李刚
- 作品数：12 被引量：62H指数：4
- 供职机构：复旦大学附属华山医院检验医学科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
- 建立高分辨率熔解曲线法筛选含VEB-3型基因菌株被引量：1
- 2010年
- 目的 建立高分辨率熔解曲线法筛选含VEB-3型基因菌株.方法 不重复收集2003年1-12月革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBL）菌株292株,用酚-氯仿法抽提基因组DNA;首先以基因组DNA为模板,PCR扩增VEB基因;挑选阳性菌株34株再PCR扩增包含168位点的一段约110 bp的基因片段,高分辨率熔解曲线（high resolution melt,HRM）分析后测序验证.结果 VEB-3亚型与其他亚型基因通过HRM分析具有显著的差别;测序结果与HRM分型结果一致.结论 应用HRM技术可以准确快速筛选含VEB-3型基因菌株.
- 李刚魏取好倪瑛乔王艳艳杜昕蒋晓飞
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶
- 血流感染溶血葡萄球菌耐药性分析被引量：3
- 2013年
- 目的了解溶血葡萄球菌血流感染的临床分布及耐药性,为临床用药提供依据。方法回顾性分析医院2009-2010年由溶血葡萄球菌所致血流感染患者的临床资料和微生物学资料。结果 2009年1月-2010年12月共分离到非重复溶血葡萄球菌50株,以儿科所占比例最高,约占26%,其次为急诊和ICU;溶血葡萄球菌对青霉素耐药率最高,两年耐药率分别为86.7%、90.0%,耐甲氧西林溶血葡萄球菌(MRSH)检出率分别为60.0%、75.0%,未见万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁耐药菌株。结论溶血葡萄球菌是引起血流感染重要病原,耐药性严重。
- 赵燕袁轶群叶琴罗晓华李刚周丹秋
- 关键词：溶血葡萄球菌血流感染耐药性
- 泛耐药肺炎克雷伯菌株的医院内流行特性的研究被引量：14
- 2011年
- 目的 了解华山医院泛耐药肺炎克雷伯菌株及其流行的特点.方法 收集2006年8月-2009年12月对CLSI推荐常规检测药物均耐药的肺炎克雷们菌临床分离株,共57株.所有菌株都进行药物敏感试验、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）初筛及表型确证试验、改良Hodge试验、等电聚焦电泳,聚合酶链反应及其产物测序、接合试验、肠杆菌基因间重复共有序列PCR（ERIC-PCR）和多位点序列分型（MLST）.结果 所有菌株都携带blaKPC-2、blaCTX-M-14、blaSHV12和blaTEM-1及qnrB和aac（6＇）-I b-cr基因.57株细菌中ST423型5株,MIST ST11型52株.ST423型散发,而ST11型呈医院内流行.57株细菌都对替加环素耐药,对多黏菌素、米诺环素和多西环素部分敏感.结论 本次泛耐药肺炎克雷们流行主要为ST11型菌株;不同的肺炎克雷伯菌株,播散能力不同;检出泛耐药肺炎克雷伯菌时应增加检测药物的种类.
- 王艳艳刘红杜昕李刚魏取好陈晓耘蒋晓飞
- 关键词：泛耐药肺炎克雷伯菌多位点序列分型PCR
- 两种非发酵菌对多种抗菌药物耐药性的分析被引量：4
- 2011年
- 目的了解铜绿假单胞菌(PAE)和鲍氏不动杆菌(ABA)耐药的变化,探讨抗菌药物用药情况与耐药性之间关系,为合理使用抗菌药物提供依据。方法 2007年7月-2010年6月按季度对非发酵菌药敏试验结果和抗菌药物使用频度(DDDs)进行统计,以Spearman相关分析法进行分析。