高慧
- 作品数：20 被引量：86H指数：6
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技厅新苗人才计划浙江省公益性技术应用研究计划项目浙江省中医药重点研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- 内质网过度应激介导低氧高二氧化碳肺动脉高压大鼠的脑损伤被引量：7
- 2017年
- 本文旨在研究过度内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)在低O_2高CO_2性肺动脉高压(hypoxia hypercapnia induced pulmonary hypertension,HHPH)大鼠脑损伤中的作用。雄性SD大鼠40只,采用随机数字表法分为4组(n=10):对照组、低O_2高CO_2组、ERS通路激动剂衣霉素(tunicamycin,TM)组、ERS通路抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyric acid,4-PBA)组。对照组置于常氧环境中饲养,其余三组置于低O_2高CO_2氧舱中(8.5%~11% O_2、5%~6% CO_2)饲养4周。TM组和4-PBA组大鼠分别腹腔注射TM(0.08 mg/kg,一周两次)和4-PBA(每天80 mg/kg),低O_2高CO_2组腹腔注射等体积的生理盐水。4周后对大鼠进行手术,记录肺动脉平均压后进行心脏灌流,结束后开颅并快速取脑组织检测脑含水量,光镜下观察脑组织形态学变化,TUNEL法检测脑细胞凋亡指数,分光光度计法检测脑组织中Caspase-3酶活性,RT-PCR和Western blot检测磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase JNK,p-JNK)、Caspase-12、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein,CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 kDa,GRP78)mRNA及蛋白表达水平。结果显示:与对照组相比,其余3组肺动脉平均压、脑含水量、细胞凋亡指数、Caspase-3酶活性、p-JNK、Caspase-12、CHOP、GRP78蛋白及mRNA均有升高(P<0.05),组织形态学结构亦有明显的损伤性变化;与低O_2高CO_2组比较,TM组的肺动脉平均压、脑含水量、细胞凋亡指数、Caspase-3酶活性、p-JNK、Caspase-12、CHOP和GRP78蛋白及mRNA均有增高(P<0.05),脑组织结构损伤性的变化亦有明显加重,而4-PBA组以上变化均有减轻(P<0.05)。上述结果提示,过度ERS可能参与了HHPH引起的脑组织损伤,抑制ERS有望减轻脑损伤。
- 项冰倩高慧陈锡文戴雍月王万铁
- 关键词：肺动脉高压内质网应激
- 右美托咪定对缺氧/复氧诱导的A549细胞凋亡及caspase-12表达的影响被引量：5
- 2017年
- 本研究旨在探讨右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的A549细胞凋亡以及caspase-12表达的影响。取对数生长期的A549细胞,随机分为对照组、DEX组、H/R组和DEX+H/R组。对照组和DEX组细胞常氧培养30 h,H/R组和DEX+H/R组细胞缺氧6 h、复氧24 h建立H/R模型,其中DEX组和DEX+H/R组给予1 nmol/L DEX干预。造模结束后用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;原位末端标记(TUNEL)法检测A549细胞的凋亡指数(apoptotic index,AI);CCK-8法检测A549细胞活力;caspase-3活性检测试剂盒检测各组caspase-3酶的活性;Western blot和RT-PCR分别检测A549细胞GRP78、caspase-12蛋白和mRNA的表达水平。结果显示,与对照组相比较,H/R组细胞发生融合现象,形态呈多边型改变,细胞活力明显降低(P<0.01),凋亡细胞数增加,AI值升高(P<0.01);caspase-3酶活性上升(P<0.01);GRP78、caspase-12蛋白和m RNA表达显著上升(P<0.01)。经DEX干预后,与H/R组相比较,DEX+H/R组细胞损伤减轻,细胞活力上调(P<0.01);凋亡细胞数减少,AI值显著下降(P<0.01),caspase-3酶活性显著下降(P<0.01);caspase-12蛋白和mRNA表达下降(P<0.01)。本研究结果表明,DEX对H/R损伤时的A549细胞具有一定的保护作用,其机制可能与其下调caspase-12的表达、抑制细胞凋亡有关。
