- 新型机械激活离子通道蛋白Piezo1通过MAPK／ERK1／2信号通路介导软骨细胞凋亡的机制被引量：18
- 2016年
- 目的探讨新型机械激活离子通道蛋白Piezol是否参与调控关节软骨损伤患者软骨细胞的过度凋亡及Piezol介导的细胞凋亡是否以经典丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号通路细胞外反应激酶（ERK）1／2为下游信号通路启动细胞凋亡。方法体外培养关节软骨损伤患者退变软骨细胞，利用多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T处理软骨细胞，根据预实验结果分成0、2、12、24、48h牵张应力组和相应的抑制剂红玫瑰毛蜘蛛来源刮刀样机械敏感毒剂4型（GsMTx4）组。实时聚合酶链反应（RT—PCR）检测不同力学条件刺激下各组细胞的Piezol和ERKl／2的表达量，以及抗凋亡基因B细胞淋巴瘤／白血病-2（Bax／Bcl．2）及凋亡效应蛋白（caspase）．3的表达量。免疫荧光定位Piezol蛋白及ERKl／2在软骨细胞的表达位置。检测各分组的凋亡情况。结果RT—PCR结果显示PizeolmRNA在退变软骨中有少量表达，12h表达量增加，24h表达量达到峰值，但48h表达量下降。GsMTx4处理后的各组表达均下降。ERK1／2、Bax／Bcl-2、caspase-3的表达也出现相同趋势，2h加力组早期细胞凋亡率开始增加（0．1981比0．0214，P=0．0137），12h加力组晚期凋亡率开始增加，24h]J1]力组的晚期细胞凋亡率最高，但48h加力组凋亡率比24h加力组有所降低（0．4971比0．7431，q=0．0359）。Piezol蛋白可以在细胞核和细胞质表达，ERK1／2在细胞质表达较多。结论机械敏感性离子通道Piezol参与骨性关节损伤的软骨细胞晚期凋亡过程，且通过MAPK／ERKl／2的经典MAPK信号通路启动细胞的凋亡过程。
- 李晓飞张钊李晓东王天宝张海宁
- 关键词：软骨细胞关节疾病凋亡
- 型机械敏感性离子通道在软骨细胞凋亡中的作用机制被引量：4
- 2017年
- 目的观察新型机械敏感性离子通道压电蛋白1（Piezo1）在骨性关节炎患者软骨细胞中的表达并探讨其在软骨细胞凋亡中的作用机制。方法体外培养骨性关节炎患者退变软骨细胞，利用细胞体外加力实验系统（FX-5000 Tension System）处理细胞，根据预实验结果分成0 h加力组（空白组）、2 h加力组、12 h加力组、24 h加力组、48 h加力组和相应的抑制剂红玫瑰毛蜘蛛来源刮刀样机械敏感毒剂4型（GsMTx4）组、抑制剂氟甲基酮（Z-ATAD-FMK）组。利用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测不同力学条件刺激下各组细胞的Piezo1、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-12（Caspase-12）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、激活因子4（ATF4）和C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）的表达量。钙离子荧光探针（Fluo3-AM）试剂盒检测空白组，加力组和抑制剂组细胞胞质内的钙离子含量。膜联蛋白V-碘化丙锭（Annexin V-PI）凋亡试剂盒检测各分组的凋亡。结果（1）Pizeo1 mRNA在骨性关节炎退变软骨中有少量表达，且12 h加力组表达量增加，为51.21±7.42（采用2－ΔΔCt的方法无计量单位），24 h加力组达到高峰，为153.98±10.34，48 h加力组为73.98±14.01，与24 h加力组比较，Piezo1 mRNA的表达出现下降（P＝0.013）。内质网应激信号分子Caspase-12、PERK、GRP78、ATF4和CHOP的mRNA的表达也出现相同趋势。（2）2 h加力组软骨细胞胞质中的钙离子较空白组有所增加，钙离子荧光强度由（226±25） nm增加到（481±19） nm，P＝0.032，12 h加力组钙离子浓度升高，荧光强度为（612±21） nm，24 h加力组钙离子浓度达峰值，荧光强度为（1 009±29） nm，48 h加力组钙离子荧光强度为[（609±91） nm]，48 h加力组钙离子浓度较24 h加力组有所降低（P＝0.017）。（3）在牵张应力作用下，2 h加力�
- 王天宝李晓飞冷萍荣春张钊李晓东张海宁
- 关键词：软骨细胞骨性关节炎内质网应激凋亡机械牵张
- 椎间盘髓核细胞应力模型中Piezo1蛋白的表达被引量：4
- 2017年
