罗广旭
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：重庆市科委地方病重大专项基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 日本血吸虫重组两歧双歧杆菌疫苗的构建及其表达被引量：4
- 2017年
- 目的构建及鉴定日本血吸虫（Sj）重组两歧双歧杆菌（Bb）疫苗[Bb（pGEX—Sj26GST—Sj14-3-3）]，并研究融合基因Sj26GST—Sj14—3—3在Bb中的表达情况。方法将重组质粒pGEX—Sj26GST—Sj14-3-3电转化至Bb中，构建重组Bb（pGEX—SjZ6GST-Sj14-3—3）疫苗，用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达。采用双酶切和聚合酶链式反应（PCR）鉴定重组Bb（pGEX—Sj26GST-Sj14—3—3）疫苗，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和蛋白免疫印迹法对表达产物进行鉴定。结果双酶切及PCR证实重组质粒pGEX—SjZ6GST—Si14—3—3成功转入Bb中。SDS—PAGE鉴定结果显示，诱导表达产物是相对分子质量约为67×10^3的重组蛋白，与预期结果相符。蛋13免疫印迹法鉴定结果显示，重组蛋白能被Sj感染的兔血清所识别。结论成功构建Sj重组Bb（pGEX—Sj26GST-Sj14-3—3）疫苗，Rb可表达具有特异抗原性的Sj26GST—Sj14—3．3重组蛋白。
- 罗广旭李文桂覃婷
- 关键词：融合基因两歧双歧杆菌疫苗
- 铜绿假单胞菌重组Bb-pGEX-OprI疫苗的构建及其保护力的研究被引量：7
- 2018年
- 目的构建并鉴定含有铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)外膜蛋白I(OprI)基因与两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum,Bb)疫苗(Bb-pGEX-OprI),并研究该疫苗对小鼠Pa感染的保护作用。方法PCR扩增OprI抗原编码基因并将其定向克隆至pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprI,将pGEX-OprI电穿孔转化Bb,构建Bb-pGEX-OprI疫苗,进行双酶切、PCR和测序鉴定后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分别分析并鉴定表达产物。21只小鼠随机分为3组,分别灌胃接种Bb-pGEX-OprI疫苗、空载体疫苗(Bb-pGEX-1λT)和Bb。首次免疫后4周用PA01株攻击。攻击后2周处死小鼠取肺组织,计数肺组织的细菌菌落数。免疫前、首次免疫后4周和PA01株攻击后2周采小鼠静脉血,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE。结果 PCR成功扩增出194bp的OprI抗原编码基因;双酶切、PCR和测序证实OprI基因成功克隆入pGEX-1λT中,并且pGEX-OprI成功转化Bb,构建为Bb-pGEX-OprI疫苗;SDS-PAGE显示Bb-pGEX-OprI表达相对分子质量约32×103的OprI-谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白;Western blot证实融合蛋白能被Pa感染的鼠血清特异性识别。Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠肺组织的细菌菌落数低于Bb-pGEX-1λT组和Bb组(P<0.01),Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清IgG、IgG2b、IgG3和IgE水平在首次免疫后4周和攻击后2周依次升高,相同时间点Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清抗体水平均高于Bb-pGEX-1λT和Bb组(P<0.01或P<0.05)。结论成功构建了重组疫苗Bb-pGEX-OprI,其在小鼠抗Pa感染过程中可产生有效的体液免疫应答。
- 刘潇李文桂罗广旭
- 关键词：铜绿假单胞菌两歧双歧杆菌疫苗免疫
- 铜绿假单胞菌外膜蛋白OprⅠ原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2018年
- 目的:构建并鉴定铜绿假单胞菌(Pa)外膜蛋白OprⅠ重组质粒p GEX-OprⅠ,研究该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。方法:PCR扩增OprⅠ抗原编码基因并将其定向克隆至原核表达载体p GEX-1λT,构建重组质粒p GEX-OprⅠ;将p GEX-OprⅠ电穿孔转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western印迹分析并鉴定表达产物。结果:扩增出194 bp的OprⅠ抗原编码基因;双酶切和PCR鉴定证实OprⅠ基因克隆入p GEX-1λT,并且p GEX-OprⅠ成功转入大肠杆菌BL21(DE3);SDS-PAGE显示重组大肠杆菌BL21(p GEX-OprⅠ)的表达产物为相对分子质量约32 000的GST-OprⅠ融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的20%;Western印迹证实该融合蛋白能被Pa感染的鼠血清特异性识别。结论:构建了重组质粒p GEX-OprⅠ,其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达具有抗原性的融合蛋白。
- 刘潇李文桂罗广旭
- 关键词：铜绿假单胞菌原核表达
- 血吸虫抱雌沟蛋白疫苗研究现状
- 2016年
- 血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患病,在世界范围内广泛分布。采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域。血吸虫是一种罕见的雌雄异体生物,性别特异性基因为我们寻找新的候选疫苗分子提供线索。抱雌沟蛋白是由性别特异性基因编码的,由雄虫分泌并于合抱时传递给雌虫。本文拟就抱雌沟蛋白的特性、蛋白疫苗、DNA疫苗和表位疫苗等方面研究现状进行综述。
- 罗广旭李文桂
- 关键词：血吸虫疫苗
