吴根土
- 作品数：14 被引量：39H指数：4
- 供职机构：西南大学植物保护学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学化学工程更多>>
- 核糖体失活蛋白(α-MC)亚细胞定位及对TMV的抑制作用被引量：4
- 2017年
- 【目的】克隆获得苦瓜α-MC、商陆PAP,在烟草中异源表达观察两个蛋白在细胞中的定位情况。研究α-MC对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的抑制作用及其引起的抗性防御反应。【方法】根据已报道的商陆抗病毒蛋白PAP基因全序列和苦瓜素基因全序列,设计并合成扩增PAP和α-MC基因全长引物,通过RT-PCR及基因克隆方法,从苦瓜和商陆春叶克隆得到苦瓜α-MC、商陆PAP;用Wolf PSORT预测蛋白定位,将苦瓜α-MC、商陆PAP分别融合在GFP和Ds Red2的N端,构建融合蛋白表达载体,采用GFP和Ds Red2标记进行亚细胞定位,验证预测结果;通过农杆菌介导在本氏烟中瞬时表达α-MC,再接种烟草花叶病毒,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分别检测病毒在接种叶片的蛋白积累量和RNA表达量,分析瞬时表达α-MC的抗病毒效果。利用q RT-PCR分析植物防卫相关基因NPR1、PR1、PR2的表达,探究其抗病毒机理。【结果】克隆得到基因α-MC和PAP全长,分别为861和939 bp。Wolf PSORT预测显示α-MC和PAP主要定位于细胞质膜上。共聚焦荧光显微镜下观察发现,分别用GFP和Ds Red2标记的α-MC和PAP均定位在本氏烟叶片表皮细胞质膜上,与Wolf PSORT预测的α-MC和PAP定位结果相一致。异源表达的PAP对植物细胞毒性作用强,导致表达部位细胞坏死,异源表达α-MC的植物细胞无明显毒性,表达部位细胞完整。在本氏烟中异源表达α-MC后,再接种TMV-GFP,在紫外灯下观察发现α-MC处理后的本氏烟在接种TMV-GFP 48 h后没有出现绿色荧光,而对照组出现荧光。72 h后处理组出现零星荧光,但对照组的绿色荧光开始扩散,连续观察,处理组几乎没有变化,接种TMV-GFP 6 d后,发现处理组的绿色荧光几乎没有扩大的趋势,而对照组的绿色荧光已扩散至心叶;ELISA检测表明,在接种TMV-GFP 6 d后的叶片中,对照组与健康植物的OD492比值几乎已达到处理组的10
- 魏周玲彭浩然潘琪张永至蒲运丹吴根土青玲孙现超
- 关键词：核糖体失活蛋白烟草花叶病毒异源表达亚细胞定位
- 甘蔗花叶病毒四川分离物的鉴定和遗传变异分析被引量：2
- 2023年
- 玉米和甘蔗是西南地区两种重要的禾本科农作物,而病毒病的常年发生严重威胁着玉米和甘蔗的生产.从四川攀枝花田间采集表现花叶、褪绿、斑驳或矮化等病毒病症状的玉米样品54份和甘蔗样品42份,用小RNA深度测序结合反转录聚合酶链式反应进行病毒检测,以明确引起该地区玉米和甘蔗病毒病的病原.结果显示:从玉米病株上检测到甘蔗花叶病毒(sugarcane mosaic virus,SCMV)、玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)和留尼旺玉米线条病毒(maize streak Reunion virus,MSRV),3种病毒的检出率分别为66.7%,59.3%和3.7%;从甘蔗病样中检测到SCMV(52.4%)、甘蔗瓜德罗普杆状病毒A(sugarcane bacilliform Guadeloupe A virus,SCBGAV)(76.2%)和高粱花叶病毒(sorghum mosaic virus,SrMV)(28.6%).鉴于SCMV在玉米和甘蔗田间样品中的高检出率,利用其外壳蛋白基因对SCMV四川分离物的遗传变异进行综合分析.系统发育分析表明:120个SCMV中国分离物被分为5组,且其进化分组表现出宿主和地理起源的相关性,来源于玉米的SCMV四川分离物主要被聚入C组,而来源于甘蔗的SCMV四川分离物被聚入E组.核苷酸多样性分析表明:来源于玉米和甘蔗的SCMV四川分离物群体间变异度较高.FST测试表明:四川和云南两地SCMV群体间存在频繁基因流,且群体统计分析结果显示SCMV四川和云南分离物群体存在潜在的扩张趋势.该研究是对四川玉米和甘蔗上病毒病原的综合鉴定,也是对SCMV四川分离物遗传变异情况的首次报道,为SCMV病毒病的防控提供了重要参考依据.
