杨晓亮
- 作品数：12 被引量：5H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肺炎链球菌溶血素减毒突变体免疫小鼠可诱导抗体依赖的保护效应
- 2010年
- 目的 优化肺炎链球菌溶血素减毒突变体（△A146 Ply）蛋白小鼠免疫方案,评价其保护效果,并揭示△A146 Ply特异性抗体在保护中的作用.方法 分别使用△A146 Ply免疫小鼠1、2、3次,利用ELISA分析血清内特异性IgG滴度,效价测定1周后,使用肺炎链球菌D39菌株鼻腔攻毒评价3种免疫方式保护效力.通过肺内定植模型和败血症模型分析△A146 Ply对肺炎链球菌感染的保护效果.利用抗体吸附试验和模拟被动保护试验分析Ply特异性抗体的保护作用.结果 随着免疫次数的增加,小鼠血清内的IgG滴度显著升高.相比免疫两次的小鼠,3次免疫后的小鼠其体内的IgG升高超过20倍.在攻毒试验中,免疫3次后的小组接受同等剂量的D39攻毒,存活率最高,保护效率为50%.在定植模型中,△A146 Ply免疫后的小鼠,其肺内肺炎链球菌血清型19F的细菌量减少约50倍,14血清型菌减少超过20倍.在败血症模型中,使用1200 CFU的D39腹腔注射到免疫组及对照组小鼠体内,△A146 Ply免疫组有60%的小鼠能够抵抗这种致命剂量的D39感染,对照组小鼠全部死亡（P=0.0018）.在被动保护试验中,Ply特异性抗体被吸附完全后的抗血清完全不能保护小鼠抵抗致死剂量的D39感染,60%的小鼠在接受抗体特异的抗血清后存活,两组存活率差异有统计学意义.结论 △A146 Ply能有效抵抗肺炎链球菌的感染,证实保护作用与其特异性抗体密切相关.
- 吴凯峰张薇薇史静杨晓亮刘鑫胥文春何於娟张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌
- 一种溶菌酶样蛋白对肺炎链球菌毒力及荚膜多糖合成的影响
- 2011年
- 【目的】为了研究肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)的一种假想的溶菌酶样蛋白在细菌生物学性状及其致病中的作用。【方法】利用长臂同源PCR对该基因进行敲出,并同时构建带有拯救质粒的缺失菌株,观察D39野生菌、缺失菌与带有拯救质粒的缺失菌株在相关生物学性状及其致病力改变,从而鉴定这种假想溶菌酶样蛋白的功能。【结果】缺失菌与野生菌相比,细菌生长减缓,毒力下降,荚膜多糖合成明显减少。而将拯救质粒转入缺失菌株后,该溶菌酶样蛋白的mRNA表达水平较野生菌高,其毒力及荚膜合成较缺失菌显著增高,但未达到野生菌水平。【结论】这种溶菌酶样蛋白是肺炎链球菌的一种新毒力因子,可能通过参与调控肺炎链球菌增殖及荚膜多糖的表达而影响毒力。
- 黄健姜学美黄美容杨晓亮刘明伟王虹孟江萍
- 关键词：肺炎链球菌溶菌酶毒力回复突变荚膜
- spd-0872和spd-0873双基因缺陷对肺炎链球菌毒力的影响
- 目的探索spd-0872和spd-0873双基因缺陷对肺炎链球菌毒力的影响。方法用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法失活spd-0872和spd-0873基因,用PCR、测序鉴定缺陷菌株,观察缺陷
- 杨晓亮庞丹尹一兵
- 文献传递
- 运用酶切自连法分析鉴定肺炎链球菌体内诱导基因
- 2010年
- 肺炎链球菌是严重侵袭性感染和上呼吸道感染最重要的条件致病菌之一,分析鉴定体内诱导基因序列变得尤为重要。本研究利用酶切自连法成功从129个体内诱导表达的肺炎链球菌中获得13个融合重组自杀质粒,通过与肺炎链球菌株TIGR4基因组序列的同源性比对,共得到10个不同的体内诱导基因,其中8个是从血液中筛选出的,另2个为从肺组织中筛选出;通过分析得到18个开放阅读框,其中大部分为已知功能基因,参与细菌多种生命活动,有2个为未知功能基因,编码假想蛋白。可见,酶切自连法可有效用于筛选基因的分析鉴定。
