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甘蓝型油菜温敏GMS TE5A幼蕾酵母双杂交cDNA文库的构建及筛选被引量：2: 2016年; 为进一步解析甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系(GMS)TE5A的不育机理,筛选与育性蛋白Bna A.tsMs互作的重要蛋白。提取不育系TE5A的幼蕾(直径≤2mm)总RNA,利用SMART(switching mechanism at 5'end of the RNA transcript)技术构建酵母双杂交cDNA文库和诱饵载体p GBKT7-Bna A.tsMs,转化酵母菌株Y2H gold,检测其毒性和自激活活性,通过Mating方法筛选与蛋白Bna A.tsMs互作的蛋白,并根据基因注释推测其功能。结果成功地构建了甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系TE5A幼蕾酵母双杂交cDNA文库,文库库容量为2×107cfu,重组率达到100%,插入片段平均长度大于1.8kb。发现诱饵载体p GBKT7-Bna A.tsMs对酵母没有毒性,没有自激活活性。筛选出49个候选互作蛋白,其中有丝分裂纺锤体检测点蛋白(BUBR1)、周期蛋白D3(cyclin-D3)和F-box蛋白(FBW2)三个互作蛋白可能与该不育蛋白相互作用,共同调控该不育系TE5A的育性。; 李可琪王莎莎曾新华闫晓红吴刚; 关键词：甘蓝型油菜

一种抗根肿病基因BjuVA03.TNL及应用: 本发明公开了一种抗根肿病基因BjuVA03.TNL及应用，涉及基因工程技术领域，其技术方案要点是：所述抗根肿病基因BjuVA03.TNL的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明通过远缘杂交将白菜和芥菜杂交人工合成...; 黄镇李可琪顿小玲徐爱遐于澄宇石益基郑琳

甘蓝型油菜温敏核不育系TE5A败育的细胞学及分子机理研究: 光温敏雄性不育系以其独特的优势，将成为培育两系杂交油菜的重要途径。光温敏雄性不育系败育机理的研究对其推广应用具有重要意义。本研究通过对甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系TE5A可育和不育花蕾的细胞学观察，明确不育系TE5A花...; 李可琪; 关键词：甘蓝型油菜雄性不育花药败育; 文献传递

甘蓝型油菜花序长发夹lhRNAi文库的构建: 2019年; 异源四倍体油菜含有大量多拷贝基因及冗余基因,难以通过T-DNA插入、物理及化学诱变等常规突变体库创制方法发掘功能基因。为开发适应于油菜简单高效的突变体库创制方法,本研究通过滚环复制方法构建了甘蓝型油菜的花序lhRNAi文库,并对这种新型的干扰文库进行质量评估;然后将该花序lhRNAi文库对甘蓝型油菜进行遗传转化,获得763株T0植株,从中鉴定分离出74株具有可见表型变异的花发育相关突变体,包括花瓣减少、形状异常,柱头卷曲,雄蕊退化萎缩,雄性不育、死蕾或花蕾闭合等。说明通过滚环复制介导的lhRNAi文库的构建方法可以成功应用到油菜中,这将为油菜花序发育相关基因的功能研究提供重要的研究平台。; 曾新华赵圣博李可琪袁荣吴刚闫晓红; 关键词：油菜花发育

甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系TE5A花药发育的细胞学研究被引量：9: 2016年; 【目的】明确甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系TE5A花药败育的时期及细胞学特征,为进一步研究其雄性不育的机理奠定理论基础。【方法】用不同温度(16℃和22℃)处理试验材料不育系TE5A,分别观察植株的育性及花器形态;并采用常规半薄切片技术,通过甲苯胺蓝、苯胺蓝和苏丹黑B等染料进行染色,观察并比较该不育系TE5A不育植株和可育植株花药发育的显微结构、胼胝质以及脂质体等脂类物质的异同;进一步通过透射电镜对其花药发育的超微结构进行比较观察。【结果】当把可育株油菜从16℃光照培养箱移到22℃光照培养箱后7 d,观察到花朵的育性转变为雄性不育。把22℃光照培养箱的不育株油菜移到16℃光照培养箱后,观察到先开放的花朵表现为雄性不育,而随后开放的花朵表现为雄性可育。在不育环境下的不育株TE5A花朵的花瓣大小和形态与可育株花朵没有明显差异,但不育株花朵的花丝显著短于可育株的花丝,并且花药萎缩、干瘪,没有花粉粒附着在上面。在不育环境下,不育系TE5A花药败育发生在花粉母细胞减数分裂时期,花粉母细胞减数分裂发生异常,没有二分体及四分体的形成,形成"拟小孢子"。胼胝质在花粉母细胞时期可以正常合成,但后续的降解滞后,在四分体时期没有降解,直至花粉粒成熟期才开始降解。绒毡层没有观察到明显异常,并能分泌脂质体等脂类物质。"拟小孢子"的花粉粒外壁发育异常,无法形成具有特殊柱状体和顶盖结构的花粉粒外壁,因此,不能结合孢粉素和脂质体等物质。随着花药的继续发育,最后"拟小孢子"逐渐降解,只剩下花粉空壳。【结论】甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系TE5A花朵的花瓣大小和形态与可育株花朵没有明显差异,但花丝显著缩短,花药萎缩、干瘪,没有花粉粒附着在上面。不育系TE5A花药败育发生在花粉母细胞减; 李可琪曾新华袁荣闫晓红吴刚; 关键词：甘蓝型油菜花药败育减数分裂

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李可琪

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