王萃 作品数:10 被引量:34 H指数:4 供职机构: 浙江中医药大学生命科学学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 浙江省医药卫生科学研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 环境科学与工程 更多>>
隐丹参酮调控PKM2抑制内皮细胞血管新生的研究 被引量:5 2018年 目的:研究隐丹参酮是否通过调控PKM2表达而抑制内皮细胞血管新生。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用紫草素抑制PKM2的表达,DASA-58激活PKM2,并用隐丹参酮进行干预,MTT法检测不同浓度隐丹参酮对HUVECs增殖的影响;细胞划痕实验及管腔形成实验观测HUVECs迁移及管腔形成能力,qPCR和Western blot分别检测HIF-1α、VEGF、PKM2 mRNA和蛋白表达,并用免疫荧光观察PKM在细胞内分布。结果:隐丹参酮对HUVECs具有呈浓度依赖性的抑制作用,DASA-58激活PKM2后,VEGF、HIF-1α mRNA和蛋白质表达上调,细胞迁移能力与成血管能力增加经隐丹参酮干预后,VEGF、HIF-1α、PKM2 mRNA和蛋白表达显著降低,细胞迁移能力与成血管能力降低。结论:PKM2高表达能促进新血管生成,隐丹参酮可能通过调控PKM2发挥抗血管新生的作用。 陆张璐 丁嘉丽 祝骥 王萃 杨贞 卢德赵关键词:隐丹参酮 血管新生 动脉粥样硬化 阿魏酸对大气细颗粒物PM2.5诱导的小鼠主动脉炎症的干预作用 被引量:7 2018年 目的探讨大气细颗粒物PM2.5对小鼠主动脉Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)信号通路的影响及阿魏酸的干预作用。方法采用气管滴注方法以10,20 mg·kg^(-1)的PM2.5处理小鼠,并用40,80 mg·kg^(-1)的阿魏酸对部分20 mg·kg^(-1)PM2.5处理后的小鼠进行治疗。2周后处死小鼠,血液细胞分析仪检测小鼠血液中炎症细胞水平,ELISA检测血清中IL-1β和IL-6的含量,并用荧光定量PCR检测主动脉中IL-1β和IL-6的m RNA水平,Western blot检测各组小鼠主动脉组织中TLR2、TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白的表达,免疫组化技术观察TLR2和TLR4在小鼠主动脉中的水平。结果PM2.5能提高血液中NEUT、EOS的数量及其在总细胞中的比率,增加血液和主动脉组织中炎症因子IL-1β、IL-6的含量,上调主动脉组织中的TLRs通路相关分子TLR2、TLR4、My D88、NF-κB p65的表达;而用阿魏酸干预后,血液中白细胞数量、EOS数量、NEUT与EOS的比率明显降低,IL-1β、IL-6水平下降。同时主动脉组织中的TLRs通路相关分子的表达下调。结论PM2.5可能通过TLRs通路诱导小鼠主动脉炎症的产生,而阿魏酸可能通过抑制TLRs通路相关因子的表达而发挥抑制PM2.5诱导的小鼠主动脉炎症的作用。 胡潇 任广岩 唐利华 郝正亮 宗磊 祝骥 王萃 卢德赵关键词:阿魏酸 TOLL样受体 PM2.5 炎症 外源硫化氢通过清除4-HNE抑制肝细胞死亡的分子机制研究 2018年 目的通过体外细胞实验,研究外源硫化氢(H2S)以4-羟基壬烯酸(4-HNE)为作用靶点抑制肝细胞死亡的作用及分子机制。方法以人的肝癌细胞系HepG2为细胞模型,通过MTT法、LDH活性检测外源H2S对4-HNE诱导肝细胞死亡的抑制作用,利用酶联免疫吸附法检测肝细胞内H2S水平,利用WesternBlot技术检测肝细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平。结果外源NariS(H2S前体)能升高肝细胞内H2S水平。外源NaHS(H2S前体)能够显著抑制4-HNE诱导的肝细胞死亡。升高肝细胞内H2S水平可以显著降低细胞内4-HNE与蛋白质形成的加合物水平。