- 罗梓垠项冰倩高慧邱晓晓郝卯林王万铁
- 关键词：A549细胞细胞凋亡CASPASE-12
- BMP-7/Smads通路参与EndoMT在大鼠HHPH中的作用被引量：2
- 2020年
- 目的:探讨骨形态发生蛋白(BMP)-7/Smads通路参与的内皮-间充质转化(EndoMT)在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压(HHPH)中的作用。方法:将大鼠肺动脉内皮细胞(RPAECs)分为常氧对照(Con)组、低氧高二氧化碳(HH)组、BMP受体激动剂rhBMP-7组、BMP受体抑制剂DMH-1组和溶剂DMSO组。各组给予相应的药物后,Con组置于常氧培养箱中培养,其余4组置于低氧高二氧化碳培养箱中培养。采用免疫荧光标记法观察细胞CD31和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平;RT-PCR和Western blot法分别检测各组细胞α-SMA、CD31和Smad1/5/8的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移水平。结果:与Con组相比,HH组α-SMA的mRNA和蛋白表达水平升高,而CD31的mRNA和蛋白表达水平、Smad1/5/8的mRNA和p-Smad1/5/8的蛋白表达水平降低,同时细胞活力降低而迁移增多(P<0.05)。与HH组相比,rhBMP-7组α-SMA的mRNA和蛋白表达水平降低,而CD31的mRNA和蛋白表达水平、Smad1/5/8的mRNA和p-Smad1/5/8的蛋白表达水平升高,同时细胞活力升高而迁移减少(P<0.05)。与rhBMP-7组相比,DMH-1组α-SMA的mRNA和蛋白表达水平升高,而CD31的mRNA和蛋白表达水平及Smad1/5/8的mRNA和p-Smad1/5/8的蛋白表达水平降低,同时细胞活力降低而迁移增多(P<0.05)。结论:低氧高二氧化碳可促进RPAECs发生EndoMT,从而促进HHPH的发展,其机制可能与抑制BMP-7/Smads通路有关。
- 张晶晶武垣伶黄丹娜高慧楼国强周卓琳Lingfang SHI王万铁
- 关键词：肺动脉内皮细胞
- 右美托咪定通过抑制内质网过度应激减轻肺缺血-再灌注小鼠脑损伤被引量：9
- 2017年
- 目的评价右美托咪定（DEX）通过抑制过度内质网应激反应（ERS）减轻小鼠肺缺血-再灌注（I/R）诱发脑损伤的影响。 方法实验于温州医科大学缺血-再灌注损伤研究所进行。雄性健康SPF级C57BL/6J小鼠50只，体质量20~24 g，8~10周龄，按随机数字表法分为5组（n=10）：假手术组（Sham组）、肺缺血-再灌注损伤组（I/R组）、阿替美唑组（atipamezole,Atip组）、右美托咪定（dexmedetomidine,DEX组）、右美托咪定＋阿替美唑（DA组）。采用小鼠在体左侧肺门夹闭30 min再灌注180 min方法制备肺缺血-再灌注损伤（I/R）模型。Atip组、DEX组、DA组分别在肺门阻断前30 min腹腔注射阿替美唑（250 μg/kg）、右美托咪定（20 μg/kg）、右美托咪定20 μg/kg＋阿替美唑250 μg/kg，其余处理同I/R组。再灌注结束后取脑组织，光镜下观察脑细胞的形态学改变，检测脑组织Caspase3酶活性，TUNEL法检测脑细胞凋亡指数，Western blot、RT-PCR检测脑组织p-JNK、Caspase12、CHOP、GRP78蛋白及mRNA水平。采用SPSS 19.0软件行计量资料分析，多组间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。 结果与Sham比较，其余组光镜下脑组织有明显损伤，Caspase3酶活性、脑细胞凋亡指数、p-JNK、Caspase12、CHOP、GRP78蛋白及mRNA水平均明显升高（P＜0.01）；与I/R、Atip组和DA组比较，DEX组光镜下脑细胞损伤减轻，Caspase3酶活性、脑细胞凋亡指数、p-JNK、Caspase12、CHOP表达均有明显下降，GRP78表达明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）;I/R、Atip组和DA组两两相互比较，光镜下脑组织损伤程度相似，Caspase3酶活性、脑细胞凋亡指数、p-JNK、Caspase12、CHOP蛋白及mRNA水平差异无统计学意义（P＞0.05），GRP78水平DA组明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论右美托咪定预先给药可减轻小鼠肺缺血-再灌注诱发的脑损伤，其机制可能�
