郭日红
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：南京农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种可长期储存的高效饲料化甘蔗稍及其制备方法和应用
- 本发明公开一种可长期储存的饲料化甘蔗稍及其制备方法和应用，其制备方法包括以下步骤：(1)收集；(2)水分调节；(3)揉搓粉碎：用揉搓粉碎机揉搓成丝状或片状，顶稍部分长度控制在6cm以内；(4)拉伸膜裹包青贮：将揉搓粉碎后...
- 王子玉王若丞王锋郭日红施彬彬陈慕陶于晓青孟春花袁凤丹袁志祥
- 文献传递
- RS-1提高CRISPR-Cas9系统介导的人乳铁蛋白基因敲入效率被引量：10
- 2017年
- 尝试利用CRISPR-Cas9系统敲除山羊基因组中β-乳球蛋白(BLG)基因,以实现在BLG基因座敲入人乳铁蛋白(h LF)基因,并进一步探讨了不同浓度RAD51蛋白激活剂(RS-1)对同源重组效率的影响。首先针对山羊BLG的第一外显子设计并构建了sg RNA和Cas9共表达载体p Cas9-sg BLG,将该载体转染至山羊耳成纤维细胞,利用PCR和T7EN1法验证了其基因组编辑活性;然后进一步构建了BLG基因打靶载体p BHA-h LF-NIE(包含NEO/EGFP);将该打靶载体与p Cas9-sg BLG载体共转染至山羊耳成纤维细胞,分别用0、5、10和20μmol/L RS-1处理细胞,分析了绿色荧光蛋白的表达效率;同时用800μg/m L G418对不同浓度RS-1处理后的细胞进行筛选,挑取EGFP阳性细胞克隆,进一步通过PCR和测序鉴定h LF定点敲入的阳性细胞克隆。结果显示:设计的sg RNA编辑山羊BLG位点的效率为25%-31%;报告基因的表达效率提示RS-1可以促进基因敲入效率的提高,其效率与RS-1浓度呈正相关,20μmol/L RS-1处理组的效率是对照组的3.5倍;利用G418筛选h LF敲入阳性细胞克隆后,当RS-1浓度为0-10μmol/L时,h LF敲入效率随着RS-1浓度增加而升高,在10μmol/L时阳性克隆率最高为32.61%,然而在20μmol/L时敲入阳性克隆率下降至22.22%,且衰老细胞克隆增多。以上结果表明,利用CRISPR-Cas9系统可以实现在山羊耳成纤维细胞中敲除BLG基因和敲入h LF基因,且适宜浓度的RS-1可以显著提升基因敲入效率,本试验为高效利用CRISPR-Cas9系统获得基因敲入的细胞提供了参考依据。
- 周文君郭日红邓明田王锋张艳丽
- 关键词：Β-乳球蛋白同源重组人乳铁蛋白
- Cas9技术介导兔和山羊MSTN与CLPG1基因编辑的研究
- 中国是山羊和兔养殖大国，具有丰富的地方品种资源，但是普遍存在着生长速度缓慢和产肉能力低下等缺陷，选育专门化的肉用山羊和兔品种、提高养殖经济效益势在必行。然而，传统的选育方法遗传进展缓慢，费时费力，随着功能主效基因的挖掘和...
- 郭日红
- 关键词：山羊MSTN基因
- 一种可长期储存的高效饲料化甘蔗稍及其制备方法和应用
- 本发明公开一种可长期储存的饲料化甘蔗稍及其制备方法和应用，其制备方法包括以下步骤：(1)收集；(2)水分调节；(3)揉搓粉碎：用揉搓粉碎机揉搓成丝状或片状，顶稍部分长度控制在6cm以内；(4)拉伸膜裹包青贮：将揉搓粉碎后...
- 王子玉王若丞王锋郭日红施彬彬陈慕陶于晓青孟春花袁凤丹袁志祥
- 克隆山羊脑组织异常的羟甲基化胞嘧啶和基因印记
- 引言/目的羟甲基化胞嘧啶(5-hmC)是DNA去甲基化的中间产物,同时也是一种稳定的表观遗传修饰。5-hmC与基因表达、老化、神经元发育和胚胎发育有关。克隆动物中异常的DNA甲基化已被广泛研究,而克隆动物中特定位点以及全...
- 邓明田刘孜斐张国敏郭日红万永杰王锋
