郭芳芳
- 作品数：11 被引量：8H指数：1
- 供职机构：北京市农林科学院畜牧兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市农林科学院科技创新能力建设专项北京市农林科学院青年基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 不同宿主源弯曲菌黏附侵袭肠上皮细胞及在鸡肠道内定殖的比较
- 2022年
- 【背景】弯曲菌(Campylobacter)是重要的人畜共患病原菌,可在多种动物肠道定殖,但不同宿主源弯曲菌对肠上皮细胞的黏附侵袭特征及在鸡肠道内的定殖能力并不明确。【目的】探究不同宿主源弯曲菌对不同宿主肠上皮细胞黏附侵袭及在鸡肠道内定殖能力的差异性。【方法】利用5株来自不同宿主源弯曲菌,包括人源、鸡源、鸭源和牛源空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)及猪源结肠弯曲菌(Campylobacter coli),在对菌株PCR鉴定、运动力及生物膜形成能力测定的基础上,分别测定各菌株对人源肠上皮细胞Caco-2、猪源肠上皮细胞IPEC-J2和大鼠源肠上皮细胞IEC-6的黏附能力,通过庆大霉素保护试验测定菌株对肠上皮细胞的侵袭能力,比较黏附量和侵袭量的差异;将5株弯曲菌分别口服攻毒鸡,于攻毒后不同日龄(different days post inoculation,DPI)采集肠道样品测定弯曲菌的菌落数,比较不同弯曲菌在鸡肠道内定殖的差异。【结果】人源弯曲菌运动力显著高于其他4株动物源弯曲菌,而牛源和猪源弯曲菌生物膜形成能力显著高于其他菌株。黏附侵袭测定结果显示,人源弯曲菌对Caco-2细胞的黏附能力显著高于动物源弯曲菌,但侵袭能力显著低于动物源弯曲菌;鸭源和牛源弯曲菌对IPEC-J2细胞的黏附能力显著低于其他菌株,而且鸭源弯曲菌的侵袭能力显著低于其他菌株;不同菌株对IEC-6细胞的黏附能力无显著差异,但鸡源弯曲菌侵袭能力显著低于其他菌株。不同弯曲菌口服攻毒鸡后1、3和6 d动物源弯曲菌定殖水平显著高于人源,在攻毒后10 d和15 d仅牛源弯曲菌显著高于人源,于攻毒后15 d所有菌株达到约8-10 Log10(CFU/g)的稳定定殖水平。【结论】来源于不同宿主的弯曲菌对不同宿主肠上皮细胞均具有黏附侵袭能力,同时可在鸡肠道内稳定定殖,提示弯曲菌在不同动物间传播和适应性定殖的特征,对开展弯�
- 郭家卉崔一芳李鹏祥申学阳曹晓亚马洪海郭芳芳丁保安徐福洲
- 关键词：弯曲菌宿主肠上皮细胞定殖
- Toll样受体3激动剂在疫苗佐剂中的应用进展被引量：1
- 2020年
- 模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)在先天免疫系统中起着至关重要的作用,是重要的宿主传感器,可识别入侵病原体所显示的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP)。PAMP是独立的免疫调节剂,且具有多种生化成分和特殊结构,逐渐被认为是许多现代疫苗的关键成分。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)3激动剂是一种合成的双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),能够以与病毒感染相似的模式激活宿主免疫防御的多种通路。当与抗原适当混合时,TLR3激动剂可以用作PAMP-佐剂,以调节和优化抗原特异性免疫应答。基于此,主要讨论了TLR3及其激动剂的作用机制以及TLR3激动剂在疫苗佐剂中的应用进展,以期为动物疫苗的研究提供新的思路。
- 曹晓亚徐福洲郭杰温彤苏霞周宏专杨兵崔一芳郭芳芳
- 关键词：适应性免疫佐剂先天免疫TOLL样受体3
- 胸膜肺炎放线杆菌血清7型apxⅡC-/apxⅠA+、ureC-/apxⅢ+减毒双突变菌株的构建及特性研究
- 胸膜肺炎放线杆菌(APP)是引起猪传染性胸膜肺炎的呼吸道病原细菌,其中Apx毒素和尿素酶(Urease)均是其主要的毒力因子,且Apx毒素又是其主要的免疫原性蛋白。为构建APP减毒突变菌株,本试验首先利用仅表达ApxⅡ毒...
- 崔国林郭芳芳陈小玲杨兵周宏专苏霞徐福洲
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌APX毒素尿素酶突变
- 胸膜肺炎放线杆菌ureC-/apxⅢ+突变株构建及生物学特性研究
- 胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性胸膜肺炎(APP)的呼吸道病原菌,其中尿素酶是其主要的毒力因子之一.为构建APP尿素酶基因突变弱毒菌株,在ureC基因中缺失一段基因片段,并插入具有免疫原性的apxⅢ基因片段,利用sacB基...
