陈志文
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中山大学孙逸仙纪念医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Fonsecaea monophora多聚酮合酶基因的扩增及敲除载体的构建被引量：1
- 2016年
- 目的扩增Fonsecaea monophora中控制黑素合成的多聚酮合酶(polyketide synthases,PKS)基因并测序,构建PKS基因敲除载体。方法扩增PKS基因,根据测序结果设计引物,从Fonsecaea monophora基因组DNA扩增PKS基因5’-同源臂和3’-同源臂,从质粒pBHt1中扩增潮霉素B抗性标记基因(hyg),最后将各片段插入载体PDHt/sk中。结果测序得到5 389bp大小的PKS基因序列,构建了PKS基因的敲除载体,用酶切及测序等方法鉴定载体构建成功。结论成功构建Fonsecaea monophora PKS基因敲除载体,为研究PKS基因及黑素的生物学功能奠定了良好的基础。
- 肖星张军民冯姣陈志文陈春梅何娅贺丹孙九峰席丽艳
- 关键词：根癌农杆菌
- 马尔尼菲篮状菌感染动物模型的研究进展被引量：3
- 2018年
- 马尔尼菲篮状菌Talaromyces marneffei是一种温度双相性致病真菌,原名马尔尼菲青霉Penicillium marneffei。马尔尼菲篮状菌病是由马尔尼菲篮状菌感染引起的一种严重的深部真菌病,主要流行于东南亚地区,在我国主要以南方地区多见,该病与HIV/AIDS的流行有高度相关性。近年来,随着艾滋病发病率的上升,马尔尼菲篮状菌病的发病率呈逐年上升趋势。该病发病隐匿,病死率高,但致病机制尚不明确。动物模型能够为疾病的发病机理和临床治疗等研究提供充分有力的证据,本文综述了马尔尼菲篮状菌感染动物模型的研究进展,对几种新型的动物模型进行了探讨。
- 贺莉雅黄晓雯刘应辉陈志文陈志文
- 关键词：动物模型大蜡螟秀丽隐杆线虫斑马鱼
- 构建以eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体
- 2016年
- 目的:构建以绿色荧光蛋白eGFP为报告基因的毕赤酵母表达载体,为后续致病真菌功能基因的eGFP融合基因过表达作铺垫。方法:利用In-Fusion系统构建eGFP的表达载体PPICZαB-eGFP,氯化锂转化毕赤酵母X33,通过含Zeocin(100μg/mL)抗性的YPD培养基筛选,将得到的菌落X33-eGFP以引物3'-AOX/5'-AOX及eGFP-F/eGFP-R进行PCR,产物行琼脂糖凝胶电泳、测序验证eGFP片段是否成功插入,最后甲醛诱导表达。结果:以X33-eGFP为模板的PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果显示片段eGFP成功插入至载体中,测序验证无突变。经甲醛诱导后的毕赤酵母X33-eGFP在蓝色荧光激发下,可观察到发出绿色荧光。结论:成功建立了毕赤酵母X33-eGFP,且证明了eGFP片段可以在毕赤酵母AOX启动子中得到表达。
- 陈志文冯姣蒋敏敏陈春梅肖星何娅易修文陈庭金席丽艳
- 关键词：绿色荧光蛋白毕赤酵母克隆
- 原生质体介导马尔尼菲青霉基因转化体系的优化
- 2016年
- 目的 优化原生质体介导的马尔尼菲青霉转化体系,为其基因功能研究提供良好的平台。方法 通过原生质体介导将构巢曲霉（Aspergillus nidulans）pyrG基因插入马尔尼菲青霉尿嘧啶缺陷株ligD（pyrG-,ligD-）中,在不含尿嘧啶的培养基中筛选阳性转化子,运用PCR验证重组子,通过改变影响转化效率的酶解时间、培养基浓度、质粒浓度、不同配方的原生质体洗涤液STC和不同配方的原生质体助融剂PTC 5个条件对体系进行优化。结果 PCR验证A.nidulans pyrG基因成功的插入ligD中,转化子可稳定传代。最适合ligD原生质体转化效率的条件为：酶解时间6h,PTC（60%PEG-4000,100mmol/L Tris-HCl pH8.0,100mmol/L CaCl2）,每100μL原生质体（106-107/mL）加入2.5μg质粒,0.6 mol/L蔗糖SD/SDU筛选/再生培养基,每1μg质粒转化子可达68个左右。结论 成功优化了原生质体介导马尔尼菲青霉转化体系的条件,优化后该方法转化效率高,为基因功能研究提供良好平台。
- 陈春梅冯姣陈志文肖星蒋敏敏史茗岚贺莉雅蔡文莹席丽艳李希清
- 关键词：马尔尼菲青霉原生质体
