李溢柔
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- 重组腺病毒载体负载树突状细胞诱导乙肝病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞
- 2012年
- 目的本研究利用重组腺病毒载体将乙肝病毒基因导入树突状细胞（DC）内表达成内源性蛋白,探索DC体外抗原负载并诱导乙肝病毒（HBV）特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的有效方法。方法分离外周血单个核细胞（PBMC）并诱导成DC。用HFP3肽辅助腺病毒载体进行抗原负载,检测DC细胞内乙肝核心抗原基因的表达,比较成熟前后DC的表面分子,研究DC诱导的乙肝病毒核心抗原（HBcAg）特异性CTL的增殖。应用统计软件SPSS17.0进行统计分析,以P〈0.05为差异有统计学意义。结果重组腺病毒CHB3感染的DC能有效表达HBcAg蛋白。HFP3辅助感染能显著提高感染效率达3~10倍。腺病毒载体负载的DC表面CD80、CD86、CCR7的表达有所上调,但差异无统计学意义（平均荧光强度CHB3/iDC：CD80,46.2±14.6/29.9±7.9,P=0.209;CD86,142.0±12.9/113.3±6.5,P=0.430;CCR7,49.3±3.0/36.4±4.6,P=0.054）。Cocktail促成熟后,CD80、CD83、CD86、CCR7显著上调（平均荧光强度Cocktail-CHB3/iDC：CD80,97.1±8.1/29.9±7.9,P=0.0019;CD83,75.4±8.4/26.8±1.5,P=0.017;CD86,176.2±14.8/113.3±6.5,P=0.021;CCR7,75.3±3.4/36.4±4.6,P=0.0016）,HLA-DR分子维持高表达。CHB3负载的DC与自体T细胞共培养,可检测到HBcAg特异性CTL比例明显增高（1例由0.25﹪增至1.98﹪,另1例由0.19﹪增至1.37﹪）。结论在优化的条件下,重组腺病毒载体CHB3能够有效地介导抗原蛋白HBcAg在DC内高水平表达,加入HFP3辅助感染能在较低的感染剂量下获得较高的感染效率,有利于维持DC的活性。重组腺病毒载体CHB3结合HFP3的抗原负载方案能有效地诱导HBcAg特异性CTL。
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- 关键词：树突细胞腺病毒