- 项冰倩颜王鑫高慧楼国强郝卯林戴雍月王万铁
- 关键词：缺血-再灌注损伤小鼠内质网应激CASPASE3
- 维甲酸X受体对缺氧/复氧诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬的调控作用被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨维甲酸X受体(RXR)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)自噬的调控作用及分子机制。方法:常氧培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,将生长至对数生长期的细胞随机分为5组:(1)对照组:细胞于正常条件下培养30 h;(2)缺氧/复氧组:细胞缺氧6 h,复氧24 h;(3)溶剂DMSO组:细胞于造模前1.5 h用浓度低于0.1%的DMSO进行预处理,其余处理同H/R组;(4)9-顺式维甲酸(9-RA)组:细胞于缺氧前1 h用9-RA(100 nmol/L)预处理;(5)HX531组:细胞先用9-RA处理0.5 h,然后用HX531(2.5μmol/L)处理1 h。采用CCK-8法检测各组细胞活力;免疫荧光染色法观察各组细胞RXRα表达变化;用透射电镜观察细胞内部超微结构的改变;RT-PCR检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、自噬相关蛋白beclin 1及LC3、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和P62 mRNA水平的表达。Western blot检测p-AMPK、beclin 1、LC3-Ⅱ、p-mTOR和P62蛋白的表达。结果:与对照组相比,其余4组细胞的细胞活力显著降低,AMPK、beclin 1和LC3 mRNA表达显著增多,p-AMPK、beclin 1和LC3-Ⅱ蛋白表达显著增多,而mTOR和P62 mRNA表达降低,p-mTOR和P62蛋白表达降低(P<0.05);与缺氧/复氧和HX531组相比,9-RA组细胞损伤减轻,自噬水平也显著降低(P<0.05)。结论:(1)缺氧/复氧可诱导AECⅡ自噬水平升高;(2)激活RXR可一定程度上减轻缺氧/复氧引起的AECⅡ损伤,其机制可能与抑制细胞自噬有关。
- 高慧高慧楼国强楼国强张晶晶黄丹娜WU Yi-ming王万铁
- 关键词：维甲酸X受体细胞自噬
- TGF-β1/Smads通路参与内皮–间质转分化在低氧高二氧化碳性肺动脉高压中的调控作用
- 2019年
- 该文主要探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads通路与低氧高二氧化碳性肺动脉高压及内皮–间质转分化(endothelial-mesenchymal transition,EndoMT)的关系。采用CD31和α-SMA免疫荧光双标法鉴定大鼠肺动脉内皮细胞;CCK-8法测细胞活力;Transwell小室法检测细胞迁移;逆转录-PCR和Western blot分别检测细胞CD31、α-SMA、TGF-β1、Smad2/3 mRNA和蛋白质的表达情况。结果显示,低氧高二氧化碳环境下,细胞α-SMA、TGF-β1和Smad2/3的m RNA水平上调,α-SMA、TGF-β1和p-Smad2/3蛋白质表达水平上调,而CD31 mRNA和蛋白质表达水平下调,细胞活力降低而迁移增多;使用rhTGF-β1可促进低氧高二氧化碳环境下的上述作用;而使用SB-431542则逆转低氧高二氧化碳环境下rhTGF-β1的作用。结果提示,低氧高二氧化碳能促进RPAECs发生EndoMT;抑制TGF-β1/Smads通路能抑制EndoMT,缓解低氧高二氧化碳性肺动脉高压。
- 张晶晶黄丹娜武垣伶高慧楼国强周卓琳施凌方王万铁
- 关键词：低氧高二氧化碳肺动脉内皮细胞
- 近红外远程响应型纳米颗粒用于膀胱癌的靶向送药和热化疗研究
- 背景: 全球范围内，膀胱泌尿上皮肿瘤位列男性常见实体瘤的第四位，在女性位列第七位，每年新诊断的膀胱癌患者超过350000例。近年来，我国膀胱癌发病率也在逐年上升。 在膀胱癌的治疗中，化疗为重要的辅助治疗方式。蒽环类药...
