赵书平
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：西北农林科技大学农学院更多>>
- 发文基金：陕西省科学技术研究发展计划项目国家科技重大专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 小麦RNA解旋酶基因TaDEAD1-B的原核表达、纯化及解旋酶功能验证
- 2018年
- RNA解旋酶(RNA helicase)参与多种逆境胁迫应答,是重要的抗逆候选基因。本研究成功从小白麦(Triticum aestivum)中克隆了一个参与干旱、高温胁迫响应的DEAD-boxRNA解旋酶基因TaDEAD1-B的CDS全长序列并对其在逆境胁迫的表达模式进行了分析。进而将TaDEAD1-B基因的编码区构建到原核表达载体pColdTMTF,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)菌株后,对其最优原核表达条件(异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导浓度、培养温度和时间进行了分析。采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对重组蛋白pColdTMTF-TaDEAD1-B的可溶性进行了研究,进而利用磁珠法对重组蛋白进行了分离纯化;最后利用甲醛变性凝胶(Formaldehy dedenaturedgel)电泳法验证了TaDEAD1-B的解旋酶功能。结果表明,TaDEAD1-B的cDNA(GenBank登录号:MG888432)含有68bp的5'UTR,1905bp的基因编码区和79bp的3'UTR,编码634个氨基酸;理论分子量为67.06kD,理论等电点pI7.69。干旱胁迫和高温胁迫下的表达分析表明TaDEAD1-B的表达量分别在胁迫后6h和4h达到最高峰值,组织特异性表达分析表明TaDEAD1-B在生殖器官小穗中优势表达。重组蛋白pColdTMTF-TaDEAD1-B的最佳诱导表达条件为IPTG(1.0mmol/L),16℃,150r/min诱导16h,且重组蛋白是可溶的。甲醛变性凝胶电泳证明TaDEAD1-B蛋白具有ATP依赖型RNA解旋酶活性。逆境胁迫和组织表达模式分析以及其解旋酶功能验证为研究TaDEAD1-B在小麦中的生物学功能提供了理论参考。
- 刘子辉李嵩冯燕茹周琪张向展赵书平柴守诚郑炜君
- 关键词：小麦原核表达
- 植物蛋白激酶介导的非生物胁迫和激素信号转导途径的研究进展被引量：6
- 2017年
- 干旱、盐渍、低温和高温等非生物胁迫严重影响植物的生长发育和作物的产量。在长期的进化过程中,植物逐渐形成了对外部刺激快速感知和主动适应的能力,其中植物体内逆境信号的传递在植物快速感知外部刺激和主动适应非生物胁迫过程中起着非常重要的作用。蛋白激酶和蛋白磷酸酶催化的蛋白质磷酸化和去磷酸化是植物体内存在的最普遍且最重要的信号转导调节方式。其中,蛋白激酶的主要作用是将ATP或GTP上的γ磷酸基团转移到特定的底物蛋白上,使蛋白磷酸化,被磷酸化的蛋白发挥相应的生理功能。近年来,利用生物技术和基因工程等手段从细胞、分子水平上研究有关蛋白激酶的抗逆机理,通过基因沉默、基因过表达等策略提高植物的抗逆性成为国内外抗逆分子生物学与分子育种学研究的热点。本文主要对植物蛋白激酶在介导非生物胁迫和激素信号通路中的作用进行综述,为进一步研究植物蛋白激酶功能提供有价值的信息。
- 赵书平谈宏斌鹿丹裴丽丽崔喜艳马有志陈明徐兆师张小红
- 关键词：蛋白激酶非生物胁迫激素蛋白磷酸化信号传递
