王佳雯
- 作品数：15 被引量：37H指数：4
- 供职机构：长春中医药大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 人参混伪品发展历史及当前药材市场人参品质调查被引量：5
- 2016年
- 人参混伪品现象从古至今一直存在,古代存在以相似植物假冒人参和浸泡后再销售的情况。为了了解当前人参药材市场现状,对河北省安国市、安徽省亳州市、江西省樟树市3大药材市场进行了市场调研。结果发现,人参伪品已经很少发现,但随着人参价格增长,以次充好问题凸显,主要表现在生晒参和保鲜参经乙醇浸提后加工再售、熏硫防腐、加工红参掺糖、销售病害人参等问题。针对这些问题本文提出增强人参供应能力,建立人参品质评价体系等解决思路,为国家有关部门加强对人参市场监管及质量控制提供参考。
- 王晶晶陈娜韩雪陆志成王佳雯赓迪王春梅林瑞超
- 关键词：人参混伪品
- 人参根提取物对小鼠脾淋巴细胞自噬、增殖和细胞因子分泌的影响及机制研究被引量：11
- 2020年
- 目的:研究人参根提取物对小鼠脾淋巴细胞自噬、增殖及细胞因子分泌的影响,并研究其作用机制。方法:将小鼠脾淋巴细胞分为空白对照组、阳性对照组(刀豆蛋白A,5μg/mL)和不同质量浓度人参根提取物组(32、125、500μg/mL,以冻干粉末计)。各组细胞加入相应药物培养48 h后,分别采用吖啶橙染色法检测细胞的自噬情况;采用CCK-8法检测细胞的增殖情况;采用酶联免疫吸附法测定细胞培养液中白细胞介素4(IL-4)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;采用Western blotting法检测细胞中微管相关蛋白轻链β3(LC3B)、酵母ATG6同源物(Beclin-1)的表达水平以及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平。结果:与空白对照组比较,32、125、500μg/mL人参根提取物均能够增加小鼠脾淋巴细胞酸性自噬体的数量(P<0.05或P<0.01);125、500μg/mL人参根提取物均可显著提高细胞存活率,显著提高细胞中IL-4、IL-6和TNF-α的水平,显著促进细胞中LC3BⅠ向LC3BⅡ转化,显著上调细胞中Beclin-1蛋白表达水平,显著提高AMPK蛋白的磷酸化水平,显著降低AKT和mTOR蛋白的磷酸化水平,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:人参根提取物能通过激活AMPK、抑制AKT活化来抑制mTOR活性,从而诱导小鼠脾淋巴细胞发生自噬、激活脾淋巴细胞活性、调节细胞因子分泌以发挥免疫增强作用。
- 李芳宇齐滨边帅赵月卢姝言王佳雯赵大庆
- 关键词：脾淋巴细胞自噬细胞因子
- 梅花鹿胸腺素β4基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2017年
- 为了构建梅花鹿胸腺素β4(Tβ4)基因真核表达载体,使用TRIzol法提取梅花鹿鹿茸总RNA,RT-PCR方法特异性扩增梅花鹿Tβ4基因,目的基因插入真核表达载体VR1012构建表达质粒,将质粒瞬时转染到293T人胚肾细胞系,使用Western blot和免疫荧光方法检测目的基因的表达。结果显示:克隆得到的梅花鹿Tβ4基因长度为135 bp,编码44个氨基酸,成功构建真核表达载体VR1012-Tβ4-HA,转染后梅花鹿Tβ4在293T细胞中表达,而且主要表达在细胞浆中。本试验为进一步研究Tβ4在鹿茸生长中的作用奠定了基础。
- 王佳雯高云鹏王敏王思明赵雨白雪媛
- 关键词：梅花鹿胸腺素Β4质粒构建转染真核表达
- HPLC法同时测定利心丸中粉防己碱和防己诺林碱含量被引量：4
- 2017年
- 目的:建立利心丸含量测定方法。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法测定。色谱柱:Zorbax SBAq(5μm,4.6mm×250mm),流动相:甲醇-乙腈-水-二乙胺(52∶20∶28∶0.08);检测波长:282nm,柱温:25℃,流速:1.0m L/min。结果:粉防己碱和防己诺林碱的线性范围分别是0.2580-1.5480μg(r=0.9996)、0.1348-0.8085μg(r=0.9998),粉防己碱和防己诺林碱的平均加样回收率分别是97.88%(RSD=1.61%)、98.18%(RSD=2.08%)。结论:该方法操作简便易行,专属性强,准确可靠,可用于利心丸的质量控制。
- 白雪媛尹翌秋王彤张巍王佳雯赵雨赵大庆
- 关键词：利心丸高效液相色谱粉防己碱防己诺林碱
- 人参Cu/Zn SOD原核可溶性表达条件的优化被引量：4
- 2018年
- 目的在大肠杆菌中高效表达可溶性人参SOD,纯化后检测其活性。方法人参SOD cDNA插入到原核表达载体pET30α中,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达。分别对诱导时间、诱导温度、IPTG浓度以及离子浓度进行条件优化。对表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色检测。检测上清中蛋白的抗氧化活性。结果双酶切结果显示质粒构建成功,经过条件优化,表达的SOD蛋白主要存在于破碎菌体的上清中,表达量约占菌体上清总蛋白的50%,上清酶活达到363.9 U/mg。结论成功在大肠杆菌中高效表达了可溶性人参SOD蛋白,且具有较高的酶活性,为其工业化生产和应用奠定了基础。
- 高云鹏赵雨王思明刘美辰王佳雯
- 关键词：人参CU/ZNSOD可溶性表达原核