结论补充外源性H2S能增加肝细胞内H2S水平,清除细胞内4-HNE蛋白质加合物,从而抑制4-HNE诱导的肝细胞死亡,为以4-HNE为靶点的治疗酒精性肝病的新型药物研发提供重要的理论指导和依据。 马旺 丁滨 丁秦超 王萃 任宣奇 窦晓兵关键词:酒精性肝病 CLIC1通过干扰线粒体动力学平衡促进内皮细胞损伤的研究 2018年 该文通过研究H2O2诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中氯离子通道蛋白1(chloride intracellular channel 1, CLIC1)对线粒体动力学平衡的影响,探讨CLIC1在内皮细胞损伤中的作用及机制。体外培养HUVEC细胞,分别用CLIC1抑制剂IAA94(40μmol/L)、H2O2(0.9 mmol/L)、IAA94(40μmol/L)和H2O2(0.9 mmol/L)联合处理,荧光法检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)的含量; JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位的变化;定量PCR技术检测CLIC1、线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1, Drp1)以及线粒体融合蛋白1(mitofusin 1, Mfn1)的mRNA表达;免疫印迹技术检测CLIC1、Drp1蛋白的水平。结果显示:与正常组相比, H2O2处理的内皮细胞中ROS、MDA含量增加(P<0.05), CLIC1表达量上调(P<0.05),三磷酸腺苷(ATP)含量减少(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.001),线粒体融合蛋白Mfn1表达显著降低(P<0.05),线粒体分裂蛋白Drp1表达显著升高(P<0.05);而IAA94预处理2 h后,内皮细胞中ROS、MDA含量减少(P<0.05),线粒体融合蛋白Mfn1表达显著增加(P<0.05),线粒体分裂蛋白Drp1表达显著降低(P<0.05),线粒体膜电位升高(P<0.001)。以上结果表明, CLIC1在H2O2诱导的内皮细胞线粒体损伤中发挥重要作用,其机制可能与CLIC1干扰线粒体动力学平衡有关。 任广岩 祝骥 王萃 卢德赵关键词:内皮细胞损伤 绞股蓝总皂苷调控CLIC1抑制巨噬细胞脂质累积的作用研究 被引量:5 2017年 [目的]研究绞股蓝总皂苷(gypenosides,GPs)对RAW264.7细胞脂质累积及细胞内氯离子通道蛋白1(chloride intracellular channel 1,CLIC1)表达的影响,探讨GPs抗动脉粥样硬化的分子机制。[方法]将RAW264.7细胞接种于六孔板中,分为NC组、氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)组、GPs 10组、GPs 50组、GPs 100组及CLIC1 si RNA组。各组细胞处理24h后,油红O染色检测各组细胞内脂质的累积,化学法检测细胞内总胆固醇(total cholesterol,TC)及游离胆固醇(free cholesterol,FC)的含量,荧光定量PCR和免疫印迹法检测CLIC1、CD36m RNA和蛋白质的表达,免疫荧光技术观察CLIC1的细胞定位,并用MQAE法检测细胞内氯离子浓度的变化。[结果]与NC组相比,ox-LDL组CLIC1、CD36 m RNA(P<0.01,P<0.001)及蛋白(P<0.01,P<0.001)表达水平显著升高,细胞内TC(P<0.001)、FC(P<0.01)显著升高,细胞膜上CLIC1表达显著升高,细胞内氯离子浓度显著增加(P<0.01);经CLIC1 si RNA或GPs处理后,细胞内TC(P<0.001,P<0.001)、FC(P<0.01,P<0.01)含量降低,脂质累积减少,CLIC1、CD36 m RNA及蛋白表达水平显著下调(P<0.01,P<0.001)。[结论]CLIC1在巨噬细胞脂质累积中发挥着重要的作用,GPs可以通过调控CLIC1的表达抑制巨噬细胞脂质累积。 