熊林
- 作品数：6 被引量：20H指数：3
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- 幽门螺杆菌东、西方株CagA的序列差异及其对胃癌细胞生长与凋亡的影响被引量：7
- 2018年
- 【背景】幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是胃癌的主要致病因素,其分泌的细胞毒素相关基因A蛋白(Cytotoxin associated gene A,CagA)是目前已知唯一能被H.pylori注入胃上皮细胞并模拟细胞内蛋白发挥作用的癌蛋白,参与胃癌的发生发展。【目的】比较H.pylori东亚株和西方株CagA结构差异,初步探讨H.pylori-CagA对胃癌细胞增殖与凋亡的影响。【方法】对H.pylori东亚株和西方株CagA的核酸及氨基酸序列进行生物信息学分析,构建含东亚株和西方株cagA基因的真核表达载体,转染胃癌细胞AGS,用Western blot法检测CagA蛋白的表达,用CCK8法测定细胞的生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡。【结果】生物信息学分析发现H.pylori东亚、西方菌株CagA的核酸序列和氨基酸序列均存在特征性差异。构建了含东亚、西方菌株cagA基因的表达载体[命名为GZ7/cagA(东亚株)和26695/cagA(西方株)]。与空载体组比较,GZ7/cagA和26695/cagA转染组均表达CagA蛋白,两组比较表达量无显著性差异,GZ7/cagA转染组细胞生长显著增加,而26695/cagA转染组细胞生长显著降低(P<0.05)。GZ7/cagA转染组、26695/cagA转染组细胞的凋亡率分别为7.23±0.96及9.17±1.40,均高于空载体组(5.03±0.63),差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】东亚株与西方株CagA之间有结构和功能的差异,东亚株CagA能促进细胞增殖,而西方株CagA却抑制细胞增殖,但两者均能促进细胞凋亡。
- 龙妮娅熊林熊林赵艳赵艳袁航袁航李雅洁李雅洁
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA胃癌细胞增殖
- 幽门螺杆菌临床菌株的分离培养和鉴定被引量：4
- 2016年
- 目的：建立一种幽门螺杆菌（H.pylori）临床菌株的分离培养的方法。方法：取临床胃黏膜组织标本88株,接种于10%绵羊全血的哥伦比亚选择性培养基上,37℃、5%O2、10%CO2、85%N2培养3-5 d后,挑取血平板上透明细小可疑菌落进行革兰氏染色和尿素酶试验,对阳性菌落进行扩大纯培养,提取细菌DNA,PCR扩增H.pylori 16sRNA、Cag A基因,电泳并进行测序鉴定。结果：成功从临床胃黏膜组织中分离培养出H.pylori,88例胃黏膜组织标本中分离培养并鉴定出H.pylori 19株,阳性率为22%;对16sRNA及Cag A基因进行扩增,电泳可见目的条带,并对16sRNA扩增产物测序,与H.pylori国际标准菌株26695比对,同源性为95%-99%。结论：37℃、5%O2、10%CO2、85%N2条件下10%绵羊全血的哥伦比亚选择性培养基上能成功分离培养出H.pylori临床株。
- 刘正美周建奖赵艳熊林龙妮娅谢渊
- 关键词：幽门螺杆菌临床菌株革兰染色CAGA基因
- 幽门螺杆菌临床株分离及东亚与西方型菌株比较分析
- 目的：分离鉴定幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H.pylori)临床株，分析其细胞毒素相关基因A蛋白(Cytotoxinassociated gene A protein, CagA)磷酸化基序EPIY...
- 熊林
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA蛋白聚类分析
- 幽门螺杆菌对NLRP3炎症小体的活化作用被引量：1
- 2016年
- 目的研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染对NLRP3炎症小体相关蛋白的活化作用,探讨NLRP3炎症小体在H.pylori感染中的作用。方法培养H.pylori国际标准株NCTC11639,感染胃黏膜上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株MKN-45,细菌数∶细胞数(感染复数)为100∶1和200∶1,于6 h和12 h收集细胞,提取总蛋白。Western blotting检测炎症小体中NLRP3及Caspase-1蛋白的表达水平,ELISA法检测细胞中IL-1β的含量。结果 H.pylori感染GES-1细胞后,NLRP3、Caspase-1以及IL-1β的表达随着感染复数的增加而增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);感染MKN-45细胞后,NLRP3的蛋白表达随着感染复数的增加而增加,而Caspase-1及IL-1β的表达随着感染复数的增加而降低,差异均有统计学意义(P<0.05);相同感染复数的H.pylori感染GES-1细胞和MKN-45细胞,6 h和12 h之间NLRP3、Caspase-1以及IL-1β的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 H.pylori感染在体外能活化GES-1细胞中NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3和Caspase-1,活化MKN-45细胞中NLRP3蛋白的表达,抑制Caspase-1蛋白的表达;促进上皮细胞GES-1中IL-1β炎症因子的表达,抑制肿瘤细胞MKN-45中IL-1β炎症因子的表达。
- 刘正美姜琼周建奖官志忠赵艳熊林谢渊
- 关键词：幽门螺杆菌NLRP3CASPASE-1IL-1Β
- 幽门螺杆菌临床株cagA基因克隆及序列分析被引量：4
- 2015年
- 目的分离鉴定临床分离株幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp），分析其CagA蛋白的磷酸化基序EPIYA，探讨东亚株HpCagA序列的结构特点。方法选取胃相关疾病患者的胃黏膜组织，剪碎后接种于哥伦比亚血琼脂平板，微需氧培养，菌落生长后通过尿素酶试验、革兰染色及显微镜检查对Hp进行初步鉴定。提取菌落基因组，PCR扩增HP16SrRNA基因并进行测序鉴定；扩增cagA基因全长序列，连接入pMD18-T载体。将重组质粒转入感受态E．coliDH5a，测序鉴定重组质粒，利用DNAStar和MEGA6软件对cagA序列进行比对及聚类分析。结果成功分离Hp共26株。构建pMD18-T／cagA克隆载体后对26株Hp的cagA基因全长测序，序列比对分析显示有6株为西方型，20株为东亚型。东亚型CagA第815～834位点存在13个氨基酸的缺失、部分缺失或变异，西方型中有3株丢失磷酸化位点EPIYA-C；聚类分析显示Hp分离株分别聚类为东亚群、西方型东亚群以及西方群3群。结论Hp分离株以东亚株为主，但也存在西方株感染；东、西方型CagA在EPIYA基序及侧翼序列显著差异，菌株之间存在聚类关系。
- 熊林陈峥宏刘正美龙妮娅谢渊赵艳官志忠周建奖
- 关键词：幽门螺杆菌CAGA蛋白聚类分析
