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任雪
作品数:
1
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供职机构:
中国医学科学院基础医学研究所
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
沈珝琲
中国医学科学院基础医学研究所
程谟斌
中国医学科学院基础医学研究所
张业
中国医学科学院基础医学研究所
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中国医学科学...
作者
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张业
1篇
程谟斌
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沈珝琲
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任雪
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2014
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MCF10A-Er-Src诱导转化模型的构建
2014年
目的构建能够被他莫西芬(tamoxifen,TAM)激活的MCF10A-Er-Src诱导转化模型。方法利用PCR扩增法分别获得雌激素受体配体结合结构域序列(hbER)和Src序列,并将其分别插入到改造后的反转录病毒表达载体pMSCV-FLAG-HA中,构建ER-Src融合蛋白表达质粒。包装pMSCV-ER-Src-FLAG-HA重组反转录病毒,感染MCF10A,利用基因组PCR和Western blot法筛选能够稳定表达外源融合蛋白ER-Src的细胞系。利用免疫沉淀(IP)和Western blot法验证TAM对稳转细胞系的激活,并观察细胞形态变化。结果构建的MCF10A-Er-Src细胞系能够稳定表达ER-Src融合蛋白。TAM能诱使Src第416位酪氨酸发生磷酸化,从而激活Src,使MCF10A-Er-Src发生转化。结论成功获得能够被TAM诱导激活的MCF10A-Er-Src转化模型。
任雪
程谟斌
张业
沈珝琲
关键词:
他莫西芬
细胞转化
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