宗磊 任广岩 胡潇 郝正亮 王萃 祝骥 杨贞 卢德赵关键词:巨噬细胞 总胆固醇 游离胆固醇 CD36 环境浓度水平的苯并[b]荧蒽对巨噬细胞RAW264.7的作用 被引量:2 2017年 为了研究环境浓度下多环芳烃苯并[b]荧蒽对巨噬细胞RAW264.7的损伤情况,我们用MTT法检测苯并[b]荧蒽对RAW264.7细胞增殖活力的影响,用试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)及炎症因子的释放量、细胞内SOD酶活力、脂质过氧化产物MDA含量及活性氧自由基ROS水平,用FITC标记的大肠杆菌(E.coli)检测苯并[b]荧蒽对巨噬细胞吞噬能力的影响.结果显示环境浓度(10~80 nmol·L^(-1))下的苯并[b]荧蒽能够抑制RAW264.7细胞的增殖活力,增加乳酸脱氢酶LDH的释放量.诱导活性氧自由基的形成,提高超氧化物歧化酶(SOD)活力及脂质过氧化产物MDA的含量.增加炎症因子IL-6,IL^(-1)β和TNF-a的分泌,降低吞噬能力.该研究结果表明,苯并[b]荧蒽对巨噬细胞RAW264.7具有一定的毒性作用;能够引起RAW264.7细胞产生氧化应激;激活炎症反应;降低巨噬细胞的吞噬能力. 杨金焕 宗磊 贡晨雪 卢德赵 许颖龄 胡潇 王萃关键词:巨噬细胞 细胞损伤 细胞毒性 天名精根提取物调控TLRs信号抑制RAW264.7细胞炎症的研究 被引量:4 2019年 [目的]阐明天名精根提取物对RAW264.7细胞炎症反应的影响及其机制。[方法]采集野生天名精全株,处理得天名精根粉末,制备天名精根乙醇和石油醚提取物,并以高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测其中主要成分;采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、灭活的金黄色葡萄球菌(heat-inactivated preparations of Staphylococcus aureus pathogens,SAC)刺激RAW264.7细胞,构建体外炎症模型。以MTT法检测细胞增殖,qPCR检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Toll样受体-2(Toll-like receptor-2,TLR-2)、TLR-4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response 88,MyD88)、核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)m RNA表达,Western blot检测NF-κB p65蛋白表达。[结果]与正常对照组比较,LPS或SAC刺激后RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达增加(P<0.01),NF-κB蛋白与mRNA表达增加(P<0.01);LPS刺激后TLR-4、MyD88 m RNA表达增加(P<0.01,P<0.05),SAC刺激后TLR-2、MyD88 m RNA表达增加(P<0.01)。天名精根提取物干预后,与LPS组或SAC组比较,RAW264.7细胞IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达减低(P<0.01),同时NF-κB m RNA和NF-κB p65蛋白表达也减低(P<0.01);TLR-4和MyD88 m RNA表达明显低于LPS组(P<0.01,P<0.05),TLR-2和MyD88 mRNA表达表达明显低于SAC组(P<0.01,P<0.05)。[结论]天名精根提取物可以抑制由LPS和灭活的金黄色葡萄球菌引起的RAW264.7细胞炎症反应,其机制可能与抑制TLRs-NF-κB信号通路有关。 乐翊飞 汪俊成 唐利华 吴尹洁 徐扬 王萃 卢德赵关键词:天名精 RAW264.7 炎症 大气细颗粒物PM2.5对肺癌血管新生的影响 被引量:4 2016年 [目的]研究大气细颗粒物2.5(particulate matter2.5,PM2.5)对肺癌血管新生的影响。