赵晴
- 作品数：5 被引量：1H指数：1
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- LSD1在急性肾损伤肾纤维化中的保护作用及机制
- 2018年
- 目的探讨组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)在急性肾损伤(AKI)大鼠肾纤维化中的保护作用,并探讨机制。方法取30只SD大鼠,随机分为对照组、AKI 1d组、AKI 1周组、AKI 2周组、AKI 4周组、AKI 8周组;对照组切除左侧肾脏,右肾不做处理;AKI 1 d组、AKI 1周组、AKI 2周组、AKI 4周组、AKI 8周组切除左侧肾脏后,夹闭右侧肾蒂40 min,分别于1 d、1周、2周、4周、8周后心脏采血并处死大鼠留取肾组织。将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为对照组、AKI组、AKI+空质粒组、AKI+LSD1过表达组,对照组正常培养HK-2细胞;AKI组HK-2细胞缺氧培养12 h后正常培养1 h;AKI+空质粒组HK-2细胞转染空白质粒后缺氧培养12 h后正常培养1 h;AKI+LSD1过表达组HK-2细胞转染LSD1质粒后缺氧培养12 h正常培养1 h。应用免疫印迹技术检测肾组织及HK-2细胞中LSD1、H3K4me1、H3K4me2、TGF-β1及纤维化指标的表达,观察AKI后肾纤维化发生发展过程中LSD1表达、组蛋白甲基化情况及其变化对纤维化的影响;应用染色体免疫共沉淀(Ch IP)技术探索LSD1对肾脏纤维化影响的机制。结果动物实验中,与对照组相比,AKI 1、2、4、8周组纤维化指标均升高(P均<0.05),TGF-β1、LSD1及H3K4甲基化标志物H3K4me1、H3K4me2表达均增多(P均<0.05),而AKI 1 d组较对照组差异无统计学意义(P>0.05);细胞实验中,与AKI组、AKI+空质粒组相比,AKI+LSD1过表达组纤维化指标水平下降,TGF-β1、H3K4me1及H3K4me2表达均下降(P均<0.05);细胞实验中,与对照组相比,AKI组及AKI+空质粒组TGF-β1启动子上H3K4me1及H3K4me2表达增加(P均<0.05);与AKI组及AKI+空质粒组相比,AKI+LSD1过表达组TGF-β1启动子上H3K4me1及H3K4me2表达下降(P<0.05)。结论 LSD1通过引起H3K4me1及H3K4me2去甲基化使TGF-β1表达下降,从而在AKI后肾纤维化中起保护作用。
- 赵晴刘晓宇刘航杨海燕徐岩
- 关键词：急性肾损伤表观遗传修饰组蛋白类甲基化
- 7，8-二羟基黄酮对缺氧诱导下肾小管上皮细胞内质网应激的抑制作用被引量：1
- 2016年
- 目的观察7，8-二羟基黄酮（7，8-DHF）对缺氧诱导的人近端肾小管上皮细胞内质网应激（ERS）损伤的影响，并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞（HK-2），采用缺氧培养箱建立细胞缺氧损伤模型，排除含血清培养基对缺氧的影响后，实验分为5组，分别为缺氧0h、4h、8h、12h、16h组。实时荧光定量PCR（RT-PCR）法筛选缺氧诱导ERS的最佳缺氧时间。用不同浓度（50、100、150、200、250wm01／L）7，8．DHF处理HK-2细胞，采用细胞增殖与活性实验筛选7,8-DHF的安全浓度。用7,8-DHF预处理HK-2细胞缺氧模型，按以下处理因素分组：对照组、缺氧＋DMSO组、缺氧＋7，8-DHF组（包括100μmol／L组和150μmol／L组），通过检测细胞增殖与活性筛选最佳给药浓度。后将细胞随机分为缺氧组、缺氧＋7，8-DHF组（100μmol／L），Western印迹法检测细胞蛋白激酶（Akt）、磷酸化蛋白激酶（p-Akt）、富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）、ERS相关促凋亡蛋白CCAAT增强子结合蛋白（CHOP）的表达。