- 崔国林郭芳芳杨兵陈小玲周宏专苏霞徐福洲
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌尿素酶
- 文献传递
- 空肠弯曲菌全菌灭活疫苗免疫鸡效果评价被引量：1
- 2022年
- 目的拟研制一种可降低空肠弯曲菌在鸡肠道内定植的全菌灭活疫苗。方法利用一种新的灭活剂H;O;与CuCl;混合物灭活空肠弯曲菌制备油佐剂灭活疫苗,免疫SPF鸡后测定灭活疫苗诱导产生的特异性抗体水平,通过口服攻毒评价疫苗免疫对空肠弯曲菌在鸡盲肠内定植的影响,同时测定盲肠细胞因子在转录水平的变化,以及对盲肠绒毛长度和隐窝深度的影响。结果制备的全菌灭活疫苗免疫SPF鸡后可诱导产生特异性血清IgG和胆汁IgA,但口服攻毒后不能抑制或降低空肠弯曲菌在盲肠内的定植水平,且对免疫鸡的盲肠绒毛长度和隐窝深度无明显影响。测定的鸡盲肠中多数细胞因子在空肠弯曲菌攻毒前与攻毒后1 d的转录水平差异不明显,而在攻毒后10 d明显上升;同日龄样品比较结果显示,部分细胞因子的表达量在佐剂对照组和全菌免疫组较空白对照组明显上调。结论本试验研制的全菌灭活疫苗虽可诱导产生高水平特异性抗体,但不能降低空肠弯曲菌在鸡盲肠内的定植水平,提示空肠弯曲菌在鸡盲肠内的定植机制需深入探究。
- 魏国昊崔一芳郭芳芳曹晓亚王雪刘彦威徐福洲
- 关键词：空肠弯曲菌定植抗体细胞因子
- 副猪嗜血杆菌血清4型和13型的分子血清分型研究被引量：4
- 2021年
- 为在临床诊断中快速鉴定副猪嗜血杆菌(HPS)血清4型和13型等优势流行血清型,分子血清分型方法较常规的基于特异性抗血清的血清分型方法更加准确和高效。根据HPS血清4型脂多糖合成蛋白基因wcip 4和血清13型糖脂转移蛋白基因gltP序列设计特异性引物,分别建立了简便快速鉴定HPS血清4型和13型的环介导等温扩增方法(LAMP)。特异性检测结果显示,HPS血清4型或13型参考菌株检测为阳性,而其他HPS血清型参考菌株及19种其他细菌检测均为阴性;敏感性检测结果显示,在25μL反应体系中,HPS血清4型和13型基因组DNA检测限分别为1 pg和2.5 pg。对已知血清型的22株HPS临床分离株检测结果显示,13株血清4型和5株血清13型分别检测均为阳性,而其他血清型分离株检测均为阴性。结果表明,建立的LAMP方法可用于HPS血清4型和13型的快速鉴定,有助于HPS优势流行血清型的快速调查及疫苗防控。
- 李忍郭芳芳郭杰崔一芳曹晓亚徐福洲
- 关键词：副猪嗜血杆菌环介导等温扩增特异性敏感性
- 胸膜肺炎放线杆菌在不同培养基中生长、生物膜形成及Apx毒素分泌能力的差异研究被引量：1
- 2022年
- 为比较胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型~12型菌株在不同培养基中的生长、生物膜形成以及Apx毒素分泌能力的差异,选用5种细菌培养基BHI、LB、MHB、PPLO和TSB,首先测定APP不同血清型菌株在5种培养基中的生长曲线,进而测定不同血清型菌株在5种培养基中的生物膜形成能力,同时测定这些菌株对20种抗菌药物的耐药性,最后测定APP血清1型菌株在5种培养基中添加CaCl_(2)对ApxⅠ毒素分泌的影响。结果显示,APP不同血清型菌株在BHI和TSB中生长较好,而在MHB、LB和PPLO生长较差;在不同培养基中培养24 h生物膜形成能力为MHB>BHI>TSB>LB>PPLO,血清3、4、7型和12型参考菌株生物膜形成能力较强;药敏结果显示,APP不同血清型菌株仅对万古霉素耐药;Apx毒素分泌结果显示,ApxⅠ在MHB、LB和PPLO中表达量显著高于BHI和TSB,而且培养基中添加5 mmol/L CaCl_(2)后ApxⅠ分泌量显著增加。研究结果可为分析APP不同血清型菌株在不同培养基中的生物学特性以及疫苗研制提供参考。
- 吕佩帅张丽红丁小松郭芳芳崔一芳曹晓亚徐福洲
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌生物膜形成APX毒素
