陈勇
- 作品数：17 被引量：78H指数：4
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- 发文基金：国家自然科学基金吉林省杰出青年科学基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 促凋亡蛋白BID多克隆抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的制备抗BID的多克隆抗体,用于检测凋亡信号转导过程中BID蛋白的表达。方法采用PCR技术合成编码BID特异性肽段的基因,构建GST融合基因表达载体,在E.coli BL21中诱导表达GST-BID多肽的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B纯化后免疫家兔,免疫血清经纯化后,得到抗BID的多克隆抗体,经Western blot鉴定其特异性。结果通过PCR扩增获得了BID肽段的编码基因;pGEX-6P-1-BID多肽重组质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确;在E.coli BL21中表达了GST-BID多肽融合蛋白;纯化后蛋白纯度达95%;制备的抗BID多克隆抗体能够特异地识别BID蛋白。结论所制备的抗BID多克隆抗体可特异性检测BID蛋白。
- 陈越高畅陈勇佟立全孔维金英花
- 关键词：促凋亡蛋白多克隆抗体特异性
- 人类端粒DNA的分子识别及其作用机制探讨被引量：4
- 2012年
- 核酸中富含短的G-碱基重复的序列可以形成一种复杂的高级结构,称为G-四链体(G-quadruplex).在基因组中,借助生物信息学发现这类富G序列广泛分布在基因的启动子区,特别是那些参与到复制中去的基因,例如癌基因.同时发现这类序列在mRNA的5′非翻译区(5′UTR)也广泛存在.这类序列在染色体末段端粒部位的存在及功能已得到充分阐明.已知端粒富含G-碱基序列,其3′末端以单链状态存在,这使得在一些小分子的选择性作用下端粒序列很容易形成G-四链体结构,进而破坏端粒结构,影响端粒酶活性.已知端粒酶在超过85%的肿瘤中过量表达,因此,端粒酶已经成为抗癌药物设计的特殊靶点,是目前本领域的研究热点之一.已发现系列配体通过有效抑制端粒酶而表现高的抗肿瘤活性.本文主要综述了近年来端粒G-四链体分子识别及其药物靶向的最新进展,并对其作用机理做了进一步的分析和探讨.
- 陈勇赵传奇曲晓刚
- 关键词：端粒端粒酶
- 沪酿3.042米曲霉紫外诱变及高活力蛋白酶菌株选育被引量：20
- 2005年
- 采用沪酿3.042米曲霉的孢子为对象,对其孢子进行紫外诱变,利用酪蛋白平板对2261株再生株进行初筛,得到34株蛋白酶活力提高的菌株,复筛得到一株蛋白酶活力高且遗传稳定的突变株LY06,37℃培养44h产酶活力由 313U/g曲料高到 556U/g曲料,为原菌株的 1 78 倍,传代培养15次,蛋白酶活力基本保持稳定,没有明显的下降。
- 陈亚光高朝辉陈勇王璐王艳珍逯家辉腾利荣孟庆繁
- 关键词：蛋白酶沪酿3.042米曲霉紫外诱变
- 内质网滞留型抗Cyclin D1胞内抗体的抑瘤效应分析
- 武艳陈勇李函蔚周立宏曹玉华李桂英
- 关键词：CYCLIND1胞内抗体乳腺癌基因治疗
- 人CDK4基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性被引量：2
- 2008年
- 将人CDK4基因克隆入原核表达载体pET28a(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒pET28a-CDK4,转化E.coliBL21(DE3)后获得表达菌株.该表达菌株经IPTG诱导后,高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的52.6%,包涵体经过洗涤、尿素变性溶解、His Trap HP Kit柱纯化、稀释复性,获得纯度达98%以上的蛋白.SDS-PAGE及Western blot分析表明,在分子量34 000处有一特异性蛋白条带.结果表明,已成功的表达和纯化纯度达98%的重组人CDK4蛋白.