- 庞丹王虹尹楠林杨晓亮胥文春尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌
- comE基因缺陷影响肺炎链球菌体内诱导基因的表达
- 2010年
- 【目的】筛选受comE调控的肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)体内诱导基因。【方法】通过插入失活构建基因comE缺陷的S.pn菌株,与野生菌株分别腹腔注射BALB/c小鼠,经过体内诱导后取小鼠血,分离细菌提取RNA,用RT-PCR法检测13个体内诱导基因mRNA水平差异。【结果】将RT-PCR结果通过Quantity-one灰度分析,进行配对t检验,显示8个体内诱导基因在缺陷菌株和野生菌株中mRNA表达水平具有统计学差异(P<0.05),其中spd-0300、spd-0414、spd-0622、spd-1663、spd-1719、spd-0235、spd-0873受转化上调,spd-1672受转化下调。【结论】筛选出受转化调控的体内诱导基因spd-0300、spd-0414、spd-0622、spd-1663、spd-1719、spd-0235、spd-0873、spd-1672,它们可能参与生长调节、温度感应、糖脂代谢等环节,表明细菌转化可通过调节某些体内诱导基因的表达来增强细菌的毒力。
- 刘鑫尹楠林张雪梅杨晓亮庞丹王虹尹一兵胥文春
- 关键词：肺炎链球菌COME毒力
- 肺炎链球菌假想的溶菌酶样蛋白的活性分析和鉴定
- 2010年
- 目的 探索肺炎链球菌中一种假想的溶菌酶样蛋白的活性.方法 生物信息学分析该基因的功能结构域;利用长臂同源PCR对该基因进行敲除,观察D39野生菌和缺陷菌在生物学性状的改变;利用底物PNP-（GIcNAc）和溶壁微球菌,构建过表达载体,绘制生长曲线,对截断和全长蛋白的溶菌酶活性进行鉴定.结果 生物信息学分析结果显示该基因的编码产物为β-1,4-N-乙酰胞壁酸糖苷酶,属于糖基水解酶25家族;野生菌为长链生长,缺陷菌呈短链状;溶菌酶和假想的溶菌酶样蛋白均可使底物释放出游离的对硝基苯酚,A405nm吸光度值分别为1.166和0.792;同时也可使得溶壁微球菌发生溶解;含过表达质粒的肺炎链球菌较之野生菌,溶解较快.结论 假想的溶菌酶样蛋白具有溶菌酶活性,是一种新的溶菌酶.
- 杨晓亮孟江萍崔亚利黄健刘鑫胥文春
- 关键词：肺炎链球菌溶菌酶
- 肺炎链球菌假想蛋白SPD0873功能分析及对细菌毒力影响的机制研究
- 背景由于肺炎链球菌/(Streptococcus pneumoniae,S.pn/)抗生素耐药率的增加和目前疫苗本身的缺陷,使得其防治成为了一个很棘手的问题。要想彻底解决这个问题,就要深入其致病机制,为新药物和疫苗的开发...
- 杨晓亮
- 关键词：肺炎链球菌溶菌酶毒力因子
- 文献传递
- 肺炎链球菌假想蛋白SPD-0873溶菌酶活性的分析和鉴定
- 目的:探索肺炎链球菌假想蛋白SPD-0873的溶菌酶活性。方法:通过生物信息学分析假想蛋白SPD-0873的结构功能域;体外表达纯化SPD-0873蛋白;按照经典溶菌酶活性试验,利用底物PNP-(GlcNAc),对SPD...
- 杨晓亮崔亚利王虹刘鑫庞丹班艳娜尹一兵张雪梅
- 关键词：肺炎链球菌溶菌酶
- 文献传递
- 肺炎链球菌的一种荚膜表面聚合连接酶的鉴定
- 肺炎链球菌的荚膜多糖生成后需连接到细胞壁形成荚膜,其机制尚不清楚。本课题组前期利用DFI技术筛出一个体内诱导基因spd1672,该基因编码的假想蛋白经过NCBI预测可能具有LipidA-O抗原连接酶的功能,本研究针对该蛋...
- 庞丹王虹杨晓亮刘鑫张雪梅尹一兵
- 关键词：肺炎链球菌荚膜多糖
- 文献传递
- spd-0872和spd-0873双基因缺陷对肺炎链球菌毒力的影响
- 杨晓亮庞丹尹一兵