- 鸡源和猪源乳杆菌胆盐水解酶的表达及酶学性质比较被引量：1
- 2017年
- 【目的】随着抗生素生长促进剂(AGPs)在动物饲料中逐步禁止使用,AGPs替代物的研究成为热点。由于胆盐水解酶(BSH)在脂类代谢中的关键作用,成为AGPs替代物研究的一个重要方向。在原核表达和纯化的基础上鉴定鸡源和猪源乳杆菌BSH在酶学性质方面的差异性。【方法】分别对鸡源胆盐水解酶(BSHc)和猪源胆盐水解酶(BSHp)基因进行原核表达和蛋白纯化,通过测定对6种甘氨结合胆盐和牛磺结合胆盐的水解效率获得两种酶的酶学动力学性质,进而测定了温度、pH和金属离子对酶活力的影响。【结果】BSHc和BSHp对甘氨结合胆盐的水解效率高于牛磺结合胆盐,BSHc对甘氨结合胆盐的水解效率较BSHp稍高;BSHc和BSHp的最适酶解温度分别为45°C和42°C;BSHc和BSHp的最适反应pH分别为6.0和5.4;含有Cu^(2+)、Fe^(3+)、Mn^(2+)和Zn^(2+)的金属盐对BSHc和BSHp的酶活力均具有不同程度的抑制作用,特别是Cu^(2+)和Fe^(3+)抑制作用比较强;含有Na^+、K^+、Mg^(2+)和Ca2+的金属盐对BSHc和BSHp酶活力的抑制作用相对较弱或无抑制作用,但KIO3对BSHc和BSHp酶活力具有强抑制作用,KI和CaCl_2对BSHp酶活力也具有较强的抑制作用。【结论】原核表达和纯化的BSHc和BSHp对甘氨结合胆盐的水解效率高于牛磺结合胆盐,BSHc的最适酶解温度和pH稍高于BSHp,Cu^(2+)、Fe^(3+)、Mn^(2+)和Zn^(2+)等金属离子对BSHc和BSHp酶活力具有明显抑制作用,试验结果为鉴定BSH抑制物进而研制AGPs替代物奠定了基础。
- 郭芳芳王雅蕾李忍吴晓敏黄建国杨兵徐福洲
- 关键词：胆盐水解酶酶活力温度PH金属离子
- 空肠弯曲菌cjaA基因在乳酸乳球菌中分泌性表达及口服免疫研究
- 为降低鸡肠道中空肠弯曲菌的定植水平,本试验将空肠弯曲菌的膜转运蛋白cjaA基因、usp45基因分泌信号肽以及大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)编码基因通过串联的方式插入食品级乳酸乳球菌表达载体,构建分泌性表达系统,将...
- 王传文周宏专郭芳芳陈玉霞杨兵苏霞朱瑞良徐福洲
- 关键词：免疫制剂空肠弯曲菌乳酸乳球菌分泌性表达
- 表达空肠弯曲菌CfrA蛋白重组乳酸乳球菌的构建及其免疫效果被引量：1
- 2016年
- 【目的】本试验将空肠弯曲菌肠菌素受体蛋白CfrA编码基因导入食品级乳酸乳球菌表达系统,然后将重组乳酸乳球菌口服免疫鸡,降低空肠弯曲菌在鸡肠道中的定殖。【方法】利用PCR分别扩增空肠弯曲菌cfrA全基因及其N端片段,插入食品级表达载体pNZ8149多克隆位点并转化乳酸乳球菌NZ3900,通过Western blot鉴定重组菌株CfrA蛋白表达情况,同时通过筛选nisin浓度、温度、时间等诱导条件优化重组蛋白表达水平;进而将重组乳酸乳球菌经口服免疫SPF鸡,免疫后分别测定乳酸乳球菌自鸡体内的排出情况、以及诱导CfrA血清抗体和粘膜抗体水平,最后将空肠弯曲菌口服攻毒免疫后的鸡,通过测定鸡泄殖腔棉拭子中空肠弯曲菌的数目来判定口服免疫效果。【结果】Western blot检测显示CfrA全基因及其N端片段均可在重组乳酸乳球菌胞内可溶性表达,不分泌,筛选的最佳诱导表达条件为nisin浓度25 ng/mL、温度37°C、时间1 h。口服乳酸乳球菌10 d内自鸡体完全排空;鸡口服免疫后可产生CfrA蛋白特异性的血清IgG和肠粘膜sIgA抗体;重组乳酸乳球菌口服免疫后空肠弯曲菌在鸡体内的增殖速度显著低于对照组。【结论】成功构建了重组CfrA蛋白的食品级乳酸乳球菌诱导表达系统;表达CfrA蛋白的重组乳酸乳球菌口服免疫鸡对空肠弯曲菌在鸡肠道的定殖具有一定的抑制作用,为研制重组乳酸菌口服家禽免疫制剂防治空肠弯曲菌奠定了基础。
- 王传文周宏专郭芳芳陈玉霞杨兵苏霞朱瑞良徐福洲
- 关键词：空肠弯曲菌乳酸乳球菌口服免疫
