陈文江
- 作品数：9 被引量：7H指数：2
- 供职机构：哈尔滨医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省研究生创新科研项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于蛋白质三聚化模序的高分泌性三聚体蛋白的表达方法
- 本发明公开了一种高分泌性三聚体蛋白的表达方法。该表达方法包括：(1)将tPA信号肽基因序列、目的蛋白基因和蛋白质三聚化模序基因序列连接在一起；其中，目的蛋白的N末端与tPA信号肽相连，其C末端与蛋白质三聚化模序蛋白N末端...
- 凌虹王甲业李妍陈文江杨丹程德春
- 文献传递
- 重组沙门菌载体HIV-12F5表位疫苗毒力及分布
- 2008年
- 目的研究表达Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）2F5表位的重组沙门菌（SA-2F5）对BALB／c小鼠的半数致死量（LD50），并观察其在小鼠体内的生物学分布。方法BALB／c小鼠随机分8组，以0，10^4～10^10菌落形成单位（CFU）重组菌灌胃，30d后用改良寇氏法测定LD50;BALB／c小鼠随机分2组，灌胃给予10^7 CFU重组沙门菌或磷酸盐缓冲液（PBS），分别于感染后第3，9，16，30d，无菌操作取各组肝、脾、肠系膜淋巴结，检测重组沙门菌在小鼠体内的分布。结果SA-2F5对BALB／c小鼠的LD，0为1．45×10^9CFU；感染后第3d，肝、脾、肠系膜淋巴结活菌数依次为5．38×10^4，4．87×10^4，9．08×10^3CFU。第9d各脏器活菌数分别降至7．35×10^2，7．50×10^2及3．00×10^2CFU。第16d各脏器活菌数基本与第9d相当。之后各脏器中活菌数持续下降，至第30d肝、脾内检测不到活菌，肠系膜淋巴结内活菌为2．1×10^2CFU。结论重组沙门菌SA-2F5毒力显著降低，在小鼠体内具有良好的生物学分布。
- 李庆海陈文江刘树林凌虹
- 关键词：包膜表位半数致死量(LD50)
- 高分泌性三聚体蛋白的表达方法
- 本发明公开了一种高分泌性三聚体蛋白的表达方法。该表达方法包括：(1)将tPA信号肽基因序列、目的蛋白基因和蛋白质三聚化模序基因序列连接在一起；其中，目的蛋白的N末端与tPA信号肽相连，其C末端与蛋白质三聚化模序蛋白N末端...
- 凌虹王甲业陈文江李妍杨丹程德春
- 外源性组织型纤溶酶原激活物信号肽突变体增强蛋白质在哺乳细胞中的表达及分泌被引量：3
- 2010年
- 目的 比较不同tPA信号肽突变体对目的蛋白表达和分泌水平的影响,优化并筛选通用性外源信号肽序列.方法 通过定点突变技术将人类组织型纤溶酶原激活物（tPA）的信号肽第22位氨基酸由脯氨酸（P）突变为丙氨酸（tPA22P/A）或甘氨酸（tPA22P/G）,并将突变前后的3种信号肽序列分别插入HIV-1 p24基因的N末端,构建不同的p24蛋白表达载体,这些重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞,转染72 h后,通过SDS-PAGE与western blot检测并比较各组培养上清和细胞中p24蛋白的表达水平.结果 成功构建了3个p24蛋白的真核表达载体P24T.tPA、P24T.tPA22P/A和P24T.tPA22P/G,经序列测定证实基因序列和方向与预期相符;重组载体转染293T细胞72 h后均检测到分泌性p24的表达.与P24T.tPA组相比,P24T.tPA22P/A转染组培养上清中和细胞内p24蛋白表达水平分别提高62%和29%,P24T.tPA22P/G转染组分别提高8%和6%.结论 tPA信号肽22位由脯氨酸突变为丙氨酸或甘氨酸,这就提高了目的蛋白的表达和分泌水平,为优化外源蛋白在哺乳细胞中的表达和分泌提供了实验基础.
- 王甲业陈文江李妍魏国超程德春凌虹
- 关键词：组织型纤溶酶原激活物信号肽哺乳细胞
- 高分泌性三聚体蛋白的表达方法
- 本发明公开了一种高分泌性三聚体蛋白的表达方法。该表达方法包括：(1)将tPA信号肽基因序列、目的蛋白基因和蛋白质三聚化模序基因序列连接在一起；其中，目的蛋白的N末端与tPA信号肽相连，其C末端与蛋白质三聚化模序蛋白N末端...
