李俊杰
- 作品数：4 被引量：23H指数：3
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- 芍药PlGA20ox基因的克隆及其在芽内休眠解除进程中的表达分析被引量：4
- 2017年
- 以芍药‘大富贵’芽为试材,采用RT-PCR结合c DNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到GA20ox基因的c DNA全长,命名为Pl GA20ox(Gen Bank登录号为KU886552)。该基因全长1 351 bp,开放阅读框1 146 bp,共编码381个氨基酸,含有高度保守的20G-Fe(I I)-Oxy蛋白结构域、Fe2+结合位点(His-247、Asp-249和His-303)和2-酮戊二酸结合位点(Arg-313和Ser-315)。Pl GA20ox蛋白分子量为43 209.1 Da,为稳定蛋白,无跨膜结构域,无信号肽,属于C19-GAoxs。氨基酸序列同源性及系统进化树分析表明:Pl GA20ox与牡丹Ps GA20ox同源性高达96%,亲缘关系最近。采用农杆菌介导法将Pl GA20ox基因于本生烟叶片中瞬时表达,观察显示:Pl GA20ox蛋白定位于细胞质中。该基因在芍药各器官中均有表达,其中,在芽中表达最高,其次花瓣,在根、萼片、叶片和茎中表达微弱。实时荧光定量PCR和高效液相色谱(HPLC)结果显示:在低温解除芍药芽内休眠进程中,Pl GA20ox表达水平呈先上升后总体下降趋势,且与内源GA3含量呈显著正相关(r=0.901*);外施赤霉素会明显增加内源GA3含量,但同时抑制Pl GA20ox的表达,说明Pl GA20ox调控GA3的合成,同时受植物体内活性GA3含量的负反馈调节。
- 韩璐璐李俊杰马燕国静郭先锋
- 关键词：芍药克隆亚细胞定位
- 凤丹(Paeonia ostii)脂肪酸去饱和酶基因PoFAD_2的克隆及表达分析被引量：14
- 2016年
- 以油用牡丹凤丹（Paeonia ostii T.Hong＆J.X.Zhang）胚珠为试材,通过反转录PCR（reverse transcription PCR,RT-PCR）及RACE技术得到脂肪酸去饱和酶基因FAD2的c DNA全长,命名为PoFAD_2（Gen Bank注册号为KT153989）。该基因全长为1 695 bp,开放阅读框（open reading frame,ORF）为1 152bp,编码383个氨基酸。系统发育树结果表明PoFAD_2与芍药（P.lactiflora）FAD2具有最高的同源性,亲缘关系最近。此外,PoFAD_2编码的氨基酸序列中存在3个高度保守的组氨酸簇及4个跨膜区,且含有Delta12-FADs的特异位点,这些结果表明,该基因属于脂肪酸去饱和酶家族。实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）结果表明：PoFAD_2在凤丹各组织中的表达差异较大,在茎、萼片、雄蕊及花瓣中几乎不表达,在叶片中极微弱表达,表达量仅为胚珠中的1/73,在芽及雌蕊中低表达,表达量约为胚珠中的1/10~1/12,而在胚珠中高表达;种子发育进程中,PoFAD_2表达量呈现先急速上升之后迅速下降再回升的趋势,且于花后75 d出现表达量的最高峰。
- 宋淑香郭先锋马燕李俊杰韩璐璐
- 关键词：基因克隆种子
- 芍药转录因子PlWRKY40的克隆及表达分析被引量：4
- 2017年
- WRKY转录因子在植物休眠等生长发育过程中具有重要作用。本研究基于芍药芽转录组数据,对芽休眠解除前后显著下调的编号为c22608.graph_c0的序列进行了q PCR验证分析,结果表明其表达模式与转录组一致,说明其与芍药芽休眠解除密切相关。为进一步挖掘和利用该基因,从芍药‘大富贵’芽中克隆了该基因,命名为Pl WRKY40(Gen Bank登录号:KU891820)。其c DNA全长1 347 bp,开放阅读框882 bp,编码293个氨基酸,含有1个典型的WRKY结构域;基因结构分析表明,Pl WRKY40具有4个外显子和3个内含子,其内含子具有特殊结构,可能调控该基因表达;以拟南芥WRKY蛋白的分类为参照,聚类分析结果表明,Pl WRKY40属于Group IIa亚族;系统进化树分析表明,Pl WRKY40与可可Tc WRKY40具有最高的同源性;亚细胞定位观测结果显示,Pl WRKY40转录因子定位在细胞核上;半定量PCR分析显示,Pl WRKY40在芍药的不同组织器官中泛表达,其中芽表达量最高。本研究为深入探索Pl WRKY40的生理学功能奠定了基础。
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- 关键词：芍药克隆亚细胞定位
- 芍药脱水素基因PlDHN2的克隆及表达分析被引量：1
- 2017年
- 脱水素(DHN)在植物经受逆境胁迫条件下对于保护细胞内蛋白质和膜结构具有重要作用。本研究以芍药‘大富贵’芽为试材,采用RT-PCR技术克隆得到1个脱水素基因PlDHN2(Gen Bank登录号KY272747),该基因具有399 bp的开放阅读框,编码132个氨基酸,具有DHN家族特有的Y、S和K片段,属于典型的Y_3SK_2型脱水素;基因结构分析表明,PlDHN2具有1个长度为84 bp的内含子,位于S片段。以拟南芥和大麦的脱水素蛋白分类为参照,聚类分析结果表明,PlDHN2与Y_nSK_2型脱水素聚合在一起,进化关系较近。半定量PCR分析显示,PlDHN2在芍药各器官中均有表达,其中在芽中的表达最高。亚细胞定位观察结果显示:PlDHN2蛋白定位于细胞质膜和细胞核中。表达特性分析表明,PlDHN2在低温、高温、水淹和ABA胁迫条件下,表达量均不同程度地上调,说明该基因可能参与了芍药对低温等非生物胁迫的耐受调节过程。
- 陈煜马燕国静李俊杰韩璐璐郭先锋
- 关键词：芍药脱水素克隆亚细胞定位
