张越
- 作品数：13 被引量：65H指数：4
- 供职机构：同济大学附属第十人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 慢病毒介导的shRNA靶向干扰nestin鼻咽癌稳定细胞株的建立被引量：4
- 2011年
- 目的检测nestin基因在8种鼻咽癌细胞中的表达差异,寻找高表达的细胞株。构建nestin基因的shRNA表达载体,建立nestin稳定干扰的鼻咽癌细胞株。方法应用Real-time PCR和免疫荧光技术检测nestin在鼻咽癌细胞株中的表达水平。构建带GFP的重组靶向nestin shRNA慢病毒表达质粒,筛选阳性克隆,测序鉴定。293T细胞包装病毒,收集病毒上清,测定滴度。经Real-time PCR内源筛靶,选择最佳靶点。将重组慢病毒感染5-8F细胞,Western blotting和Real-time PCR检测nestin的表达。结果在8种鼻咽癌细胞株中,5-8F细胞中nestin表达较高。PCR和测序验证重组质粒构建成功。慢病毒感染5-8F细胞后,与阴性对照组和空白组相比,nestin的mRNA和蛋白水平明显受到抑制。结论成功构建了干扰nestin的慢病毒重组质粒,并建立了稳定靶向干扰nestin表达的5-8F鼻咽癌细胞株。
- 李川马纪张越安靓
- 关键词：NESTIN鼻咽癌细胞慢病毒
- miR-122过表达转基因小鼠质粒构建及其功能验证被引量：1
- 2011年
- 目的:比较两种miR-122转基因小鼠过表达载体构建方法,为建立miR-122过表达转基因小鼠奠定基础。方法:PCR扩增长约291bp的pre-miR-122的序列,分别定向克隆到pBROAD3-GFP载体GFP基因上游内含子或下游3′UTR区域,两种质粒分别转染293T细胞,Q-PCR检测miR-122和GFP的表达水平,并观察GFP绿色荧光。miR-122 sensor reporter是将3个miR-122成熟序列的反义序列串联克隆至psiCHECK2载体luciferase 3′UTR中,然后分别与2种miR-122过表达质粒载体共转染293T细胞,最后检测荧光素酶活性来鉴定miR-122调控功能。结果:2种构建方法的miR-122表达水平都明显增高,而只有插入到GFP基因3′UTR的质粒表达GFP功能正常。结论:构建microRNA过表达载体时,microRNA位于报告基因3′UTR区域不会影响microRNA和报告基因的功能;构建的两种miR-122过表达质粒载体都可应用到转基因小鼠研究中,而将miR-122插入到GFP下游的方法则更利于miR-122的表达。
- 马纪孙奋勇张越洪岸
- 关键词：MIR-122过表达SENSORREPORTER转基因小鼠
- microRNA-136对人鼻咽癌细胞5-8f的抑制作用研究被引量：2
- 2012年
- CpG岛的高甲基化是肿瘤中作为抑癌基因microRNA失活的重要表观遗传机制之一。利用UCSC预测hsa-miR-24、hsa-miR-126、hsa-miR-132、以及hsa-miR-136定位于CpG岛内部或附近,采用甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR处理鼻咽癌细胞5-8f,经RT-PCR与MSP检测,结果表明hsa-miR-136在5-8f中存在高甲基化,5-Aza-CdR能逆转hsa-miR-136甲基化,恢复hsa-miR-136的表达。外源过表达hsa-miR-136能明显抑制鼻咽癌细胞5-8f的增殖;同时流式细胞技术检测显示,hsa-miR-136能诱导5-8f细胞发生晚期凋亡,迁移实验也显示hsa-miR-136能明显抑制5-8f细胞的迁移。综上所述,hsa-miR-136可作为治疗鼻咽癌潜在的靶标。
- 陈景亮张越肖伟凡申健谢秋玲
- 关键词：鼻咽癌增殖迁移凋亡
- 糖化血红蛋白及糖化白蛋白在妊娠期糖尿病诊断中的价值被引量：28
- 2014年
- 目的：评估糖化血红蛋白（HbA1 c ）和血清糖化白蛋白（GA）在妊娠期糖尿病（GDM）患者早期监测中的作用。方法根据美国糖尿病协会（ADA）建议，以口服75 g葡萄糖耐量试验（OGTT）测定值作为诊断GDM的标准，将98例妊娠妇女（孕期22～24周）分为正常妊娠组50例、GDM组48例，同时测定2组的HbA1 c和GA，并进行统计学分析及受试者工作特征（ROC ）曲线分析。结果 GDM组的HbA1 c和GA明显高于正常妊娠组（P＜0．01）。当HbA1c的Cut-off值为5．15％时，ROC 曲线下面积为0．954＆#177;0．020，敏感性为87．5％，特异性为92．0％。当GA的Cut-off值12．50％时，ROC曲线下面积为0．910＆#177;0．029，敏感性为81．3％，特异性为84．0％。HbA1c和GA联合诊断GDM的敏感性为70．8％、特异性为98．0％。结论当HbA1c ＞5．15％和GA＞12．50％时，诊断GDM的敏感度和特异性较高。HbA1 c和GA联合检测对GDM有重要价值。
