- 构建COX2基因慢病毒载体对肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响被引量：2
- 2018年
- 目的构建环氧化酶2(COX2)基因慢病毒表达载体并观察其对非小细胞肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法针对COX2基因的不同片段设计3对shRNA的寡核苷酸片段并克隆至慢病毒载体GV248中,构建并筛选最佳抑制效率的靶向COX2基因的慢病毒载体COX2-shRNA。选取对数生长期A549细胞进行慢病毒转染,其中靶向COX2基因的shRNA载体转染A549细胞为shRNA组,以空载体质粒转染作为阴性对照组(NC)及不转染质粒的A549细胞为空白对照组(CON),采用实时荧光定量PCR和Western blotting测定COX2基因和蛋白的表达。分别采用MTT法和流式细胞仪检测干扰COX2表达对A549细胞增殖、凋亡能力的影响。结果成功构建靶向COX2基因的慢病毒载体;稳定转染A549细胞后,COX2基因表达下降,其中以COX2-shRNA1干扰效率最为显著;shRNA组中shRNA1转染的A549细胞COX2 mRNA水平为0.17±0.06,低于NC组的0.81±0.11和CON组的1.09±0.07,差异有统计学意义(P<0.05)。shRNA组细胞增殖活性低于NC组和CON组,shRNA组转染5 d的吸光值为0.976±0.016,低于NC组的1.557±0.015和CON组的1.880±0.034,差异有统计学意义(P<0.05)。shRNA组细胞凋亡率为(6.28±0.31)%,高于NC组的(3.08±0.05)%和CON组的(3.01±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建靶向COX2基因的慢病毒表达载体,干扰COX2表达可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并促进细胞凋亡。
- 刘联斌张相民曾汶周茂华叶桂林叶永强王刚李韶今
- 关键词：环氧化酶2慢病毒RNA干扰
- AMPK过表达慢病毒载体的构建及稳定转染肺癌A549细胞株的建立被引量：2
- 2017年
- 目的通过构建表达载体，建立稳定转染腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）的肺癌A549细胞株，观察过表达AMPK后对A549细胞增殖、侵袭能力的影响。方法扩增AMPK全长序列，双酶切目的基因并插入GV358载体，共转染293T细胞进行慢病毒包装，收集慢病毒上清液后感染A549细胞，建立稳定过表达AMPK的A549细胞株。实时荧光定量PCR（qRT—PCR）和Westernblotting检测AMPK的表达情况，四甲基偶氮唑蓝（MTF）及Transwell法检测A549细胞增殖、侵袭能力的变化。结果经限制内切酶鉴定及测序分析，成功构建了GV358．AMPK慢病毒表达载体质粒。与转染空载体相比，转染GV358慢病毒载体的A549细胞AMPK蛋白表达升高5．87倍（P=0．002），mRNA水平升高16．12倍（P〈0．001）；A549细胞过表达AMPK后，第4-5天细胞增殖活性显著降低（第4天：0．53±0．03：0．64±0．05，P=0．021；第5天：0．58±0．04：0．80±0．07，P=0．002），侵袭能力显著减弱[（1．6±0．5）×10^5：（3．4±0．3）×10^5，P=0．004]。结论成功构建了AMPK慢病毒表达载体和稳定表达A549细胞株，过表达AMPK可抑制A549细胞增殖及侵袭能力。
- 张相民张相民曾汶周茂华叶桂林周茂华王刚李韶今
- 关键词：慢病毒属腺苷酸活化蛋白激酶
- AMPK、NF-κB、COX-2及PGE2在非小细胞肺癌中的表达被引量：12
- 2017年
- 目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、核因子κB(NF-κB)、环氧合酶2(COX-2)及前列腺素E2(PGE2)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其关系。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法检测NSCLC和正常肺组织标本中可以直接反映AMPK激活状态的乙酰辅酶A羧化酶磷酸化后的产物(P-ACC)、NF-κB、COX-2的表达,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测NSCLC标本及血液、正常肺组织标本及血液中AMPK、COX-2及PGE2受体的表达。结果免疫组织化学法检测发现,P-ACC在NSCLC中低表达,NF-κB和COX-2在NSCLC中高表达,其阳性率分别为33.9%、75.8%和66.1%,且与正常肺组织中的表达差异有统计学意义;qRT-PCR和Western blot检测发现,在NSCLC标本及血液中,AMPK mRNA表达降低,COX-2和PGE2受体mRNA表达升高。结论在NSCLC中,AMPK低表达,NF-κB、COX-2及PGE2高表达,其相互作用可能在NSCLC的增殖、凋亡耐受、侵袭及转移过程中占据重要位置,其表达情况为临床治疗NSCLC提供新的思路。
- 李韶今张相民刘联斌曾汶李荣梁婷王冬梅周茂华
- 关键词：非小细胞肺癌核因子ΚB环氧合酶2
