吕莎
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：昆明医科大学更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 环状RNA参与肺癌发生的调控机制研究
- 肺癌是最为常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康，曾经对于肺癌的发病研究多停留在遗传易感基因上.随着人们对非编码RNA的认识不断加深，近年研究发现一类新型的非编码RNA——环状RNA可在多种疾病中发挥作用，因此，我们为了探...
- 杨柳吕莎王翼寅李源苏晓三
- 关键词：肺癌发生分子机制
- 睡美人转座子介导AEG1基因修饰的树突状细胞可治疗小鼠肝癌被引量：1
- 2016年
- 目的 :探讨睡美人(Sleeping Bbeauty,SB)转座子系统转染树突状细胞(dendritic cells,DCs)的效率,以及星形胶质细胞上调基因1(astrocyte elevated gene 1,AEG 1)重组转座子系统转染DCs对小鼠肝癌的抑制作用。方法 :从p EGFP-N1质粒中获取巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)启动子和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fl uorescent protein,EGFP)基因,从小鼠肝癌细胞H22中克隆AEG1基因,将上述基因分别插入质粒p T/HB后获得重组转座子载体p T-CMV-EGFP和p T-CMV-AEG1。将重组转座子载体分别与转座酶p CMV-SB11按一定比例混合后获得双质粒转座子系统p T-CMV-EGFP/SB11和p T-CMV-AEG1/SB11。将p T-CMVEGFP/SB11转染DCs,荧光显微镜和FCM法观察EGFP表达率;将p T-CMV-AEG1/SB11转染DCs后,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测AEG1 m RNA和蛋白的表达。用p T-CMV-AEG1/SB11转染后的DCs治疗肝癌H22细胞荷瘤小鼠,观察小鼠体内肿瘤体积的变化,并采用乳酸脱氢酶释放法检测治疗19 d后小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性。结果 :经质粒酶切和基因测序证实,重组转座子载体p T-CMV-EGFP和pT-CMV-AEG1均构建成功。pT-CMV-EGFP/SB11转染DCs后24和48 h,细胞内EGFP的表达率分别为46.5%和27.8%,均明显高于空载体p TCMV/SB11转染组(P值均<0.001)。p T-CMV-AEG1/SB11转染DCs后24 h,细胞内AEG1 m RNA和蛋白表达水平均高于空载体p T-CMV/SB11转染组(P值均<0.001)。用p T-CMV-AEG1/SB11转染的DCs治疗H22荷瘤小鼠后,小鼠体内肿瘤生长被明显抑制(P<0.01),小鼠脾细胞对肝癌H22细胞的杀伤活性明显增强(P<0.01)。结论:SB转座子系统可高效转染DCs。p T-CMV-AEG1/SB11转染的DCs可通过诱导特异性细胞免疫,抑制H22细胞荷瘤小鼠的肿瘤生长。
- 杨柳王翼寅陈睿吕莎尹燕锋李源张蕾苏晓三
- 关键词：树突细胞
- 建立转座子用于原代树突状细胞转染体系的研究被引量：1
- 2016年
- 应用PCR技术从p EGFP-N1载体扩增获取CMV启动子和EGFP基因,利用限制性内切酶BglⅡ/NotⅠ以及NotⅠ/Eco RⅠ将其插入p T/HB,构成p T-CMV-EGFP重组转座子,p T-CMV-EGFP与SB11转座酶形成"睡美人"转座系统.采用脂质体与荧光表达载体p EGFP-N1不同配比转染小鼠成纤维细胞系3T3,p TCMV-EGFP与SB11梯度比例转染小鼠肝癌细胞系H22后,经流式细胞术比较阳性细胞率,当条件为脂质体与总DNA质量比为4∶1;转座酶与转座子间质量比为1∶4转染时,细胞阳性率最高(H22悬浮细胞可达42.23%),转染结果较稳定(SD=1.25).通过此优化体系转染小鼠骨髓来源的树突状细胞DCs,经激光共聚焦显微镜显示,能够获得被EGFP修饰的DCs,并通过流式细胞术检测被标记有EGFP的特异DCs阳性率可达20%以上.表明本研究已成功建立了一个可用于原代DCs转染的方法.
- 杨柳管峥吕莎尹燕锋苏晓三
- 关键词：转座子树突细胞转染脂质体