用重组Cyr61慢病毒载体构建稳定表达Cyr61蛋白的Cyr61-HK-2细胞株进行缺氧实验，按如下处理因素分组：缺氧＋空质粒转染组，缺氧＋Cyr61过表达组，膜连蛋白V和碘化丙啶（AnnexinV．FITC／PI）染色后，采用流式细胞仪检测细胞凋亡，Western印迹法检测Cyr61和CHOP蛋白的表达情况。结果（1）与对照组细胞相比，RT-PCR实验结果显示12h为诱导ERS的最佳缺氧时间（P〈0．01）。（2）与对照组相比，细胞增殖与活性实验结果显示100μmol／L的7，8-DHF组为最佳给药浓度（P〈0．01）。（3）与缺氧＋DMSO组相比，缺氧＋7，8-DHF细胞p-Akt、Cyr61表达量均明显增加，CHOP表达量明显降低（均P〈0．05）；LY294002处理可抑制p-Akt的表达，减少Cyr61及增加CHOP的表达（均P〈0．05）。（4）与缺氧＋空质粒转染组相比，过表达C
- 马蕊岳少妲赵晴徐岩
- 关键词：内质网应激富含半胱氨酸蛋白61蛋白激酶类
- LSD1在急性肾损伤后肾纤维化中的作用
- 目的:探讨LSD1(组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1)在急性肾损伤(AKI)后肾纤维化发生发展过程中的保护作用。方法:30只SD大鼠随机分为:对照组、AKI 1d组、AKI 1周组、AKI 2周组、AKI 4周组、AKI ...
- 赵晴
- 关键词：急性肾损伤纤维化组蛋白类甲基化
- 组蛋白甲基转移酶MLL1促进肾小管上皮细胞转分化
- 2018年
- 目的检测组蛋白甲基转移酶MLLl在单侧输尿管梗阻（UUO）所导致的肾间质纤维化过程中的表达，探讨其在肾小管上皮细胞间质转分化（EMT）中的作用。方法将42只雄性SD大鼠随机分为正常组，假手术组，UUO术后1d、1周、2周、3周和4周组，利用实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测大鼠肾组织MLL1、Ⅲ型胶原纤维（Col3α1）的表达及EMT的情况。利用siRNA-MLL1质粒抑制HK-2细胞中MLL1基因的表达后，以TGF-β1进行诱导处理，Western印迹法检测细胞中MLL1、EMT相关指标、Col3α1及组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）的蛋白水平；同时利用染色质免疫共沉淀（CHIP）对EMT相关基因启动子区域H3K4me3水平进行检测。结果（1）与正常和假手术组相比，UUO术后大鼠的肾功能随着梗阻时间的增加不断丧失（P〈0．05）。（2）与正常和假手术组相比，UUO术后1周和2周时大鼠肾组织肾间质纤维化最为显著（均P〈0．05），MLL1及EMT相关指标的表达量也最高（均P〈0．05）。（3）与对照组相比，3ng／ml的TGF-β1作用细胞后MLL1的表达量最高（P〈0．05），而在此浓度下HK-2细胞发生EMT也最为显著（P〈0．05）。（4）将MLL1敲除后，3ng／mlTGF—B1所诱导的HK-2细胞EMT被显著抑制（P〈0．05），d．SMA和Vimentin启动子区域的H3K4me3水平也显著下降（P〈0．05）。结论MLL1能够促进TGF-β1所诱导的HK-2细胞EMT的发生，其机制可能是使d．SMA和Vimentin启动子区的组蛋白H3第4位赖氨酸发生三甲基化（H3K4me3）。
- 刘晓宇李宸羽刘航赵晴徐岩
- 关键词：甲基化纤维化上皮间质转分化
- 论禁止强迫自证其罪原则及其在我国的适用
- 禁止强迫自证其罪原则，是指在刑事诉讼中，禁止以任何方法逼迫被追诉人提出可能造成自我归罪的言词证据，该原则经过几百年的发展，最终被许多国家和国际文件所承认和吸收，已然成为国际普遍认可的一项人权原则。它不仅有利于遏制刑讯逼供...
- 赵晴
- 关键词：人权保障法律适用
