吉清
- 作品数：19 被引量：71H指数：3
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 人可溶性B淋巴细胞刺激因子结合小肽的筛选及其免疫抑制功能分析
- 2004年
- 目的筛选和鉴定B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的抑制性小肽。方法用重组人BLyS筛选噬菌体构象型7肽库,人工合成小肽鉴定其免疫抑制功能。结果经过筛选,得到两个阳性噬菌体克隆,人工合成的两个小肽在体外能特异性地抑制BLyS刺激细胞增生的活性。结论获得了两个能够抑制BlyS功能的小肽。
- 吉清郑英如李蓉芬钟小林高会广何凤田
- 关键词：B淋巴细胞刺激因子免疫抑制噬菌体刺激细胞体外
- 肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子免疫抑制分子的表达及免疫原性分析
- 2007年
- 目的制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性肿瘤坏死因子家族的B细胞激活因子(BAFF)突变体,并对其免疫抑制功能进行分析。方法经原核表达和Ni-NTA层析纯化制备异源性T辅助细胞表位修饰的人可溶性BAFF突变体;用所制备的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中抗人BAFF抗体的滴度;四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测免疫小鼠血清抑制重组sBAFF和天然sBAFF功能的情况。结果重组蛋白在大肠杆菌中均获得了高效表达;经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均达90%以上;用重组蛋白免疫小鼠均可诱导产生高滴度抗人可溶性BAFF抗体;免疫小鼠血清可抑制重组sBAFF和天然sBAFF刺激淋巴细胞增殖的功能。结论成功制备了可诱导产生高滴度特异性抗体的BAFF免疫抑制分子,为进一步探讨其治疗作用奠定了基础。
- 高会广何凤田李蓉芬吉清黄刚胡大强张立龚薇胡颖
- 关键词：肿瘤坏死因子类
- 重组人可溶性B淋巴细胞激活因子的制备及活性分析被引量：1
- 2004年
- 目的 制备具有功能活性的人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactortotheTNFfamily ,BAFF)胞外区 134～ 2 85氨基酸残基段 ,为BAFF的深入研究创造条件。方法 提取人新鲜扁桃体组织总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 134～ 2 85氨基酸残基cDNA ,经序列测定后 ,构建于原核表达载体 pQE 80L并转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达及Ni2 + NTA柱层析纯化目的蛋白 ,行SDS PAGE和Western印迹检测。最后经MTT法检测其增殖活性。结果 RT PCR扩增得到了 4 5 9bp的cDNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF13 4 2 85的cDNA序列一致 ,SDS PAGE及Western印迹证实表达蛋白确实为 6×His BAFF13 4 2 85融合蛋白并存在于包涵体中。活性检测证实其能明显刺激肿瘤细胞的增殖。结论 利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF13 4 2 85,得到的纯化蛋白具有较高的生物学活性 ,为进一步的研究奠定了基础。
- 陈麟凤何凤田李蓉芬钟小林张艳高会广吉清
- 关键词：CDNA克隆原核表达淋巴细胞活化
- B淋巴细胞刺激因子抑制肽及其制备方法
- 本发明公开了一种小肽分子，具有如下氨基酸序列P-M-K-M-R-T-M或Y-E-P-K-I-R-G。同时还公开了其制备方法，该方法以B淋巴细胞刺激因子为靶分子筛选噬菌体肽库，得到与B淋巴细胞刺激因子特异结合小肽并确定其序...
