王宏伟
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人野生型MBL基因在大肠杆菌中的表达
- 2002年
- 为获得人MBL蛋白,并对其功能进行初步研究,用DNA重组法构建了组氨酸标签融合原核表达质粒pET 28(b)-MBL。将重组质粒转入大肠杆菌BI21(DE3),经IPTG在37℃条件下诱导培养,利用SDS-PAGE、Westem-blot检测目的蛋白的表达,用IMAC金属螯合层析柱对其进行纯化。成功地表达了重组MBL蛋白,纯化的MBL浓度约为844μg/mL,为制备MBL的基因工程抗体奠定了基础。
- 李雷王宏伟左大明戴景兴陈政良
- 关键词：野生型MBL基因大肠杆菌融合蛋白DNA重组基因表达
- Balb/c小鼠甘露聚糖结合凝集素-C基因的克隆与鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的获得小鼠甘露聚糖结合凝集素-C(MBL-C)基因的全长编码区cDNA。方法利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠的肝细胞中分离出MBL-C基因cDNA片段,将其克隆入pUC-T载体并测序,对基因结构及其与人MBL基因的同源性进行比较分析。结果扩增得到的Balb/c小鼠MBL-C基因cDNA全长735 bp,编码245个氨基酸残基,包含了完整的编码区基因序列。经核苷酸序列比较分析发现,扩增得到的Balb/c小鼠MBL-C基因与Genbank中发表的序列具有100%的同源性,与人的MBL基因的同源性为71.4%。结论成功地克隆到完整的Balb/c小鼠MBL-C编码区基因,为进一步在整体水平研究MBL分子的天然免疫功能提供了必要的条件。
- 王宏伟陈政良左大明卢晓余新沛
- 关键词：RT-PCRCDNA克隆小鼠
- CGT52TGT和GGA57GAA甘露聚糖结合凝集素突变体的构建被引量：8
- 2003年
- 目的 构建CCT52TGT和GGA57GAA 2种甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因突变体。方法 设计2对引物52F/52R和57F/57R(R中引入了点突变),以含汉族人野生型MBL cDNA的重组质粒pGEM-mbl为模板,采用TaKaRa MutanBEST突变试剂盒进行定点突变,以PCR和测序分析进行鉴定。结果 分别用52F/52R和57F/57R为引物对进行PCR,均得到1个约3800 bp的DNA片段,自身连接后获得重组质粒。以SP6/T7P为引物对进行PCR,获得约900 bp的扩增产物。序列分析表明,2种克隆分别除其第52、57位密码变为TGT、GAA外,其余与野生型MBL cDNA完全相同。结论 构建成功CGT52TGT和GGA57GAA MBL基因突变体,为深入探索MBL基因突变引起调理吞噬缺损的机理和MBL分子的结构-功能关系提供了分子模型。
- 张丽芸陈政良王宏伟
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素定点突变
- CGT52TGT和GGA57GAA MBL突变体的构建
- 甘露聚糖结合凝集素(man-binding lectin,MBL)是C型凝集素超家族中胶凝素家族成员,可识别多种病原体的糖结构,并通过激活补体、调理吞噬而发挥抗感染免疫效应,被誉为“天然免疫系统中的关键分子”。已发现MB...
- 张丽芸陈政良王宏伟
- 关键词：甘露聚糖结合凝集素定点突变
- 文献传递
- 小鼠MBL-A基因的克隆和序列分析被引量：3
- 2003年
- 目的 克隆小鼠甘露聚糖结合凝集素 A(MBL A)基因的全长编码区cDNA。方法 利用RT PCR方法 ,从Balb c小鼠的肝细胞中 ,分离出MBL A基因cDNA片段 ,克隆入pUC T载体 ,测序并进行分析。结果 扩增得到的小鼠MBL A基因cDNA全长 72 0bp ,编码 2 4 0个氨基酸残基 ,包含了完整的富含半胱氨酸区、胶原区、颈区和糖识别域。分析表明 ,与Genbank中发表的序列具有 99.9%的同源性。结论 获得小鼠MBL A基因的克隆 ,为进一步研究MBL
- 王宏伟陈政良左大明张丽芸
- 关键词：小鼠克隆RT-PCR氨基酸