[方法]采集杭州大气PM2.5全颗粒物,对肺癌细胞A549进行染毒,CCK-8法观察PM2.5对肺癌A549细胞增殖的影响,选择50、100、150μg·m L^(-1)浓度的PM2.5染毒A549细胞24h,实时荧光定量PCR和Western blot检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metal proteinase-9,MMP-9)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的m RNA和蛋白的表达。并建立人肺癌鸡胚移植瘤模型,用50、100、150μg·m L^(-1)的PM2.5染毒液处理肺癌移植瘤,测定PM2.5对血管数目和血管面积比值的影响。[结果]大于等于50μg·m 的PM2.5染毒后能促进A549细胞的增殖作用。与对照组比,PM2.5染毒A549细胞24h后VEGF、MMP-9与HIF-1α的m RNA和蛋白表达增加,并具有一定的量效关系。PM2.5染毒后肺癌鸡胚移植瘤模型新生血管数目和面积比高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。[结论]PM2.5暴露能诱导肺癌中VEGF、MMP-9和HIF-1α基因的过表达,促进肺癌的血管新生,进而促使肺癌的发展。 吴鸿章 方来 麻庆乐 杨金焕 王萃 祝骥 卢德赵 李卓玉关键词:PM2.5 肺癌 血管新生 鸡胚绒毛尿囊膜 体外实验 漆黄素对泡沫细胞蛋白质组的影响 2017年 目的应用双向电泳和质谱技术研究漆黄素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞蛋白质组的影响,分析漆黄素抑制泡沫细胞形成的分子机制。方法采用MTT法检测ox-LDL对RAW264.7细胞及漆黄素对泡沫细胞活力的影响,化学法检测细胞内胆固醇酯(CE)的量,筛选合适的ox-LDL和漆黄素处理浓度。油红O染色法检测漆黄素对泡沫细胞内脂质累积情况的影响,并用双向电泳法建立漆黄素处理前后细胞蛋白质组图谱,质谱法鉴定差异表达的蛋白质;Western blotting法验证细胞色素b5(Cyt b5)的表达情况。结果 20μg/m L ox-LDL可以成功诱导泡沫细胞,100μg/m L漆黄素干预后,泡沫细胞内CE明显下降,脂质累积减少。蛋白质组学结果表明,漆黄素处理泡沫细胞后,Cyt b5、谷胱甘肽S-转移酶、NADH脱氢酶(泛醌)黄素蛋白2、Prelamin A/C、葡萄糖调节蛋白78、热休克蛋白60、Supervillin、胆固醇酰基转移酶表达量增加,而钙网蛋白、转录延伸因子B、蛋白核受体表达量下降。结论漆黄素可能通过增强细胞抗氧化及抗炎能力,减弱细胞应激反应、降低细胞内胆固醇堆积、调节细胞凋亡及提高免疫能力等途径起到抗动脉粥样硬化的作用。 许颖龄 胡潇 方来 祝骥 王萃 杨贞 卢德赵关键词:漆黄素 泡沫细胞 动脉粥样硬化 蛋白质组 胆固醇酯 氧化应激 黄连素调控GRP78诱导结肠癌细胞凋亡的研究 被引量:7 2016年 目的:考察黄连素是否通过调节GRP78表达而促进SW480细胞凋亡。方法:MTT法检测不同浓度黄连素对结肠癌细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡、Western blot法检测细胞GRP78、Bcl-2、Bax、GRP94的表达。结果:与对照组比较,不同浓度黄连素可呈浓度依赖性抑制SW480和HT-29细胞的增殖,其对SW480细胞的作用较强。黄连素可促进SW480细胞凋亡,抑制其GRP78表达,使Bax表达上调,Bcl-2表达下调。Bi X激活GRP78表达后,受黄连素作用的SW480细胞凋亡率降低,Bax表达下调,Bcl-2表达上调,但不同处理组GRP94表达均无显著变化。结论:黄连素可通过下调GRP78的表达来促进SW480细胞凋亡。 贡晨雪 宗磊 杨金焕 王萃 李卓玉 卢德赵关键词:黄连素 GRP78 SW480 凋亡