李光宗
- 作品数：9 被引量：52H指数：4
- 供职机构：武警后勤学院附属医院更多>>
- 发文基金：天津市科技计划天津市应用基础与前沿技术研究计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 罗格列酮对高原肺水肿大鼠的保护作用被引量：2
- 2017年
- 目的探讨罗格列酮对高原肺水肿大鼠的保护作用。方法将36只sD大鼠随机（随机数字法）分为6组：对照组（Control）、低压低氧模型组（HH）、罗格列酮低剂量组[RSG—L，剂量为5mg／（kg·d）]、中剂量组[RSG-M，剂量为10ms／（kg·d）]、高剂量组[RSG—H，剂量为20mg／（kg·d）]、地塞米松组[Dex，剂量为4ms／（kg·d）]，每组6只。连续给药3d后，置于模拟海拔6000In低压低氧动物实验舱内，维持恒温恒湿，每24h给药1次。72h后，处死大鼠，用湿干质量比（W／D）法检测肺组织含水量，考马斯亮蓝法检测肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量，微量酶标法测量肺组织中谷胱甘肽（GSH）含量，TBA法测量肺组织中丙二醛（MDA）含量，wsT-1法测量肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性，ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）含量。光镜观察肺组织病理变化。结果与Control组比较，HH组W／D（5．08±0．24）和BALF蛋白含量（351：06±44．55）μg／mL明显增加（P〈0．01），病理结果显示肺泡及肺间质内可见红细胞，肺泡内有粉红色液体渗出，肺间隔增宽明显，炎细胞浸润；肺组织SOD活性（10．65±0．94）U／mgprot、GSH含量（1．63±0．20）μmol／grpot显著降低（P〈0．01），MDA含量（2．15±0．18）nmol／mgprot明显升高（P〈0．01），血清TNF-d（56．92±2．87）pg／mL、IL-6（217．80±48．01）pg／mL水平明显增加（P〈0．01），而IL-10（76．85±16．72）pg/mL水平下降（P〈0．05）；与HH组比较，罗格列酮各剂量组W／D和BALF蛋白含量明显下降，肺组织病理改变明显改善，肺组织SOD活性、GSH含量明显升高（P〈0．01），MDA含量降低（P〈0．01），血清TNF-仅、IL-6水平明显下降（P〈0．01），而IL-10水平明显上升（P〈0．01）。结论罗格列酮通过抑制氧化应激，减少炎症因子释放，
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- 关键词：罗格列酮高原肺水肿氧化应激炎症
- 高原低氧加重脂多糖诱导大鼠肺组织的慢性炎症被引量：2
- 2017年
- 目的探讨高原低氧对大鼠慢性炎症的影响。方法 40只SD大鼠随机均分为正常对照组(对照组)、慢性炎症组(慢炎组)、高原低氧组(高低组)、高原低氧+慢性炎症组(高+慢组);慢炎组大鼠尾静脉注射脂多糖(LPS,0.5 mg/kg),每周2次,连续注射4周,高+慢组经慢炎组相同处理后,同高低组大鼠一起置于模拟海拔6000m的高原低氧环境中连续3 d;然后进行肺组织取材、病理切片HE染色观察。外周血白细胞分类和计数,酶联免疫吸附实验(ELISA)分别检测血清和肺组织IL-6、TNF-α水平,Western印迹检测肺组织IL-6蛋白表达。结果经LPS和高原低氧暴露处理过的大鼠肺组织出现炎细胞浸润、肺泡间毛细血管扩张的病理学变化;外周血白细胞分类和计数。ELISA结果显示,与对照组相比,慢炎组、高低组均能导致大鼠外周血白细胞总数增加(P<0.01),血清和肺组织IL-6和TNF-α水平均升高(均P<0.05);高原低氧和慢性炎症具有交互作用(P<0.01),高+慢组进一步增加了外周血白细胞数,并促进IL-6和TNF-α的表达升高(P<0.01)。结论通过大鼠脂多糖慢性炎症模型,证实高原低氧可加重慢性炎症发展。
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- 关键词：炎症高原低氧脂多糖类白细胞介素6
- 接种密度对C57BL/6小鼠CIK细胞增殖、分化及杀瘤作用的影响被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨不同接种密度对C57BL/6小鼠细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖分化及杀瘤作用的影响,进一步优化CIK细胞培养方法。方法:按照1×10~6/mL(A组)、4×10~6/mL(B组)、8×10~6/mL(C组)、12×10~6/mL(D组)4种接种密度培养细胞,加入必要的细胞因子,14 d后收获细胞,通过流式细胞术、CCK-8法对细胞增殖、分化、杀瘤作用进行分析。结果:培养过程中,C组细胞形态及增殖能力优于A、B组,在14 d时收获细胞并对其进行检测时发现,C组CD3^+/NK1.1^+细胞所占比例明显高于A、B组,杀瘤活性也优于A、B组;D组细胞密度过大,在7 d细胞进入快速增殖期后出现大面积死亡。结论:适当提高C57BL/6小鼠CIK细胞的接种密度利于细胞增殖、分化及杀瘤作用的形成,选择8×10~6/mL的接种密度是较为合适的。
