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pEGFP-NTCP稳定转染HEK293细胞系的建立及鉴定被引量：2: 2016年; 目的高效快速地建立稳定高表达钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的HEK293细胞系。方法构建可表达EGFP-NTCP融合蛋白的p EGFP-NTCP重组质粒,并利用Fu GENE 6转染试剂将重组质粒转染至HEK293细胞中。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,挑选转染细胞进行14 d G418筛选和单克隆培养,以获得稳定转染细胞株。用RT-PCR法、qRT-PCR法和Western blot技术检测稳定转染细胞及正常细胞中NTCP mRNA和蛋白的表达情况,并进一步用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)考察稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力。结果使用本文优化的方法,细胞转染率可达90%。RT-PCR、qRT-PCR、Western blot和牛磺酸摄取实验结果显示:相对于正常组,在荧光显微镜下呈绿色荧光的转染细胞;其NTCP表达均显阳性(P<0.01);且稳定转染细胞的牛磺胆酸摄取能力明显升高(P<0.05)。结论高效快速地建立了稳定高表达NTCP的HEK293细胞系,为胆酸衍生物摄取机制研究奠定了基础。; 陈雅李静张文政罗敏傅晓钟刘亭; 关键词：NTCP EGFP 稳定转染牛磺胆酸 HEK293细胞

阿德福韦单L-硫代氨基酸酯，单胆酸酯衍生物的设计、合成与生物活性研究: 目的针对阿德福韦酯存在剂量依赖性肾毒性、生物利用度低等缺点,依据前药设计理念,结合肠肝循环特性,采用生物电子等排、结构骈合原理,以阿德福韦为先导化合物,设计合成阿德福韦单L-硫代氨基酸酯,单胆酸酯衍生物,拟提高药物在肝细...; 张文政; 关键词：阿德福韦肝靶向性体外稳定性; 文献传递

阿德福韦单硫代L-氨基酸酯单胆酸酯衍生物及其制备方法: 本发明公开了具有下列化学结构的化合物及其药学上可接受的盐、盐结晶水合物、盐结晶溶剂合物，<Image file="DDA0001019827060000011.GIF" he="399" imgContent="draw...; 傅晓钟王永林苏航兰燕宇李勇军王爱民黄勇陈雅罗敏张文政; 文献传递

阿德福韦单硫代L‑氨基酸酯单胆酸酯衍生物及其制备方法: 本发明公开了具有下列化学结构的化合物及其药学上可接受的盐、盐结晶水合物、盐结晶溶剂合物，<Image file="DDA0001019827060000011.GIF" he="399" imgContent="draw...; 傅晓钟王永林苏航兰燕宇李勇军王爱民黄勇陈雅罗敏张文政

人寡肽转运体1转染MDCK细胞与转染HeLa细胞的比较研究被引量：1: 2017年; 目的筛选出更适宜的转染受体细胞,提高构建人寡肽转运体1(human peptide transporter 1,hPepT1)高表达细胞系的效率。方法利用Lipofectamine^(TM) 2000转染试剂将pcDNA3.1(+)-hPepT1质粒分别转染进MDCK细胞与HeLa细胞,并进行单克隆细胞的挑选和扩大培养。通过qRT-PCR与Western blot技术来检测两种受体细胞中hPepT1 mRNA与蛋白的表达水平,并利用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)对两种单克隆转染细胞的hPepT1典型底物甘氨酰肌氨酸(Glysar)摄取能力进行考察。结果 MDCK细胞与HeLa细胞转染后,hPepT1 mRNA与蛋白表达水平以及Glysar的摄取能力均明显高于其野生型细胞(P<0.05);虽然Glysar在HeLa细胞中的摄取量高于MDCK细胞,但MDCK-hPepT1细胞中hPepT1 mRNA与蛋白表达水平以及Glysar的摄取能力却高于HeLa-hPepT1细胞。结论在hPepT1稳定高表达转染细胞模型的构建中,为提高hPepT1的转染效率,从而获得更高效的转染细胞模型,以MDCK细胞作为转染的受体细胞可能是更为适宜的选择。; 罗敏傅晓钟肖涛张文政李静陈雅刘亭; 关键词：子宫颈癌细胞稳定转染 BLOT

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张文政