- 程晨张越何奖图肖伟凡高艳李静潘秋辉
- 关键词：糖化血红蛋白糖化白蛋白妊娠期糖尿病
- 铁死亡相关lncRNA结肠癌预后风险模型的构建及临床应用
- 2022年
- 目的 基于肿瘤基因图谱计划(TCGA)数据库筛选铁死亡相关长链非编码RNA(lncRNA),建立结肠癌预后风险模型,并探讨其临床应用价值。方法 选取行结肠癌根治术的患者48例,收集术中切除的癌组织及对应的癌旁组织(距离癌组织边缘2~3 cm)。从TCGA数据库中收集结肠癌的转录组数据(结肠癌组织428例、正常结肠组织41例)及对应患者的临床资料。筛选结肠癌组织与正常结肠组织差异表达的铁死亡相关基因,并进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组数据库(KEGG)通路分析。筛选与结肠癌预后相关的铁死亡lncRNA,采用共识聚类分析对结肠癌患者进行分组,并比较总体生存率。采用LASSO-Cox回归分析建立预后风险模型。建立用于预测结肠癌患者总体生存率的列线图。采用细胞学实验分析关键lncRNAITGB1-DT在结肠癌中的生物学功能。结果 从TCGA数据库中筛选出72个差异表达的铁死亡相关基因,其中表达上调47个、表达下调25个,GO和KEGG通路分析结果显示这72个基因广泛参与了铁代谢和脂肪酸氧化等生物学过程。共筛选出20个结肠癌组织与正常组织有差异的铁死亡lncRNA。根据共识聚类分析结果分组的2个结肠癌集群之间总体生存率差异有统计学意义(P<0.001)。根据LASSO-Cox回归分析结果筛选出10个lncRNA,并构建预后风险模型,将428例结肠癌患者按7∶3的比例随机分为训练组和验证组。在训练组、验证组和总体结肠癌患者中,高风险组的总体生存率均显著低于低风险组(P<0.001)。结肠癌组织ITGB1-DT相对表达量显著高于癌旁组织(P<0.001)。细胞实验结果显示,ITGB1-DT可促进结肠癌细胞的增殖并抑制其铁死亡。结论 成功构建了基于铁死亡相关lncRNA的结肠癌预后风险模型,并建立了可用于判断结肠癌患者总体生存率的列线图。ITGB1-DT或可促进结肠癌的发展。
- 汪雨卿张越徐稳崔中奇
- 关键词：结肠癌
- 生物信息学分析及预测miR-17-92的分子调控网络被引量：2
- 2012年
- miR-17-92是一个高度保守的基因家簇,参与哺乳动物多个器官发育并与多种实体瘤的发生密切相关。运用多个在线数据库,发现了miR-17-92的上游转录因子及下游靶基因间的多个前馈和反馈环路。并对参与miR-17-92调控环路的基因进行功能聚类分析,进而绘制出miR-17-92的核心调控网络图。结果提示miR-17-92与其上游转录因子共调控的靶基因可能参与了生物体的细胞周期调控,迁移、凋亡、激素应答、免疫系统发育等多种生物学过程,KEGG pathway分析提示其还与多种肿瘤信号通路密切相关。因此,对miR-17-92分子调控网络生物信息学的分析可以有助于理解其在细胞发育和肿瘤发生过程中的作用机制并为后续实验验证提供良好的指导。
- 申健张越潘秋辉孙奋勇
- 关键词：生物信息学分析
- Brg1调控重组人骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化
- 2011年
- 背景:Brg1是依赖ATP的染色质改变复合物的核心催化亚基,该亚基在基因的转录调控、复制、重组,骨骼肌的分化、抑制肿瘤的发生等活动中起着重要的作用。目的:探索Brg1基因在骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化过程中的调控机制。方法:采用胶原酶消化法进行小鼠颅骨成骨细胞的原代培养;分别用0,50,200μg/L的重组人骨形态发生蛋白2诱导原代培养的成骨细胞的分化,摸索骨形态发生蛋白2的最佳作用剂量;实时荧光定量PCR和Western blot进行骨形态发生蛋白2对Brg1的作用时间的动力学分析;实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测敲除Brg1对骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化的影响;构建Dlx5腺病毒重组表达载体,实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测Brg1在骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化过程中对Dlx5的调控作用。结果与结论:用自行合成的重组人骨形态发生蛋白2可诱导原代培养小鼠成骨细胞分化,200μg/L剂量有着较好的诱导分化效果;重组人骨形态发生蛋白2可诱导Brg1基因转录水平和翻译水平表达水平上调;敲除Brg1可抑制重组人骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化;Brg1能够调控Dlx5的表达水平。说明Brg1通过调控Dlx5的表达水平调控重组人骨形态发生蛋白2诱导的小鼠成骨细胞的分化。
