孙林
- 作品数：5 被引量：12H指数：3
- 供职机构：广西医科大学蛇毒研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 眼镜蛇毒NGF通过PI3K/AKT信号通路对肝星状细胞的影响被引量：4
- 2016年
- 为探讨PI3K/Akt信号通路在眼镜蛇毒神经生长因子(NGF)诱导肝星状细胞凋亡中的作用,本实验分别采用CCK8和流式细胞术检测NGF对HSC-T6细胞增殖及凋亡作用,从而找出NGF作用HSC-T6细胞的最小有效浓度,同时应用Western Blot法分析NGF对细胞蛋白Akt磷酸化水平的影响。结果发现NGF浓度为4μg/m L时为诱导HSC-T6细胞凋亡的最小有效浓度,并且在作用HSC-T6细胞后,P-Akt的表达水平降低,Akt的表达量却增加。将该浓度NGF与信号通路抑制剂LY294002联合使用则协同作用增强。因此,眼镜蛇毒神经生长因子诱导HSC-T6细胞凋亡作用与PI3K/Akt信号通路有关。
- 张可星张学荣侯瑞雪孙林蔡凤桃廖明班建东陈缨
- 关键词：HSC-T6凋亡PI3K/AKT信号通路
- 广西眼镜蛇毒神经生长因子分离纯化方法被引量：1
- 2016年
- 为了得到更高纯度和活性的广西眼镜蛇毒神经生长因子(never growth factor,NGF),我们对原有的分离纯化方法进行改进。采用DEAE CL-6B离子交换柱、Sephadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S离子交换柱结合的方法进行分离。在分离纯化过程中,采用PC12细胞检验每一步所得结果中的NGF活性,并测定NGF诱导PC12细胞分化的最小浓度。经DEAE CL-6B离子交换柱、Sephadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S离子交换柱分离纯化后,得到的第二峰具有NGF活性,并且已达到电泳纯。经PC12细胞验证后,确定NGF诱导PC12细胞分化的最小浓度为0.1μg/m L。
- 侯瑞雪张学荣张可星廖明孙林蔡凤桃班建东农君陈缨
- 关键词：PC12细胞SDS-PAGE电泳
- 眼镜蛇毒NGF通过PI3K/Akt促人肝星状细胞凋亡的机制研究被引量：7
- 2018年
- 目的探讨眼镜蛇毒神经生长因子NGF对肝纤维化关键细胞LX2的作用及机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度NGF和LY294002对LX2细胞增殖的影响,流式法检测NGF对LX2细胞凋亡的影响,Western blot法研究NGF和LY294002单用与联用对p-Akt蛋白水平表达的影响。结果NGF可降低LX2细胞存活率,最小有效浓度为1 mg·L^(-1);增加LX2细胞凋亡率;降低p-Akt表达水平,而对Akt的表达水平无明显影响。结论 NGF可通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活,促进LX2细胞凋亡,并有一定的浓度依赖性。本研究对阐明肝纤维化的发病机制,为临床上治疗肝纤维化均有重要意义。
- 蔡凤桃张学荣孙林王秀男廖明班建东陈缨农君
- 关键词：人肝星状细胞眼镜蛇毒凋亡PI3K/AKT
- IGF1R 3'UTR多态性位点rs2016347与hsa-miR-3175结合差异的分析
- 2017年
- 为了探究位于IGF1R基因3'UTR与前列腺癌(prostate cancer,PCa)相关的多态性位点rs2016347通过改变与miRNA结合影响PCa的风险,本研究用miRbase预测靶向miRNA,然后用热力学模型方法计算结合能情况,最后用双荧光素酶报告基因技术对HEK293T在体外检测改变rs2016347位点对靶向miRNA结合的影响。miRbase预测结果显示,hsa-miR-3175与IGF1R的结合区位于多态性位点rs2016347。热力学模型方法计算结果表明,相对位点G,hsa-miR3175与IGF1R的3'UTR端在rs2016347位点T上更能有效结合。双荧光素酶报告基因的检测结果显示,hsa-miR-3175能与带有rs2016347等位位点(G或T)IGF1R 3'UTR结合,hsa-miR-3175与等位位点T的结合更稳定,hsa-miR-3175与IGF1R基因的结合起到稳定IGF1R基因表达的作用。多态性位点rs2016347等位位点T在PCa的发展中风险性更大。
- 余雷张学荣胡艳玲王慧敏孙林
- 关键词：前列腺癌IGF1R多态性位点
- 眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用被引量：3
- 2017年
- 为了得到高纯度眼镜蛇毒细胞毒素-4N,探索眼镜蛇毒中细胞毒素-4N(cytototxin-4N,CTX-4N)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC-T6)的增殖抑制作用。本研究采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、Spehadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱结合的方法对眼镜蛇毒蛋白进行分离纯化。在每一步分离纯化过程中,采用CCK-8法检测各蛋白峰组分对HSC-T6细胞的增殖抑制作用活性,收集增殖抑制作用最强的CTX-4N峰。经SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度,Nano-LC-ESI-MS/MS质谱方法鉴定其组分,Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂检测CTX-4N对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,从而确定其药理作用。经DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换柱、Spehadex G-50凝胶层析柱、Macro-prep High S阳离子交换柱分离纯化后得到一个电泳纯度的蛋白,蛋白质谱鉴定为CTX-4N,分子量约为9.605 k D。不同浓度的CTX-4N作用HSC-T6细胞24 h后,随着其浓度的增大对HSC-T6细胞增殖抑制作用越强,呈剂量-效应关系,IC_(50)为(12.836±0.045)μg/m L。因此,本研究建立一种眼镜蛇毒细胞毒素-4N的分离纯化方法,并确定了其对HSC-T6细胞的增殖抑制的药理作用随浓度的增加而增强,为进一步研究其药理作用提供一定的理论依据。
- 孙林张学荣蔡凤桃王秀男余雷廖明班建东
- 关键词：眼镜蛇毒分离纯化肝星状细胞