- 曹玉华许晶晶陈勇王琪冯晶郝东云李桂英
- 关键词：原核表达包涵体
- 抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的抑制作用被引量：3
- 2008年
- 目的:构建细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因的真核表达载体并分析其对乳腺癌细胞增殖的抑制效应。方法:利用PCR技术和分子克隆技术,构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体基因(AD5N)的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,利用脂质体介导法转染MCF-7细胞,RT-PCR、间接免疫荧光、Western blot和流式细胞术分析该胞内抗体基因AD5N在MCF-7细胞中的表达、定位及抑瘤效应。结果:经限制性内切酶分析及序列分析发现,成功构建编码细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体(AD5N)基因的真核表达载体pcDNA3.1-AD5N,基因片段为855 bp,编码285个氨基酸,分子量约为30 kD。RT-PCR、免疫荧光及Western blot实验结果显示,仅在转染胞内抗体基因的MCF-7细胞中存在该胞内抗体的表达,并且主要分布在细胞核区域。与野生型MCF-7细胞和转染空质粒的细胞相比,在MCF-7/pcDNA3.1-AD5N细胞中AD5N的表达可明显抑制MCF-7细胞增殖,显著诱导细胞凋亡(P<0.01),使G0-G1期细胞周期指数增高12.64%,S期指数下降15.22%,凋亡细胞指数上升9.15%。结论:细胞核定位的抗Cyclin D1胞内抗体AD5N基因的表达,可有效抑制乳腺癌细胞的增殖,阻滞细胞周期进展,并诱导细胞凋亡。
- 周立宏朱迅曹玉华王磊陈勇杜柏榕李桂英
- 关键词：CYCLIN胞内抗体核定位乳腺癌
- 抗人Cyclin D1人源单链抗体AD9的表达及活性分析
- 2008年
- 目的原核表达、纯化抗人cyclin D1人源单链抗体(AD9)并对其活性进行分析。方法将含有AD9基因片段的噬菌粒转化大肠杆菌HB2151后,IPTG诱导表达,ELISA鉴定培养上清具有与cyclin D1蛋白结合活性后,经硫酸铵沉淀,His Trap HP亲和纯化,获得抗人cyclin D1人源单链抗体(AD9),进一步利用ELISA和Western blot对其进行鉴定和活性分析。结果IPTG诱导AD9可溶性表达,培养上清经硫酸铵沉淀和亲和纯化后,获得纯度达95%的单链抗体蛋白,ELISA和Western blot结果表明,诱导上清及纯化的AD9均能够与人Cyclin D1蛋白有特异性结合,AD9的分子量约为30kDa。结论成功地可溶性表达和纯化了,具有较好的结合人Cyclin D1蛋白活性的抗人Cyclin D1人源单链抗体。
- 曹玉华李善玉陈勇邹德生田宇郝东云李桂英
- 关键词：D1蛋白单链抗体
- 正交设计优选鸡骨草总黄酮和总生物碱的提取工艺被引量：20
- 2007年
- 目的优选鸡骨草总黄酮和总生物碱的提取工艺。方法通过L9(34)正交试验设计,以总黄酮和总生物碱含量为考查指标,探讨了提取条件对鸡骨草活性物质的提取量的影响。结果各实验因素对鸡骨草黄酮类物质和总生物碱提取量的影响均依乙醇体积分数、提取温度、固液比、提取时间因素顺序降低。结论黄酮类物质最佳提取条件:乙醇体积分数为55%,固液比为1∶10,提取温度为30℃,提取时间为12h。总生物碱最佳提取条件:乙醇体积分数为95%,固液比为1∶20,提取温度为20℃,提取时间为24h。
- 程瑛琨陈勇王璐李敏钟丽丽滕利荣
- 关键词：鸡骨草总黄酮总生物碱正交设计
- 细胞周期蛋白质依赖性激酶CDK2多克隆抗体的制备和鉴定被引量：2
- 2007年
- 我们采用PCR技术合成编码CDK2肽段的基因,将其置于谷胱甘肽转移酶(GST)编码基因的下游,在IPTG诱导下,于E.coli中诱导表达了GST-CDK2肽融合蛋白质,以此融合蛋白质作为免疫原免疫家兔制备抗CDK2的多克隆抗体.经Western Blot检测证明:该抗体能够特异地识别CDK2蛋白质,可作为CDK2的特异性检测抗体,用于研究细胞周期和细胞凋亡进程中CDK2的作用.
- 李清陈越陈勇佟立全孔维金英花
- 关键词：CDK2多克隆抗体WESTERNBLOT
- 抗Cyclin D1胞内抗体与p16联合抑制乳腺癌细胞的增殖
- ＜正＞Cyclin D1的过量表达和p16的广泛失活,与肿瘤的发生和发展有着密切关系,是肿瘤基因治疗的靶点。胞内抗体技术是一项实现细胞内重要靶蛋白表型敲除的技术。为了实现高效抑制乳腺癌细胞增殖,本研究将抗Cyclin D...
- 陈勇杨丹周立宏曹玉华王媚娘李桂英
- 关键词：P16胞内抗体乳腺癌基因治疗
- 文献传递