- 何凤田吉清郑英如
- 文献传递
- 细胞因子TNFSF13B的结构与功能及其在相关疾病发生中的作用
- 2004年
- TNFSF13B是于 1999年发现并克隆的一种重要的细胞因子 ,它广泛参与了T、B淋巴细胞的增殖及功能调节。该文介绍TNFSF13B的结构及功能特点、TNFSF13B在相关疾病 (如免疫功能低下、某些自身免疫性疾病及某些肿瘤等 )
- 吉清何凤田
- 关键词：免疫调节自身免疫性疾病
- 包涵体复性的研究进展被引量：43
- 2004年
- 大肠杆菌表达的外源基因产物通常是不可溶的包涵体。包涵体需要经过溶解和复性才能得到有活性的蛋白质。复性是蛋白质从未折叠到折叠形式的过程 ,受到许多因素的影响 ,包括变性剂对包涵体的溶解度、变性剂的去除、一些小分子对复性的帮助等等。
- 吉清何凤田
- 关键词：包涵体蛋白复性大肠杆菌表达变性剂外源基因
- 多肽PⅢ术中与术后腹腔注射抑制胃癌腹膜转移的研究被引量：1
- 2006年
- 目的评价多肽PⅢ术中及术后早期腹腔内应用对胃癌腹膜转移的作用。方法48只裸鼠经完整组织块裸鼠胃壁原位种植,建立类似于临床的胃癌腹膜转移模型。每组16只,随机分为①对照组;②术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组(关腹前立即用60ml、43℃生理盐水溶解多肽PⅢ200μg冲洗腹腔2次);③术后多肽治疗组。术后1周开始治疗,对照组每只裸鼠与第8、10、12、14、16、18、20、22天腹腔各0·2ml生理盐水腹腔注射;②组和③组与对照组相同的时间分别给予多肽PⅢ2mg/kg腹腔注射,移植后第23天各取6只裸鼠脱颈处死,测定原位肿瘤重量,观察腹膜转移情况。其余裸鼠用于生存率试验。结果对照组、术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组和术后多肽治疗组的裸鼠原位肿瘤重量分别为(1·93±0·22)g、(1·81±0·36)g、(1·95±0·45)g,各组间比较,差异无统计学意义;对照组、术后多肽治疗组和术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组的裸鼠腹膜转移的瘤结节数分别为(126·3±9·6)个、(64·2±8·3)个、(9·2±1·3)个;其中大于2mm的裸鼠平均腹膜转移结节数分别为(51·2±3·6)个、(21·7±4·9)个、(1·6±0·2)个,与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0·01)。裸鼠生存试验显示术中腹腔多肽灌洗+术后多肽治疗组裸鼠生存时间明显长于对照组及术后多肽治疗组的裸鼠生存时间。结论多肽PⅢ术中及术后腹腔内用药可明显降低裸鼠胃癌腹膜转移的发生,显著延长了裸鼠的生存期,有望成为临床上治疗胃癌腹膜转移的药物。
- 白飞虎杨力吉清张燕齐刘震雄王治忠阎丽王敬博靳海峰李婷婷
- 关键词：胃肿瘤肿瘤移植肽类腹膜转移
- 从噬菌体构象型7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽被引量：2
- 2004年
- 目的 :从噬菌体构象型 7肽库中筛选BLyS的抑制性短肽。方法 :用重组人BLyS筛选噬菌体构象型 7肽库 ,用间接ELISA、竞争ELISA和细胞增殖活性试验鉴定噬菌体克隆。结果 :经过 3轮亲和筛选 ,噬菌体的回收率增加 ,阳性克隆得到富集。所获两个阳性噬菌体克隆能特异性地抑制BLyS刺激细胞增殖的活性。结论 :获得了噬菌体呈现的能够抑制BLyS的两个短肽。
- 吉清何凤田李蓉芬高会广郑英如钟小林郑汉其
- 关键词：BLYS噬菌体肽库小肽
- B细胞活化因子的纯化和复性参数的优化研究被引量：5
- 2005年
- 目的 获得高纯度和高活性的B细胞活化因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily ,BAFF)。 方法 重组原核表达载体 pQE 80L BAFF112 2 85在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBAFF112 2 85,超声碎菌 ,提取包涵体 ,经Ni2 + NTA亲和层析和SepharcrylS 2 0 0凝胶过滤层析纯化后 ,选择不同氧化还原条件进行复性 ,进而检测其生物学活性。 结果 得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBAFF112 2 85蛋白。结论 优化了BAFF蛋白的纯化和复性的参数 ,所获结果为进一步研究创造了条件。
- 吉清钟小林高会广李蓉芬彭家和何凤田
- 关键词：包涵体纯化复性
- 结肠癌单抗MC5的噬菌体呈现型单链可变区片段的制备被引量：1
- 2002年
- 背景与目的:MC5是一种特异性良好的针对人结肠癌的鼠源性单克隆抗体,而将鼠源性抗体小型化可使其用于在体研究时引起人抗鼠抗体反应的可能性大大降低。本研究的目的是制备MC5的噬菌体呈现型单链可变区片段(ScFv)。方法:从分泌MC5的杂交瘤细胞分离mRNA,RT-PCR分别扩增抗体的重、轻链可变区DNA(VH和VLDNA),两者经linkerDNA连接形成ScFvDNA。将ScFvDNA与噬粒载体pCANTAB5E的连接产物转化于大肠杆菌TG1,经M13KO7辅助噬菌体感染后,获得重组噬菌体抗体ScFv。以高表达MC5结合抗原的细胞株SW480对重组噬菌体抗体ScFv进行两轮筛选后,随机挑取克隆经ELISA筛选呈现MC5ScFv的噬菌体单克隆,经竞争ELISA对阳性克隆结合抗原的能力进行鉴定。结果:VH、VL和ScFvDNA分别约为340bp、320bp和750bp。在随机筛检的25个克隆中得到10个呈现MC5ScFv的噬菌体单克隆,其中结合抗原能力强的克隆有3个。结论:用噬菌体呈现技术成功地制备了单抗MC5的ScFv,为拓展该抗体的应用范围奠定了基础。
- 何凤田李蓉芬张艳吉清陈宝军乔太东樊代明
- 关键词：结肠癌单克隆抗体噬菌体呈现技术