- 3-酮基嘌呤还原酶(TSC10)基因表达载体的构建及其在毕赤酵母中的表达
- 2018年
- TSC10基因所编码的3-酮基嘌呤还原酶是酵母中神经酰胺合成的重要因子。设计了一种从酵母中提取神经酰胺经济、便捷、高效的方法:(1)利用构建含有TSC10基因的毕赤酵母GS115表达载体p PIC3.5K-TSC10;(2)电转化法将该表达质粒转化到GS115感受态细胞中;(3)用G418筛选以及PCR鉴定;(4)使用qRT-PCR和SDS-PAGE进行检测。结果经过G418筛选以及PCR鉴定后确定获得了包含TSC10基因的毕赤酵母转化子,经过qRT-PCR和SDS-PAGE进行检测后发现TSC10基因在20个阳性菌株中均可以稳定、高效表达。成功构建了3-酮基嘌呤还原酶高表达的毕赤酵母菌株,并为后续获得高收率神经酰胺奠定了基础。
- 郑丽娜刘美辰王思明白雪媛赵雨赵大庆王佳雯
- 关键词：毕赤酵母基因表达
- 梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞永生化细胞株的构建及鉴定被引量：2
- 2017年
- 分离梅花鹿鹿茸软骨细胞和间充质干细胞,使用SV40 LT抗原慢病毒载体建立永生化软骨细胞和间充质干细胞系并鉴定。将含有SV40 LT基因片段的慢病毒载体,转染人胚肾细胞293T获得包装后的病毒粒子,感染鹿茸软骨细胞及间充质干细胞,连续传代培养,通过形态观察、细胞增殖、real-time PCR、甲苯胺蓝染色法和流式细胞术等方法检测SV40 LT抗原表达以及细胞性质。实验所建立的永生化鹿茸软骨细胞系与间充质干细胞系能够稳定传代并具有较强的体外增值活性。RT-PCR检测到SV40T抗原的表达,通过甲苯胺蓝染色法和流式细胞术鉴定所得细胞系具有原代细胞的基本性质。成功获得永生化的软骨细胞与间充质干细胞系,为后续鹿茸生长及发育研究奠定了基础。
- 王佳雯高云鹏王敏王思明赵雨白雪媛
- 关键词：软骨细胞间充质干细胞永生化慢病毒载体
- 重组人表皮生长因子在毕赤酵母X33中的构建、表达和纯化被引量：2
- 2018年
- 在毕赤酵母X33中表达人表皮生长因子并纯化,对表皮生长因子(EGF)进行密码子优化,构建pPICZa A-EGF真核表达质粒,转化X33感受态细胞;利用抗性筛选以及PCR鉴定阳性菌株。经过甲醇诱导和镍柱纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白分泌表达情况。成功构建了表达pPICZa A-EGF真核表达质粒,转入X33中获得阳性菌株,成功诱导蛋白分泌表达并纯化。在毕赤酵母X33中成功表达人表皮生长因子,纯化后纯度为80%,收率为5.8 mg/L。
- 高云鹏赵雨王新宇白雪媛王佳雯
- 关键词：表皮生长因子毕赤酵母蛋白表达纯化
- 梅花鹿胸腺素beta10基因真核表达载体的构建及鉴定
- 2017年
- 转录组测序发现Tβ10在鹿茸中高表达,为了研究Tβ10与鹿茸生长发育间的关系,构建Tβ10真核表达载体。使用Trizol法提取梅花鹿鹿茸总RNA,PCR技术特异性扩增梅花鹿Tβ10基因,利用酶切位点将目的片段插入真核表达载体VR1012构建表达质粒,通过Fugene~?6将质粒瞬时转染到293T细胞中,使用Western blotting和免疫荧光方法检测目的基因的表达。结果发现克隆得到的梅花鹿Tβ10基因长度为129bp,编码42个氨基酸,成功构建真核表达载体VR1012-Tβ10-HA,转染后使用Western blotting方法检测到梅花鹿Tβ10在293T细胞中表达,免疫荧光方法证明梅花鹿Tβ10主要定位在细胞浆中。
- 王佳雯高云鹏孙天霞刘美辰赵雨王思明
- 关键词：梅花鹿质粒构建转染真核表达
- 人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞B16的增殖抑制及对Bcl-2/Bax表达的影响被引量：2
- 2017年
- 研究人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤细胞的增殖抑制作用及对Bcl-2/Bax表达的的影响:(1)MTT法测定人参水溶性总蛋白对黑色素瘤B16细胞株的增殖抑制率。(2)RT-PCR(Real-time PCR)法检测Bcl-2、Bax基因的mRNA表达情况。(3)Western blot测定凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。结果:(1)人参水溶性总蛋白对小鼠黑色素瘤B16细胞株有明显的增殖抑制作用,其抑制率随着加药浓度的增加而升高;并与加药浓度呈现一定的量效关系。(2)随着人参水溶性总蛋白浓度的增高(0、100、500、1 000μg/m L),RT-PCR检测的Bcl-2 mRNA相对表达量逐渐降低,Bax mRNA相对表达量逐渐升高,当加药浓度为1 000μg/m L时,Bcl-2的相对表达量最低,为0.20±0.05;Bax的相对表达量最高,为16.83±0.07;与对照组相比,Bcl-2和Bax基因的相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)经Western blot测定,各组Bcl-2蛋白的表达均低于对照组,各组Bax蛋白表达均高于对照组,且随着加药浓度的增加,Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,Bax蛋白表达量逐渐升高。说明人参水溶性总蛋白可以抑制小鼠黑色素瘤B16细胞株增殖,其分子机制可能与调控Bcl-2/Bax凋亡蛋白的表达有关。
- 张丽轩王思明王敏尹翌秋王佳雯赵雨
- 关键词：黑色素瘤细胞凋亡基因
