR-22-3p NC+LPS+ATP组、miR-22-3p mimic+LPS组、miR-22-3p mimic+LPS+ATP组、miR-22-3p inhibitor+LPS组和miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组。RT-qPCR和Western blot检测NLRP3 mRNA和蛋白的表达,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)的表达和caspase-1的活性,Western blot检测caspase-1 p20蛋白的表达。结果:NLRP3-3'-UTR野生型与miR-22-3p mimic共转染HMrSV5细胞后,萤光素酶活性较对照组降低(P<0.05);NLRP3-3'-UTR野生型与miR-22-3p inhibitor共转染HMrSV5细胞后,萤光素酶活性较对照组升高(P<0.05)。与miR-22-3p NC+LPS组比较,miR-22-3p mimic+LPS组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均下降且cas⁃pase-1活性减弱(P<0.05),而miR-22-3p inhibitor+LPS组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均上升且caspase-1的活性增强(P<0.05)。与miR-22-3p NC+LPS+ATP组比较,miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组NLRP3的mRNA和蛋白表达、IL-1β和caspase-1 p20的水平均上升且caspase-1的活性增强(P<0.05)。结论:miR-22-3p可负性调控人腹膜间皮细胞NLRP3的表达及功能。
- 伍军李相友封宝红李菊霜朱戈丽张艳霞毕智敏巩雪敏
- 关键词：人腹膜间皮细胞终末期肾脏病
- 葡萄糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞线粒体活性氧的影响被引量：1
- 2015年
- 目的观察不同浓度葡萄糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞线粒体活性氧(ROS)的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞株第5至10代(HMr SV5,DMEM/F12培养基含10%胎牛血清)用于实验研究。MTT检测细胞活力,实验分为7组:对照组、1.5%Dextrose组、2.5%Dextrose组、4.25%Dextrose组、线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂Rotenone组(5μM)、线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂Thenoyltrifluoroacetone(TTFA)组(5μM)、线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂Antimycin A组(100μg/ml),应用流式细胞仪检测总线粒体、呼吸线粒体、超氧化线粒体。结果各组作用12h,1.5%Dextrose、2.5%Dextrose、4.25%Dextrose、Rotenone、Antimycin A组总线粒体、超氧化线粒体明显增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),TTFA组与对照组比较无明显差异。结论葡萄糖腹膜透析液作用下人腹膜间皮细胞线粒体活性氧产生增加。
- 伍军何敏张健何文飞程兵朱戈丽张艳霞
- 关键词：人腹膜间皮细胞
- NLRP3基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及miR-22-3p靶向调控被引量：3
- 2018年
- 目的构建核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NACHT,LRR and PYD domains-containing protein 3,NLRP3)基因3'非编码区(untranslated region,UTR)野生型及突变型双荧光素酶报告质粒载体,分析微小RNA(miR)-22-3p对NLRP3的调控作用。方法应用生物信息软件预测miR-22-3p与NLRP3基因的结合位点;将NLRP3基因的3'UTR序列及其突变体克隆到双荧光素酶报告基因载体psi CHECK2中,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒载体,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)及基因测序方法鉴定载体是否构建成功;将培养的人胚肾293T细胞(HEK293T)分为4组:(1) miR-22-3p对照+psi CHECK2;(2) miR-22-3p对照+psi CHECK2-NLRP3-3'UTR(野生型);(3) miR-22-3p模拟物(mimic)+psi CHECK2-NLRP3-3'UTR(野生型);(4) miR-22-3p模拟物(mimic)+psi CHECK2-NLRP3-3'UTR^(mut)(突变型),分别检测细胞荧光素酶活性。结果成功构建了NLRP3基因3'UTR野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒载体; NLRP3-3'UTR野生型与miR-22-3p mimic共转染293T细胞后,荧光素酶活性降低,下降43%,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论成功构建NLRP3基因3'UTR双荧光素酶报告质粒载体并初步验证miR-22-3p对NLRP3的调控作用。
- 伍军李相友朱戈丽张艳霞毕智敏
- 关键词：NLRP3
- 过表达miR-210抑制H_(2)O_(2)诱导大鼠BM-MSCs成脂分化
- 2023年
- 目的探讨miR-210对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)成脂分化的影响。方法分离培养并鉴定SD大鼠BM-MSCs细胞。200μmol/L H_(2)O_(2)诱导BM-MSCs 1 h以构建成脂分化模型细胞,分别利用miR-210模拟物或抑制物转染成脂分化模型细胞,RT-qPCR检测miR-210表达;油红O染色检测细胞胞质内的脂肪颗粒;Western blot检测细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT/强子结合蛋白α(C/EBPα)及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路蛋白。结果成功分离SD大鼠BM-MSCs细胞。成脂分化模型BM-MSCs中miR-210、β-catenin、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白水平降低,脂肪颗粒数目、PPARγ、C/EBPα蛋白水平升高;miR-210模拟物转染的BM-MSCs中miR-210、β-catenin、c-Myc、cyclin D1蛋白水平升高,脂肪颗粒数目、PPARγ、C/EBPα蛋白水平降低;miR-210抑制物转染的BM-MSCs中对应指标变化趋势与miR-210模拟物转染的BM-MSCs相反。结论过表达miR-210可抑制H_(2)O_(2)诱导的BM-MSCs成脂分化,机制可能与激活Wnt/β-catenin通路有关。
- 封宝红喻业安晏莉伍军张艳霞朱戈丽
- 关键词：MIR-210过氧化氢骨髓间充质干细胞成脂分化
