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弓形虫ROP19蛋白生物信息学分析及真核表达载体的构建被引量：1: 2017年; 目的构建刚地弓形虫PRU株ROP19蛋白的真核表达载体并检测其表达。方法利用生物信息学方法分析弓形虫ROP19蛋白的理化性质并比较弓形虫蛋白ROP19和SAG1的B细胞表位及T细胞表位,采用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-ROP19(pROP19),经PCR扩增、酶切及测序鉴定正确后,体外转染HEK293T细胞,置于倒置荧光显微镜下观察荧光的表达情况。细胞转染质粒48 h后收集裂解细胞,提取蛋白后用Western blotting检测重组真核表达质粒pROP19在体外细胞中的表达。结果生物信息学分析显示ROP19主要位于膜上,具备比弓形虫SAG1更优异的抗原表位;RT-PCR结果表明重组真核载体pROP19成功构建,Western blotting结果显示ROP19蛋白可以被抗STAG小鼠血清识别。结论成功获得重组真核表达质粒pROP19,并能在真核细胞内表达。; 周剑赵晗婷吕刚王琳李启航朱美艳王志林何深一; 关键词：刚地弓形虫真核表达生物信息学

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王志林