- 目的探讨新型机械激活性离子通道Piezo1蛋白在人椎间盘髓核细胞应力模型中的表达。方法将人椎间盘髓核细胞分成牵张应力组和牵张应力+Piezo1蛋白抑制剂组,构建人椎间盘髓核细胞体外培养-应力刺激模型,采用多通道细胞牵张应力加载系统FX-4000T处理髓核细胞,两组均加载0、2、12、24、48h的周期性牵张应力。采用RT-PCR、Western-blot技术检测两组Piezo1的表达水平,应用激光共聚焦显微镜检测Piezo1蛋白荧光的强弱。结果 RT-PCR结果显示,牵张应力组给予2h周期性牵张应力时,Piezo1 mRNA表达较给予0h周期性牵张应力时增加,给予24h周期性牵张应力时Piezo1mRNA表达高于其他牵张应力作用时,而给予48h周期性牵张应力时较给予24h周期性牵张应力时降低,差异有显著性(F=13.917,P<0.05)。Western-blot结果显示,牵张应力组给予2h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达较给予0h周期性牵张应力时略有增加,给予24h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达高于其他各组,而给予48h周期性牵张应力时Piezo1蛋白表达较给予24h周期性牵张应力时降低,差异有显著性(F=12.781,P<0.05)。牵张应力+Piezo1蛋白抑制剂组Piezo1mRNA及其蛋白表达均明显小于牵张应力组。Piezo1蛋白表达于髓核细胞的细胞质与细胞核,荧光较强。结论人椎间盘髓核细胞中Piezo1蛋白稳定表达,并且与应力加载时间相关。
- 王天宝李晓飞冷萍马佳超张海宁
- 关键词：椎间盘移位椎间盘髓核细胞
- 股内侧肌下入路和有限髌旁入路微创全膝关节置换术早期临床效果比较研究
- 目的： 评估微创股内侧肌下入路和有限髌旁入路TKA的早期临床效果。 方法： 纳入行首次全膝关节置换的患者90例，随机分为股肌下组和有限髌旁组，44例股肌下组患者行微创股内侧肌下入路行全膝关节置换，46例有限髌旁组患...
- 王天宝
- 关键词：全膝关节置换术临床疗效
- Piezo1蛋白经MAPK／ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制研究被引量：15
- 2016年
- 目的探讨骨关节炎患者软骨细胞中机械敏感性离子通道Piezol蛋白经MAPK／ERK5信号通路介导软骨细胞凋亡的机制。方法体外培养骨关节炎患者软骨细胞，应用细胞牵张应力加载系统对软骨细胞分别加载0h、2h、12h、24h和48h的周期性牵张应力，在各加力组加入Piez01的特异性拮抗剂GsMTx4和ERK5的特异性抑制剂BIX02188作为抑制剂组。用免疫荧光激光共聚焦显微镜观察定位Piezol蛋白在软骨细胞中的表达位置；用RT-PCR检测细胞Piez01、ERK5、凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-2相关x蛋白（Bcl．associatedXprotein，Bax）及Bcl-2相关促凋亡蛋白（Bcl咀ssociateddeathpromoter，BAD）的mRNA相对表达量；用AV-PI凋亡试剂盒检测细胞凋亡情况。结果激光共聚焦显微镜观察Piez01蛋白可以在细胞核和细胞质表达。RT-PCR检测PizeolmRNA在骨关节炎退变软骨中有少量表达，12h加力组Pize01、ERK5、BAD和BaxmRNA的相对表达量增加，24h达到峰值，48h表达量下降。而Bcl-2mRNA的相对表达量自2h开始下降，12h降到最低值，24h开始升高。Piezol蛋白特异性抑制剂GsMTx4组Pizeol、ERK5、BAD、BaxmRNA的相对表达量均下降，Bcl-2表达量升高。ERK5特异性抑制剂BIX02188组ERK5、BAD、BaxmRNA的相对表达量均下降，Bcl．2表达量升高，Piezol表达量不变。2h加力组细胞凋亡率于早期开始增加，晚期凋亡率无明显增加；12h加力组调亡率于晚期开始增加；24h加力组晚期细胞凋亡率最高；48h加力组晚期凋亡率较24h加力组降低。RT-PCR检测结果显示Piez01、ERK5、Bcl-2、BAD和BaxmRNA的表达量与晚期凋亡具有相似的表达趋势。结论Piezol参与骨关节炎的软骨细胞晚期凋亡过程，且通过MAPK／ERK5信号通路启动细胞凋亡。
- 李晓飞张钊王天宝王兰凤张海宁
- 关键词：离子通道软骨细胞MAP激酶信号系统细胞凋亡
- 机械敏感性离子通道的研究进展被引量：2
- 2016年
- 机械敏感性离子通道是一类与生物力学机械信号传递密切相关的离子通道,一经发现即引起国内外学者的广泛关注。骨细胞、软骨细胞和髓核细胞等均可感受细胞外环境中的力学机械刺激,通过机械敏感性离子通道激活细胞信号转导途径,影响细胞的增殖、分化、迁移以及凋亡。本文就有关机械敏感性离子通道的研究进行综述。
- 王天宝李晓飞张海宁王兰凤
- 关键词：离子通道
- p15、VEGF在胃癌中的表达
- 目的:探讨p15、血管内皮生长因子(VEGF)与胃癌发生、发展及临床病理因素的关系.材料与方法:应用免疫组织化学方法测定80例档存胃癌及26例胃良性病变石蜡包埋标本中P15、VEGF表达.结论:有癌中存在P15下调与VE...
- 王天宝
- 关键词：胃癌P15VEGF免疫组织化学