- 李明骏钟源廖豪杰吴根土青玲
- 关键词：甘蔗花叶病毒玉米甘蔗病毒检测
- 番茄抗性相关基因SlHin1的克隆、表达与抗病毒功能被引量：5
- 2017年
- 【目的】克隆番茄抗性相关基因Sl Hin1(harpin-induced gene 1),分析其生物信息学特征、组织表达和亚细胞定位情况,研究其在抗烟草花叶病毒侵染、移动中的作用,为番茄抗性育种提供理论依据。【方法】通过RT-PCR及基因克隆方法,从番茄总RNA中克隆得到基因SlHin1;应用生物信息学方法分析其DNA序列及其编码的蛋白序列特性,使用MEGA6.0对SlHIN1氨基酸序列及其同源序列进行多序列比对,并构建同源物种间系统进化树;将该基因片段通过Sal Ⅰ和Bam HI双酶切连接至荧光表达载体pCV-m GFP-C1,采用GFP标记的方法进行亚细胞定位检测,分析编码蛋白表达位置;利用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)分析该基因在番茄不同组织的表达量水平;将该基因片段通过Nco Ⅰ和Bam HI通过双酶切连接至植物表达载体pFGC5941,用土壤农杆菌EHA105瞬时过表达该基因并接种标记有绿色荧光的烟草花叶病毒侵染性克隆,以检测植株对病毒的抗性变化,间接ELISA法检测病毒的含量,探究该基因的抗病毒功能。Western blot验证SlHIN1蛋白在本氏烟内的表达情况。【结果】利用RT-PCR方法从番茄材料(Solanum lycopersicon cv.Ailsa Craig)的叶片组织中克隆得到全长为675 bp的番茄抗性相关基因Sl Hin1,将序列分别提交至Gen Bank,得到序列号KU195820。序列比对及生物信息学分析表明,其基因预测编码225个氨基酸,分子量为26.1 k D,理论等电点为9.35,结构上具有LEA-14保守结构域,不具有跨膜区段,并且位于番茄基因组10号染色体上(Solyc10g081980);多序列比对及进化树分析表明,该基因编码的蛋白与茄科植物HIN1氨基酸同源性80.0%以上而与水稻、高粱单子叶植物的亲缘关系较远;亚细胞定位显示定位在细胞膜上与PSORT Prediction预测的亚细胞定位最高概率一致;qRT-PCR结果分析表明该基因具有组织特异性,表达量在根、叶、茎间依次降低;在本氏烟中瞬时过表达Sl
- 彭浩然潘琪魏周玲蒲运丹张永至吴根土青玲孙现超
- 关键词：番茄烟草花叶病毒抗病毒
- 异源表达核糖体失活蛋白(α-MC)亚细胞定位及对TMV抑制作用的初步研究
- 核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一类在植物中广泛存在的毒蛋白,通过对核糖体大亚基RNA的3'端茎环结构中一个高度保守的核苷酸区域的作用,破坏核糖体大亚基RNA...
- 魏周玲刘燕许博文匡传富吴根土青玲陈德鑫孙现超
- 关键词：核糖体失活蛋白植物病毒异源表达亚细胞定位
- 甜橙和柚中CTV强弱毒株系p20的遗传变异被引量：1
- 2017年
- 【目的】对7个柑橘衰退病毒(CTV)株系进行遗传变异研究,明确寄主甜橙和柚中CTV强弱毒株系p20的变异水平。【方法】运用RT-PCR、克隆及测序等技术建立CTV p20种群,并借助MEGA6构建单倍型系统发育树,运用软件DNAStar对两种寄主中CTV强弱毒种群的遗传结构、变异水平进行分析,运用DnaSP软件对各种群进行单倍型多样性、核苷酸多样性分析和中性检验分析。【结果】构建了7个CTV p20种群,由162条序列构成,包含11个单倍型,单个种群有1个或更多单倍型出现。序列分析发现,来自不同种群的单倍型对应的原始核苷酸序列一致性为88.2%—100.0%,对应的氨基酸序列的一致性为92.3%—100.0%,最低的氨基酸序列一致性发生在CT23-1和CT9-2之间;其中单倍型PeraIAC-4、CT22和CT9-1共有50条序列,对应的原始核苷酸序列一致性为100.0%,属优势单倍型,与标准株系T36亲缘关系较近;单倍型多样性最丰富的是甜橙种群PeraIAC,单倍型多样性为0.800,而单倍型多样性最低的是柚种群CT22,单倍型多样性为0.170;相比柚种群的单倍型多样性(0.170—0.552)和核苷酸多样性(0.00032—0.05919),甜橙种群具有更为丰富的单倍型多样性(0.513—0.800)和核苷酸多样性(0.04208—0.05677)。系统发育树分析表明,来自甜橙的分离株种群结构复杂,甜橙种群中检测到的单倍型与标准株系T30、T36、VT和T3均有相关性;与标准株系T3相距很近的CT31-2与优势单倍型在系统发育树上距离最远,对应的原始核苷酸序列一致性仅为88.3%。中性检验结果表明,CTV甜橙种群趋于平衡或收缩状态,而CTV柚种群除CT23外则趋于扩张状态;其中TR-514Y、CT31和CT23种群的Tajima’s D值、Fu和Li’s D*值以及Fu和Li’s F*值均为正值且达到显著水平,而CT9种群的Tajima’s D值、Fu和Li’s D*值以及Fu和Li’s F*值均为负值且达到显著水平。运用DnaSP软件对各种群进行重组分析表明,在各种群中�
