王新国
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国药科大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组人组织因子的表达纯化及复性研究
- 2016年
- 利用基因工程技术表达重组人组织因子(Human tissue factor,h TF),并进行纯化及复性研究。构建插入目的基因的p ET28a(+)-h TF重组质粒,转化到大肠杆菌中,获得重组菌,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropylthio-β-D-galactoside,IPTG)诱导其表达,菌体经超声裂解、离心收集包涵体,用8 mol/L尿素溶解包涵体、Ni-NTA纯化,采用透析复性和柱上复性两种方式获得复性的重组人HTF。柱上复性和透析复性均获得具有生物活性的重组人h TF,但柱上复性的复性率为72%,明显高于透析复性的复性率16%。成功构建高表达人重组h TF的工程菌,通过柱上复性获得高纯度具有生物活性的重组人h TF蛋白,为h TF的研究奠定了基础。
- 徐艺菲李佳萌齐永陈红霞潘英李素芹李素梅陈晨王新国张玉彬李越希
- 关键词：纯化复性
- 埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备
- 2016年
- 目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均>90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1-His发生特异性结合。结论成功原核表达了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制备的多克隆抗体的特异性较好,为埃可病毒快速检测技术的建立奠定了基础。
- 李素梅齐永潘英李素芹李佳萌徐亭亭陈晨王新国徐艺菲李越希
- 关键词：VP1蛋白原核细胞多克隆抗体
- 腺病毒抗原表位嵌合蛋白的原核表达及其免疫原性被引量：1
- 2017年
- 目的设计含有人腺病毒(human adenovirus,HAd V)3、7、11、14及55型抗原表位的嵌合蛋白,利用大肠埃希菌进行原核表达,并检测其抗原性及免疫原性。方法对5种型别HAd V的六邻体蛋白氨基酸序列进行分析,筛选出其中具有强抗原性的片段,片段之间用2个甘氨酸和1个丝氨酸进行连接,形成1个多抗原片段串联的嵌合蛋白。优化嵌合蛋白的基因序列并化学合成全长基因,克隆至原核表达载体p ET28a(+)中,转化大肠埃希菌BL21(DE3),筛选高表达嵌合蛋白的工程菌。用High Affinity Ni-NTA resin纯化该嵌合蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,制备抗血清,间接ELISA法检测嵌合蛋白的抗原性及免疫原性。结果成功构建了高表达嵌合蛋白的工程菌,表达的嵌合蛋白相对分子质量约55 000,表达量达95%;破菌上清中嵌合蛋白的纯度较高,纯化后纯度在90%以上。嵌合蛋白免疫小鼠4次后,小鼠抗血清效价达1∶320 000。制备的腺病毒抗原表位嵌合蛋白能有效检测血清中腺病毒3、7、11、14及55型抗体,且能有效刺激机体产生针对各型别腺病毒抗原表位的抗体。结论表达制备的包含5种型别HAd V抗原表位的嵌合蛋白具有较好的抗原性及免疫原性,为进一步研制腺病毒疫苗、单克隆抗体及诊断试剂奠定了基础。
- 王新国齐永潘英李素芹李佳萌陈红霞李素梅陈晨徐艺菲张玉彬李越希
- 关键词：人腺病毒抗原表位嵌合蛋白抗原性免疫原性
