胡楠
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：复旦大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于HPLC的标准加入法同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸被引量：5
- 2016年
- 目的 建立一种同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸浓度的高效液相色谱（HPLC）法，用于评价小鼠给予IDO抑制剂后体内IDO活性。方法 血清用6%高氯酸沉淀蛋白法处理,离心后取上清进样，采用标准加入法定量。选用ThermoHypersil GOLD色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）分离，流动相为乙腈-醋酸钠（15 mmol/L，冰醋酸调pH至 4.0），流速1.1 mL/min，柱温30 ℃，犬尿氨酸和色氨酸的紫外检测波长分别为360 nm和280 nm。结果 犬尿氨酸保留时间为6.10 min，线性范围为0.25～10 μmol/L，检测限为0.09 μmol/L；色氨酸保留时间10.12 min，线性范围为25～1 000 μmol/L，检测限为0.25 μmol/L。精密度、回收率及稳定性等均符合生物样品定量分析方法验证指导原则的要求，并成功应用于62只小鼠血清犬尿氨酸和色氨酸浓度的测定。结论 建立了一种简单、快速、准确的HPLC分析方法，采用标准加入定量方式，可同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸血药浓度，并成功应用于实际生物样本的测定。
- 陈月康宏艳胡楠杨青郁韵秋
- 关键词：犬尿氨酸色氨酸HPLC血清标准加入法小鼠
- 人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证被引量：1
- 2017年
- 目的构建人源有机阴离子转运多肽1B1(human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的转运特性。方法采用基因工程手段获得hOATP1B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Realtime PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运。结果经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运最佳;在0~500μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性。1-MT在该细胞模型上无明显转运。结论成功构建人源MDCKOATP1B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究。
- 胡楠马国杨青
- 关键词：多药耐药相关蛋白2普伐他汀1-甲基色氨酸