- 王亚飞阮涛周彦王雪峰吴根土孙现超周常勇青玲
- 关键词：柑橘衰退病毒种群
- 番茄SYTA的克隆及表达分析被引量：7
- 2017年
- 【目的】克隆获得番茄 SYTA (Solanum lycopersicum SYTA，S.l SYTA),分析其基因序列生物信息学特征和预测蛋白的结构特征,明确S.l SYTA亚细胞定位和组织表达,并分析其在绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)标记的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)侵染下的表达变化及其对TMV移动的影响,为明确S.l SYTA在植物病毒侵染致病过程中的作用提供理论依据。【方法】根据番茄基因组含有的SYTA同源基因序列,利用Primer Premier 5.0软件设计克隆引物,采用RT-PCR技术克隆S.l SYTA全长序列;应用生物信息学方法分析该基因的序列特征;使用MEGA 7.0对S.l SYTA蛋白序列及其同源序列进行多序列比对,并构建同源物种间系统进化树;通过与GFP蛋白融合进行亚细胞定位;利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测番茄各部位S.l SYTA的表达量以及在TMV胁迫的番茄中S.l SYTA的表达变化;构建植物瞬时表达载体p CV-SYTA-m GFP,通过农杆菌介导在本氏烟草中瞬时表达,TMV-GFP攻毒,利用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测在本氏烟中瞬时表达S.l SYTA时TMV-GFP的积累和移动情况。【结果】克隆得到1 620 bp的S.l SYTA基因开放阅读框全长,序列比对及生物信息学分析表明,其编码的氨基酸序列具有SYTs家族的典型特征,含有N端的跨膜区、胞间连接区和C端的两个C2结构域;多序列对比及系统进化树分析发现,与茄科林生烟草、绒毛状烟草等植物亲缘关系较近,与黄瓜较远;亚细胞定位显示S.l SYTA定位于细胞质膜。在番茄的根、茎和叶中S.l SYTA的表达量从高到低依次为根>叶>茎;TMV-GFP侵染番茄导致其S.l SYTA表达量在接种后第1天显著上调,在第7天降至正常水平。在S.l SYTA瞬时表达的本氏烟叶片部位接种TMV-GFP,TMV-GFP在接种第5天时已经到达新叶,而接种部位仅表达空载体对照的本氏烟新叶中未观察到TMV-GFP,且接种第5天时TMV-GFP在接种叶和新叶中的积累量�
- 潘琪刘旭旭彭浩然蒲运丹张永至叶思涵吴根土青玲孙现超
- 关键词：番茄克隆
- 新形势下农业植物病理学课程教学改革探讨被引量：3
- 2020年
- 农业植物病理学是一门理论性和实践性很强的植物保护专业核心课程。长期以来,广大教师们一直在探索着如何提高教学质量,如何更好地培养学生的专业素质和实践操作能力。为提高该课程的教学质量并满足新形势下农业教育的要求,针对西南大学农业植物病理学课程的教学状况,剖析了教学过程中存在的问题,并提出了相应的教学改革措施与方法,包括更新教学内容、推荐参考文献、建设教学团队、优化教学方法与手段,丰富实践内容和完善考核体系等,以期提高农业植物病理学课程的教学质量,培养满足现代农业需求的人才。
- 吴根土窦彦霞杨水英李明骏刘翠平毕朝位青玲
- 关键词：农业植物病理学农业教育教学目标教学改革
- 异源表达几种核糖体失活蛋白及对TMV的抑制作用研究
- 植物病毒病使主要的经济作物受到严重的危害,仅次于真菌病害,广泛存在于世界范围内。近年的研究表明,将核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating proteins,RIPs)基因转化植物,转基因植物会具有抗植...
- 魏周玲蒲运丹薛杨叶思涵张永至吴根土青玲孙现超
- 关键词：植物病毒异源表达TMV
- 文献传递
- 本氏烟抗性相关基因NbHIN1的克隆、表达与抗烟草花叶病毒功能分析
- HIN1（Harpin-induced gene 1）基因是受Harpins蛋白和丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）所诱导过程中表达的一种抗性基因,它与拟南芥抗性基因NDR（Nonrace-spec...
- 彭浩然蒲运丹薛杨吴根土李明俊青玲孙现超
- 玉米褪绿斑驳病毒侵染与玉米糖代谢的互作调控
- 植物中的糖类物质既是植物代谢途径中的基本碳源,也作为能量物质和信号分子在植物种子萌发、开花及应对环境胁迫等多个生理过程中发挥重要功能。植物病毒侵染会导致植物初级代谢的重编程,但植物病毒与寄主植物的互作调控机制尚不清晰。玉...
- 钟源罗玲吴根土青玲李明骏
- 关键词：玉米糖代谢RNA-SEQ
