王明月
- 作品数：6 被引量：56H指数：5
- 供职机构：吉林大学人兽共患病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 吉林省某猪场新发猪葡萄球菌引起的化脓性肺炎被引量：6
- 2016年
- 对吉林省某猪场暴发的一种以呼吸困难、发绀和腹泻为主要临床特征,剖检以化脓性肺炎和纤维素性胸膜肺炎和腹膜炎为病变特征的疫病进行了深入研究。通过对送检病猪体内的实质器官和血液中分离出的葡萄球菌进行形态学鉴定、分离培养、生化特性鉴定和分子生物学鉴定,发现所分离的菌株为猪葡萄球菌,并将其命名JLHN15。由猪葡萄球菌引起猪化脓性肺炎或胸膜肺炎在国内外尚未见有报道,应引起国内临床兽医工作者重视。
- 王明月王新平郭昌明邢泽黎朱利塞鲁海冰盖小春王方
- 关键词：猪葡萄球菌金黄色葡萄球菌猪渗出性皮炎
- 猪流行性腹泻病毒病S蛋白单抗制备及夹心ELISA检测PEDV方法的建立与应用被引量：15
- 2017年
- 应用PCR扩增出PEDV毒株的纤突糖蛋白S基因序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建出pGEX-4T-1-S表达载体。应用IPTG诱导表达重组S蛋白,并将重组蛋白以弗氏完全/不完全佐剂乳化后免疫小鼠,制备抗PEDV S蛋白的单克隆抗体,并以此建立了检测PEDV抗原的双抗体夹心ELISA方法,确定、优化了所建立的ELISA反应条件。以建立的双抗体夹心ELISA和RT-PCR方法对PEDV样品进行了比较检测,两者的符合率为100%。应用ELISA检测了吉林省疑似PED流行猪场的粪便样品,发现PEDV阳性检出率为68%。该研究为PED诊断及流行病学调查提供了一种特异、敏感、快速和易于在基层应用的技术方法及本病的防治提供了流行病学理论依据。
- 王明月王明月刘亚静郭昌明朱利塞邢泽黎朱利塞欧阳红生王新平
- 关键词：猪流行性腹泻猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISAS蛋白
- 从暴发严重腹泻羊群中检出G种肠道病毒被引量：16
- 2016年
- 从吉林省某羊场暴发的临床上以严重腹泻、发热、流涎、口腔黏膜严重溃疡为特征的未明疫病病羊体内分离到大小为20-30mn病毒粒子。病毒生物学特性、理化学特性和分子生物学特性鉴定发现，该病毒粒子为肠道病毒，命名为OEV-JL14毒株。核苷酸序列测定与比对分析发现，OEV-JL14与OEV—TB4的同源性最高，只有68．8％。进化树分析表明OEV-JL14为G种肠道病毒。本研究首次在国内从病羊体内分离鉴定出羊肠道病毒，该结果将为羊新发肠道病毒感染的诊断及防制提供理论依据。
- 王明月王新平朱利塞邢泽黎郭昌明鲁海冰杨丽
- 关键词：新发传染病
- 双抗体夹心ELISA检测牛肠道病毒抗原方法的建立及流行病学调查被引量：24
- 2016年
- 应用大肠杆菌表达纯化的E种肠道病毒HY12 VP1和VP2重组蛋白制备的抗体,建立了检测牛肠道病毒病原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省不同地区的牛群感染BEV进行了病原流行病学调查。结果,应用方阵法确定的抗VP1鼠源Ig G作为捕获抗体的最佳包被量为0.75 g/100 L,酶标抗体的最佳稀释度为1∶3 600。对大量阴性粪便样品进行了检测及其统计学处理,确定了双抗体夹心ELISA检测BEV的判定标准,样品D_（490）值≥0.143判定为阳性。特异性、敏感性等试验结果表明,所建立的检测BEV抗原方法具有特异、敏感和快速等特点。与RT-PCR方法相比,该方法操作简单快速,易在基层推广应用。对吉林省不同地区牛群粪便样品进行了检测,发现不同地区牛群的BEV感染率为8.16%~58.7%。本研究首次建立了检测BEV的双抗体夹心ELISA方法,为BEV感染的诊断、流行病学调查及本病防治提供了方法和理论依据。
- 邢泽黎王新平朱利塞鲁海冰郭昌明盖小春王明月
- 关键词：VP1VP2双抗体夹心ELISA流行病学调查
- 牛肠道病毒抗体检测方法及病毒试验感染小鼠抗体消长规律被引量：1
- 2016年
- 应用表达纯化的E种肠道病毒HY12VP2重组蛋白作为包被抗原,建立了检测E种肠道病毒抗体的间接ELISA方法,并对实验感染小鼠抗体消长规律进行了研究。结果表明,VP2抗原最适包被浓度为300ng/孔,抗原包被最佳条件为37℃60min;封闭条件为5%脱脂奶粉37℃封闭60min;HRP酶标二抗最适稀释度为3 000×,最佳感作条件37℃90min。通过测定阴性小鼠血清样品,确定阴性和阳性血清临界值判定标准为0.091 2。与病毒中和试验相比,间接ELISA方法敏感性高,特异性强。统计学分析显示,阳性血清和阴性血清样品板内变异系数分别为3.8%和5.2%;板间阳性和阴性样品检测百分率变异系数分别为4%和4.3%,具有良好的重复性。小鼠感染病毒1周后开始产生抗体,随后抗体滴度逐渐增加,至感染6周时,抗体滴度达到峰值,之后逐渐下降。小鼠实验感染病毒抗体消长规律为本病的免疫机理和疫苗研制打下基础。
- 盖小春王新平邢泽黎朱利塞鲁海冰王明月张群刘丹
- 关键词：间接ELISA抗体消长规律
- 羊肠道病毒单克隆抗体的制备及鉴定被引量：7
- 2017年
- 根据本实验室分离的国内首株羊肠道病毒CEV-JL14的核苷酸基因组序列,设计并合成了羊肠道病毒VP1基因的引物,并应用RT-PCR扩增了VP1基因片段。扩增的VP1基因片段克隆到原核表达载体pGEX-4T-1的EcoRⅠ/BamHⅠ的酶切位点。重组质粒经酶切鉴定和序列测定正确后,转化到BL21,并以IPTG诱导表达了VP1重组蛋白。重组蛋白纯化后以弗氏完全佐剂乳化,按一定的程序免疫BALB/c小鼠,加强免疫3次后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经过3次亚克隆获得了5株表达VP1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以ELISA对杂交瘤分泌的IgG亚类进行了鉴定,结果4株为IgG1亚类,1株为IgG2b。以免疫酶单层细胞技术鉴定了单克隆抗体,结果显示,获得的单克隆抗体可以特异性检出羊肠道病毒抗原。本试验在国内首次获得了抗羊肠道病毒的单克隆抗体,将为羊肠道病毒的致病机理、诊断及流行病学研究奠定基础。
- 鲁海冰王明月朱利塞刘亚静郭昌明张群袁悦涂长春王新平
- 关键词：单克隆抗体