结果 PAE对除磺胺甲噁唑/甲氧苄啶外的抗菌药物敏感率均>70.0%,ABA 12个季度耐药率增长较大,其中亚胺培南和美罗培南耐药率最高,达到83.3%和88.9%;对于PAE,头孢吡肟DDDs不仅与自身耐药率相关(r=0.767),还与磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率相关(r=0.772),喹诺酮类DDDs与亚胺培南耐药率相关(r=0.689);对于ABA,头孢美唑的DDDs与亚胺培南、美罗培南、庆大霉素和头孢噻肟耐药率相关(r=0.711、0.711、0.767和0.800);头霉素类的DDDs与亚胺培南、美罗培南、庆大霉素和阿米卡星的耐药率相关(r=0.826、0.788、0.633和0.642),头孢吡肟DDDs与头孢呋辛、头孢他啶、哌拉西林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率相关(r=0.709、0.697、0.818和0.782);美罗培南DDDs不仅与自身耐药率相关(r=0.651),还与亚胺培南耐药率相关(r=0.679);PAE抗菌药耐药率间相关分析发现,只有磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和头孢吡肟耐药不与其他抗菌药耐药率相关,对于ABA只有头孢美唑耐药率和其他抗菌药不存在相关。结论抗菌药使用量可以影响自身或其他抗菌药的耐药率;对于非发酵菌单纯控制抗菌药的使用,并不能减少其耐药率上升;耐药基因在菌株间横向传播可直接产生耐药,要控制耐药率增长,除合理使用抗菌药外,还必须控制医院感染,实行严格的隔离消毒制度。
- 方欢张军李刚袁轶群丁柳美
- 关键词：耐药性铜绿假单胞菌鲍氏不动杆菌用药频度
- 白色假丝酵母菌感染致严重脓毒血症大鼠模型的建立被引量：1
- 2015年
- 目的采用尾静脉注射法初步建立白色假丝酵母菌感染所致严重脓毒血症动物模型,为进一步研究人类该疾病的发生、发展规律及预防、治疗提供实验依据。方法清洁级雄性Wister大鼠48只,随机分为6组,每组8只,对照组给予尾静脉注射生理盐水1ml/kg,其余5组给予尾静脉注射白色假丝酵母菌液1ml/kg(浓度为4×108集落形成单位/L)造成严重脓毒血症;分别于6、12、24、36、48h各时间点采血检测血常规及生化指标,并观察大鼠肝、心、肺、肾等组织病理学形态改变。结果各处理组血常规白细胞及生化指标、谷草转氨酶、尿素、肌酐与对照组均有显著差异,其中白细胞于6h开始逐渐降低,于24h时达最低值,之后有所上升;谷草转氨酶6h开始升高,12h升高明显,在24h时达高峰,之后逐渐下降;尿素和肌酐在6、12h变化不明显,在24h及之后有大幅度上升,48h达高峰,病理形态学检查显示动物多个器官明显受损。结论大鼠尾静脉注射白色假丝酵母菌液可致大鼠体内广泛炎症反应,并伴有多器官损伤,其改变符合严重脓毒血症的标准和特征,该研究成功建立白色假丝酵母菌脓毒症动物模型,为真菌脓毒血症研究奠定基础。
- 张继红赵燕李刚范卫史继敏
- 关键词：脓毒血症动物模型白色假丝酵母菌
- 非标记探针结合高分辨熔解曲线分析快速区分第1类整合子可变区启动子被引量：2
- 2017年
- 目的：建立一种基于非标记探针结合高分辨率熔解曲线分析快速区分第1类整合子可变区启动子种类的方法。方法 PCR扩增质粒pACW （PcW）、pACWP2（PcW－P2）含可变区启动子区域的DNA片段，再分别以纯化的PCR产物为模板，用扩增子高分辨率熔解曲线分析对P2启动子进行区分。以质粒 pACS （ PcS ）、pACH2（ PcH2）、pACH1（ PcH1）、pACW （ PcW ）及肺炎克雷伯菌HS07－68（PcWTGN－10）、HS05－1792（PcH2TGN－10）基因组DNA为模板，结合定点突变，PCR扩增获得分别含8种不同Pc启动子序列的DNA片段，再分别以纯化的PCR产物为模板，联合运用扩增子和非标记探针高分辨率熔解曲线分析对8种不同Pc启动子进行区分。运用上述方法对2004—2007年95株非重复分离自华山医院住院患者尿液标本的第1类整合酶阳性大肠埃希菌中可变区启动子进行分析，并与测序结果进行比对。结果 P2启动子扩增子熔解曲线的熔链温度（ Tm）值明显高于无活性的P2启动子，通过扩增子高分辨率熔解曲线分析可将两者区分开，95株大肠埃希菌109个第1类整合子中，有2个整合子中检测出P2启动子，与测序结果完全一致。8种不同的Pc启动子通过扩增子高分辨率熔解曲线分析分为3组：PcS、PcSTGN－10；PcW、PcWTGN－10；PcH1、PcH1TGN－10、PcH2、PcH2TGN－10。非标记探针高分辨率熔解曲线分析将8种不同的 Pc 启动子分为4组 PcS， PcH1；PcH2， PcW；PcSTGN－10， PcH1TGN－10；PcH2TGN－10，PcWTGN－10。联合运用扩增子和非标记探针高分辨率熔解曲线分析可将8种不同的Pc启动子相互区分开，95株大肠埃希菌109个第1类整合子中，共检测出5种不同的Pc启动子PcS，PcW，PcH1，PcH2TGN－10，PcWTGN－10，与测序结果完全一致。结论本研究成功建立了一种基于非标记探针结合高分辨率熔解曲线分析的方法，用于快速区分第1类整合子可变区启动�
- 魏取好李刚蒋晓飞胡庆丰吕火烊周永列关明吕元
- 关键词：整合子类聚合酶链反应高分辨率熔解曲线
- 木糖氧化产碱菌医院感染调查分析被引量：8
- 2008年
- 目的调查木糖氧化产碱菌医院感染分布及耐药特点,以探讨发生原因与防治措施。方法对医院2004年9月-2006年8月临床标本中分离的1323株木糖氧化产碱菌进行回顾性分析。结果木糖氧化产碱菌主要出现于痰标本中,占99.85%,偶尔出现在伤口分泌物和粪标本中;木糖氧化产碱菌感染尤以呼吸科和重症监护病房(ICU)分布为多,分别占46.94%和12.77%,其次是心内科、内分泌科和血液科病房;该菌对氨基糖苷类(阿米卡星、庆大霉素)、喹诺酮类(环丙沙星)、氨曲南、头孢吡肟等耐药现象严重,耐药率>98.00%;而其对碳青酶烯类药物、含酶抑制剂复合制剂及三代头孢(头孢哌酮、头孢他啶)等抗菌药物敏感,耐药率<5.00%。结论加强医院环境管理和器械消毒,合理使用抗菌药物,控制木糖氧化产碱菌在医院内的定植与播散。
- 何岱昆申捷李刚李宏治
- 关键词：医院感染
- 重症监护病房肺炎克雷伯菌耐药分析被引量：5
- 2011年
- 目的:分析重症监护病房(ICU)肺炎克雷伯菌感染情况及其耐药性演变,为临床合理应用抗菌药物提供依据。方法:2008年—2010年从复旦大学附属金山医院ICU分离出326株肺炎克雷伯菌的药敏实验结果回顾。结果:从ICU分离所得肺炎克雷伯菌的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株占50.5%～72.0%,显著高于全院水平(37.3%～47.4%)。肺炎克雷伯菌对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率由2008年的0%上升到2010年的18%～23.4%,对头孢吡肟的耐药率由2008年的7.7%上升到2010年的24.3%;泛耐药菌株逐年增加,2008年为0株,2009年为9株,2010年为17株。结论:虽然肺炎克雷伯菌对碳青霉稀类、β-内酰胺酶抑制剂、头孢吡肟有较好的敏感性,但耐药性呈逐年上升趋势。
- 杨立功袁轶群罗晓华李刚叶琴朱列君
- 关键词：肺炎克雷伯菌重症监护病房耐药菌医院感染
- 477株鲍曼不动杆菌耐药性分析被引量：4
- 2011年
- 目的分析477株鲍曼不动杆菌临床分布特征及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对按常规送检的患者的各类标本进行培养、分离、鉴定。对分离出的477株鲍曼不动杆菌的药敏结果进行分析。结果 477株鲍曼不动杆菌(非重复菌株)的标本分布以呼吸道分泌物为主。重症监护(ICU)病房216株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦的耐药率分别为28.9%、32.7%、25.5%、61.9%,对3类或以上抗菌药物多重耐药菌45株。非ICU病房261株鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦的耐药率分别为17.9%、19.0%、11.3%、35.0%,多重耐药菌6株。结论自ICU病房分离的菌株对大部分抗菌药物的耐药性比非ICU分离株高,多重耐药菌株多。
- 袁轶群李刚罗晓华杨立功王峰
- 关键词：鲍曼不动杆菌耐药性重症监护
- 高分辨率熔解曲线法检测临床常见KPC基因亚型被引量：3
- 2011年
- KPC是一种近年新出现的碳青霉烯酶,可以水解包括碳青霉烯类抗菌药物在内的所有β内酰胺类抗菌药物,且仅轻微或不被克拉维酸抑制,给临床治疗带来极大困难[1].目前已经公开报道的亚型有KPC-2至KPC-11,但临床中流行的主要是产KPC-2或KPC-3的肺炎克雷伯菌[2],
- 李刚赵燕魏取好王艳艳杜昕蒋晓飞
- 关键词：基因亚型熔解曲线法肺炎克雷伯菌抗菌药物碳青霉烯酶