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- 关键词：细胞培养增殖
- 可溶性GST-CRH蛋白原核表达条件的优化及纯化被引量：5
- 2017年
- 目的通过谷胱甘肽巯基转移酶(GST)-促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)原核表达条件的优化及纯化,获得可溶性好、纯度高的重组GST-CRH蛋白。方法通过对GST-CRH转化菌表达温度、菌液密度(OD600)、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度以及诱导时间的摸索,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测可溶性GST-CRH蛋白的表达情况,GST琼脂糖凝胶进行GST-CRH的纯化,Western Blot对表达的目的蛋白进一步鉴定。结果起始OD6000.8、IPTG工作浓度0.1 mmol/L、30℃诱导8 h为GST-CRH最优诱导条件;融合蛋白经Western Blot鉴定为表达的GST-CRH,纯化后纯度>95%。结论建立了GST-CRH的原核表达及纯化方法,获得了高纯度的GST-CRH可溶性蛋白。
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- 关键词：促肾上腺皮质素释放激素原核表达纯化
- 3G-ELISA新方法在促肾上腺皮质素释素检测中的应用
- 2017年
- 目的:改进传统ELISA方法,提高其对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。方法:将一抗和二抗分别与纳米金和氧化石墨烯结合,应用于传统ELISA方法,通过纳米材料的信号放大作用,提高对痕量样本的检测灵敏度,降低检测限。结果:优化后的方法可对浓度为0.02μg/mL的促肾上腺皮质素释素进行检测,灵敏度提高了125倍。结论:改进后的方法性能稳定,重复性好,可用于生物样本中痕量被检测物的测定。
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- 关键词：酶联免疫吸附测定纳米金氧化石墨烯
- 抗Toll样受体4胞外C端结构域单克隆抗体制备及其治疗脓毒症的初步效果被引量：1
- 2016年
- 目的制备针对Toll样受体4（TLR4）胞外C端结构域的单克隆抗体，并探讨抗TLR4C端单克隆抗体对脓毒症的影响。方法原核表达、丙烯葡聚糖凝胶（SephacrylS-100）纯化获得大鼠来源的TLR4C端多肽（氨基酸序列：368—579，命名为TLR4-C），免疫6～8周雌性Balb／c小鼠，经细胞融合、抗体筛选、纯化等程序制备抗TLR4-C单克隆抗体，采用Western印迹、细胞免疫荧光对制备的TLR4-C单克隆抗体进行特异性检测。通过细胞实验和脓毒症动物模型实验进行抗体活性测定。（1）细胞实验：100μg/ml抗体加入培养的NR8383作用1h，加入10ng／ml脂多糖（LPS）继续培养12h后，ELISA检测培养基中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的释放水平；（2）脓毒症动物模型实验：40只SD大鼠按随机数字表法分为对照抗体组、B—D5抗体组，每组尾静脉分别注射50mg／kg相应抗体，1h后经腹腔给予10mg／kg致脓毒症剂量的LPS，4h后检测两组血清TNF—α含量，并连续72h观察两组动物存活情况。结果获得3株特异性高、且能结合TLR4-C和TLR4全蛋白的抗TLR4-C单克隆抗体。细胞活性测定显示，1株单克隆抗体（B—D5）能明显抑制细胞TNF—α的释放，其余2株对抑制细胞TNF-α的作用较弱。动物模型实验显示，B—D5抗体组TNF-α水平为（1．54±0．18）ng／ml，明显低于对照抗体组的（0．51±0．10）ng／ml（P〈0．01），B—D5抗体组存活率（70％）明显高于对照抗体组（30％）（P〈0．05）。结论制备的抗TLR4C端单克隆抗体具有很好的TLR4中和作用，明显提高大鼠的存活率，对LPS诱发的脓毒症具有较好的保护作用。
- 陈锋刘英富李光宗张益郁硕侯世科