- 凌虹王甲业陈文江李妍杨丹程德春
- 文献传递
- 原代HIV-1包膜糖蛋白修饰体诱导小鼠产生高滴度gp120抗体被引量：4
- 2011年
- 目的探索1型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）包膜糖蛋白修饰对包膜免疫原性的的影响。方法通过PCR扩增获得原代HIV-106044株包膜gp120基因及其突变体gp120／W427S基因，并构建gp120三聚体蛋白真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S，重组表达载体体外瞬时转染人胚肾HEK293T细胞，表达gp120三聚体蛋白。采取DNA初免-蛋白凝胶加强的策略免疫BALB／c小鼠，末次免疫后10d检测免疫血清中结合抗体的水平。结果获得真核表达载体pcT—gp120和pcT—gp120／W427S及gp120三聚体蛋白；末次免疫后10d，gp120免疫血清中结合抗体滴度大于1：1000，gp120／W427S免疫血清中结合抗体滴度大于1：10000，而且，gp120／W427S免疫组血清抗体结合活性显著高于gp120免疫组血清。结论HIV-1包膜第427位色氨酸突变为丝氨酸，改善了包膜的免疫原性，为包膜免疫原的设计和优化提供了新的线索。
- 凌虹王甲业王开利李妍陈文江杨丹田丹焦娜周海舟
- 关键词：GP120BALB/C小鼠
- HIV-1包膜糖蛋白gp120单体/三聚体在哺乳细胞中表达
- 目的：有效模拟HIV-1包膜糖蛋白天然构象，在哺乳细胞中高效表达三聚体包膜糖蛋白。
方法：本研究以黑龙江省原代HIV-1分离株06044包膜为研究对象，通过PCR的方法扩增不含信号肽序列的包膜gpl20基因，并将其...
- 陈文江
- 关键词：I型人类免疫缺陷病毒三聚体哺乳细胞
- 基于蛋白质三聚化模序的高分泌性三聚体蛋白的表达方法
- 本发明公开了一种高分泌性三聚体蛋白的表达方法。该表达方法包括：(1)将tPA信号肽基因序列、目的蛋白基因和蛋白质三聚化模序基因序列连接在一起；其中，目的蛋白的N末端与tPA信号肽相连，其C末端与蛋白质三聚化模序蛋白N末端...
- 凌虹王甲业李妍陈文江杨丹程德春
- Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜gp120与乙型肝炎病毒表面抗原免疫原性比较被引量：1
- 2016年
- 目的 比较Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）及乙型肝炎病毒（HBV）包膜蛋白初次免疫及加强免疫后诱导产生抗体的规律,为提高HIV-1包膜蛋白诱导保护性抗体产生能力提供创新思路.方法 以10周龄雌性C57BL/6小鼠为动物模型,分别用HIV-1 06044毒株gp120三聚体（gp120T）、HBV表面抗原（HBsAg）蛋白与AddaVax佐剂免疫小鼠,背部皮下注射,共免疫3次,每次免疫间隔3周,第一、第二次免疫后7d和第三次免疫后3d、7d取血;第一次免疫后7d、第三次免疫后3d、7d取脾组织.用酶联免疫吸附实验（ELISA）及酶联免疫斑点实验（ELISpot）方法检测免疫小鼠血浆特异性结合抗体滴度及抗体分泌细胞（ASC）数量.结果 gp120T和HBsAg两种蛋白初次免疫后,动物均未产生明显的特异性抗体.两种蛋白加强免疫后特异性抗体水平明显升高,gp120T一次加强免疫及两次加强特异性抗体滴度逐渐升高,而HBsAg一次加强抗体滴度已经接近两次加强的水平.二次加强免疫后,gp120T和HBsAg免疫鼠脾脏特异性ASC数量差异不显著.结论 HIV-1包膜gp120T加强免疫诱导抗体水平达到高峰慢于HBsAg加强免疫,即加强免疫后gp120T诱导的回忆反应慢于HBsAg.
- 王明霞王甲业李妍陈文江田丹袁丽庄敏凌虹
- 关键词：GP120乙型肝炎病毒表面抗原