- 高忠平秦丽张越耿倩倩孙奋勇
- 关键词：成骨染色质重塑骨形态发生蛋白2
- 骨形态发生蛋白2诱导C2C12和MC3T3-E1的成骨分化与自噬被引量：3
- 2014年
- 背景:一系列研究表明自噬与分化有密切联系;骨形态发生蛋白2是诱导C2C12、MC3T3-E1成骨分化经典途径,是研究成骨分化过程的理想模型。目的:观察自噬与骨形态发生蛋白2诱导细胞株C2C12、MC3T3-E1成骨分化的关系。方法:Real-Time PCR检测MC3T3-E1与C2C12在骨形态发生蛋白2(100μg/L)诱导培养3 d后成骨与自噬相关指标变化。碱性磷酸酶染色检测不同浓度3-甲基腺嘌呤(0,1,5,10 mmol/L)对骨形态发生蛋白2(100μg/L)诱导培养7 d MC3T3-E1与C2C12成骨指标碱性磷酸酶变化,Western Blot检测C2C12和MC3T3-E1在骨形态发生蛋白2(100μg/L)诱导不同时间点(0,12,24,48,72,96 h)LC3-Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平。结果与结论:在骨形态发生蛋白2诱导细胞株C2C12、MC3T3-E1成骨分化过程中,诱导自噬相关mRNA与蛋白水平均有增高趋势,且自噬相关蛋白LC3水平增高与时间相关。同时,抑制自噬成骨分化过程中碱性磷酸酶表达水平降低。因此,自噬与骨形态发生蛋白2诱导细胞株C2C12、MC3T3-E1成骨分化过程有密切关系。
- 高艳程晨李静张越肖伟凡潘秋辉
- 关键词：骨组织工程自噬骨形态发生蛋白2C2C12MC3T3-E1成骨分化
- MicroRNA-122过表达转基因小鼠的建立
- 2012年
- 目的:建立microRNA-122(mir-122)过表达转基因小鼠模型,为今后研究肝脏发育,分化及肝癌预防、诊断及治疗等提供实验模型。方法:构建mir-122过表达载体,利用受精卵前核显微注射法将mir-122过表达载体导入小鼠受精卵中,获得mir-122过表达转基因小鼠。PCR法检测转基因小鼠的整合情况,实时定量PCR法检测mir-122过表达转基因小鼠肝脏及其主要器官mir-122及其确定靶基因高亲和性阳离子氨基酸转运体-1(CAT-1),切割同源物1(CUTL-1),血清反应因子(SRF)的表达情况。结果:mir-122过表达转基因小鼠,与同窝阴性鼠相比,mir-122在过表达转基因小鼠肝脏及主要器官中的表达升高,mir-122靶基因表达水平下降。结论:成功构建mir-122过表达转基因小鼠。
- 张越马纪安靓贾俊双李振林孙奋勇
- 关键词：过表达转基因小鼠
- 5-Aza-CdR对膀胱癌细胞生长及hsa-miR-203表达的影响被引量：6
- 2011年
- 许多研究表明,miRNAs在肿瘤中失活与特定的遗传和表观遗传机制改变有关,hsa-miR-203在膀胱癌组织和细胞中表达下调并扮演着抑癌基因的角色。为了验证hsa-miR-203在膀胱癌细胞中是否受DNA甲基化抑制,采用去甲基化抑制剂5-Aza-CdR(5-氮-2'-脱氧胞苷)处理5637和BIU-87膀胱癌细胞,MSP和RT-PCR检测表明,hsa-miR-203的启动子在5637和BIU-87细胞中存在完全的甲基化,而5-Aza-CdR能逆转hsa-miR-203启动子的甲基化状态,恢复hsa-miR-203的表达。MTT法测定显示,5-Aza-CdR使5637和BIU-87膀胱癌细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量依赖性。同时,流式细胞仪检测显示,5-Aza-CdR使5637和BIU-87膀胱癌细胞周期阻滞于G_0/G_1期。因此,5-Aza-CdR能抑制膀胱癌细胞5637和BIU-87增殖并干扰其细胞周期。hsa-miR-203启动子异常甲基化是其在膀胱癌细胞中低表达的重要机制,5-Aza-CdR能逆转hsa-miR-203基因的甲基化,恢复hsa-miR-203的表达,为hsa-miR-203作为膀胱癌去甲基化治疗的靶标提供了科学依据。
- 申健张越肖伟凡陈景亮马纪孙奋勇
- 关键词：5-AZA-CDR膀胱癌DNA甲基化