- 关键词：TOLL样受体4抗体单克隆脓毒症
- 高原肺水肿发病分子机制研究进展被引量：10
- 2017年
- 高原肺水肿（High altitude pulmonary edema，HAPE）是一种威胁生命的非心源性肺水肿，通常发生于快速到达2500至3000m海拔的平原人群，其易感因素主要包括登山速度过快、到达的海拔高度较高、过度劳累、寒冷及上呼吸道感染。据报道，攀登4d到达4500m海拔的人群发病率仅为0．2％，而2d内到达5500m高度的人群发病率达到15％，是高原病中最常见的致死原因。目前认为HAPE的发病机制主要包括缺氧性肺动脉高压、血管通透性改变、肺泡液体清除功能降低、氧化应激及炎症反应5个方面，此外，HAPE还呈现出种族特异性和个体差异性，提示其受到遗传因素影响。
- 李光宗陈锋刘英富侯世科
- 关键词：高原肺水肿发病分子机制PULMONARY缺氧性肺动脉高压非心源性肺水肿海拔高度
- 脂多糖诱导脓毒症大鼠脑内氧化损伤及相关信号通路的研究被引量：5
- 2016年
- 目的探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的脓毒症造成大鼠脑内氧化损伤的作用及JNK、Nrf2相关信号的变化。方法将大鼠随机分为对照组、低剂量模型组(LPS 5 mg/kg)和高剂量模型组(LPS 10 mg/kg)。模型组造模24 h后,活杀大鼠,将脑组织完全取出后,剪碎并研磨成脑匀浆,检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢(H2O2)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的变化。利用qRT-PCR、Western印迹检测JNK与Nrf2蛋白在脑组织亚细胞中的表达水平。结果与对照组比较,在LPS诱导脓毒症大鼠模型中,模型组大鼠脑组织中,MDA、H2O2、SDH含量增加,SOD、GSH-Px、T-AOC含量减少,JNK mRNA水平与总蛋白水平未受明显影响(P>0.05),但磷酸化水平(p-JNK)显著升高(P<0.01);Nrf2 mRNA水平与总蛋白水平显著上调(P<0.01),且磷酸化水平(p-Nrf2)也显著升高(P<0.01),差异具有统计学意义。结论成功构建LPS诱导脓毒血症后大鼠脑内氧化损伤的病理模型,并发现在这一病理过程中p-JNK、总Nrf2以及p-Nrf2表达显著上调,提示JNK、Nrf2相关通路在LPS诱导脓毒症脑损伤中可能参与重要的介导作用。
- 陈锋刘英富李光宗张益郁硕樊毫军侯世科
- 关键词：脂多糖类脓毒症琥珀酸脱氢酶
- 柴胡皂苷a对大鼠急性脊髓损伤的神经保护作用与机制研究被引量：26
- 2017年
- 目的探讨柴胡皂苷a(saikosaponin a,SSa)对大鼠急性脊髓损伤早期机体免疫炎性水平的影响,并研究其可能存在的影响机制。方法取健康成年雌性SD大鼠72只,体质量220~250 g,随机分为假手术组(A组)、脊髓损伤组(B组)、SSa处理组(C组),每组24只。A组仅咬除棘突和椎板暴露脊髓;B、C组利用改良Allen重物打击法制作急性脊髓损伤模型,造模后即刻C组给予大鼠腹腔注射10 mg/kg SSa,B组注入等量生理盐水。术后24 h每组处死18只大鼠并取出脊髓组织,采用ELISA法检测TNF-α和IL-6浓度,Western blot检测NF-κB P65、NF-κB P-P65和水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)蛋白表达水平,HE染色观察脊髓组织形态;每组其余6只大鼠分别于术后1、3、7、14、21、28 d采用BBB评分和斜板实验评价大鼠双下肢运动恢复情况。结果术后各时间点A组BBB评分和斜板实验最大角度均显著高于B、C组(P<0.05),术后14、21、28 d C组上述指标显著高于B组(P<0.05)。ELISA检测示,A组TNF-α、IL-6浓度显著低于B、C组,C组显著低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测示,A组NF-κB P65、NF-κB P-P65和AQP4蛋白表达水平显著低于B、C组,C组显著低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。HE染色示,A组脊髓中神经细胞正常,无明显病变;B组脊髓中损伤部位可见神经元细胞,损伤处有出血、中性粒细胞浸润、神经细胞水肿;C组脊髓中可见神经元细胞,小胶质细胞轻度增生,病变较B组好转。结论 SSa通过抑制NF-κB信号通路和AQP4蛋白的表达,减轻急性脊髓损伤后机体炎性反应和组织水肿,从而具有一定保护神经的功能。
- 朱双龙段会全刘英富李光宗刘迎节黄梦强陈旭义徐云强
- 关键词：柴胡皂苷A脊髓损伤炎性反应水通道蛋白4神经保护