- 高慧
- 关键词：膀胱癌化学疗法肿瘤靶向性
- 文献传递
- RXR介导的自噬通路在大鼠肺缺血/再灌注损伤中的调控作用被引量：7
- 2018年
- 目的:探讨维甲酸X受体(RXR)介导的细胞自噬通路对大鼠肺缺血/再灌注(I/R)损伤的作用及机制。方法:以雄性SPF级SD大鼠为研究对象,随机分成7组(n=10):正常对照(C)组、假手术(S)组、S+RXR激动剂9-顺式维甲酸(SRA)组、S+RXR抑制剂HX531(SH)组、I/R组、I/R+9-顺式维甲酸(RA)组和I/R+HX531(HX531)组。采用大鼠在体左侧肺门夹闭30 min、再灌注180 min的方法制备肺缺血/再灌注模型。C组不做任何处理;S组只开胸,不夹闭肺门,机械通气210 min;I/R组行左侧肺门夹闭30 min,再恢复灌注180 min;SRA组、SH组、RA组与HX531组在术前90 min腹腔注射9-顺式维甲酸(5 mg/kg);SH组和HX531组在术前30 min腹腔注射HX531(5 mg/kg)。再灌注结束后取左肺组织,行肺组织损伤评估(IQA);采用HE染色法观察肺组织病理学形态;免疫荧光标记法观察各组肺组织RXRα的表达情况;采用RT-PCR和Western blot分别检测各组大鼠自噬相关分子LC3、beclin 1和m TOR的mRNA和蛋白水平。结果:与C组、S组、SRA组和SH组相比,I/R组、RA组和HX531组肺IQA、LC3和beclin 1 mRNA及LC3-II和beclin 1蛋白均有明显升高,m TOR的mRNA及p-mTOR的蛋白水平明显降低,组织形态学结构亦有损伤性变化;与I/R组相比,RA组肺IQA、LC3和beclin 1 mRNA水平及LC3-II和beclin1蛋白水平均有明显下降,RXRα和m TOR的mRNA及p-mTOR的蛋白水平明显增高,肺组织结构损伤性的变化亦有明显减轻,而HX531组与I/R组比较无显著差异;与RA组相比,HX531组的肺IQA、LC3和beclin 1 mRNA水平及LC3-II和beclin 1蛋白水平均有明显升高,RXRα和m TOR的mRNA及p-mTOR蛋白水平明显降低,肺组织形态学结构的损伤性变化加重。结论:激活RXR可有效减轻大鼠肺缺血/再灌注损伤,对肺组织有一定的保护作用,具体机制可能与其抑制细胞自噬通路有关。
- 项冰倩高慧CHEN Jun-hao楼国强周卓琳武垣伶张晶晶许益笑王万铁
- 关键词：维甲酸X受体自噬
- 右美托咪定对肺缺血再灌注小鼠的心肌保护作用：与内质网应激的关系被引量：9
- 2017年
- 目的 评价右美托咪定对肺缺血再灌注小鼠的心肌保护作用及其与内质网应激的关系.方法 SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠40只,体重20 ～ 24 g,8～10周龄,采用随机数字表法,将其分为4组（n=10）：假手术组（Sham组）、肺缺血再灌注组（I/R组）、右美托咪定组（Dex组）和右美托咪定＋α2肾上腺素能受体拮抗剂阿替美唑组（DA组）.采用夹闭左侧肺门30 min再灌注180 min的方法制备肺缺血再灌注损伤模型.Sham组仅行开胸处理,不夹闭肺门,机械通气210 min;Dex组、DA组分别于造模前30 min腹腔注射右美托咪定20 μg/kg和右美托咪定20 μg/kg＋阿替美唑250μg/kg.于再灌注180 min时眼眶取血,检测血清CK-MB和LDH活性;处死,取心肌组织,采用TUNEL法确定心肌细胞凋亡指数;采用Western blot法测定磷酸化c-jun氨基末端磷酸化激酶（pJNK）、caspase-12、CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）蛋白表达的水平;采用RT-PCR法测定JNK、caspase-12、CHOP、GRP78的mRNA表达水平.结果 与Sham组比较,I/R组、Dex组和DA组血清CK-MB、LDH活性及心肌细胞凋亡指数升高,p-JNK和JNK mRNA表达上调,caspase-12、CHOP、GRP78及其mRNA表达上调（P＜0.01）;与I/R组比较,Dex组血清CK-MB、LDH活性及心肌细胞凋亡指数降低,p-JNK和JNK mRNA表达下调,caspase-12、CHOP及其mR-NA表达下调,GRP78蛋白及其mRNA表达上调,DA组GRP78及其mRNA表达上调（P＜0.01）,其他各指标差异无统计学意义（P＞0.05）;与Dex组比较,DA组血清CK-MB、LDH活性及心肌细胞凋亡指数升高,p-JNK和JNK mRNA表达上调,caspase-12、CHOP及其mRNA表达上调（P＜0.01）,GRP78及其mRNA表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 右美托咪定可减轻肺缺血再灌注诱发的小鼠心肌损伤,机制可能与激动α2肾上腺素能受体,抑制心肌内质网应激有关.
- 项冰倩罗梓垠高慧戴雍月王万铁
- 关键词：右美托咪啶再灌注损伤心肌内质网应激
- 维甲酸X受体介导的氧化应激通路在大鼠肺缺血/再灌注损伤中的调控作用被引量：4
- 2019年
- 本研究旨在探讨维甲酸X受体(retinoid X receptor, RXR)介导的氧化应激通路对大鼠肺缺血/再灌注损伤(pulmonary ischemia/reperfusion injury, PIRI)的干预作用及机制。选取雄性Sprague Dawley (SD)大鼠77只,随机分为7组(n=11):正常对照组(Control组)、假手术组(Sham组)、假手术+9-顺式维甲酸(9-cis retinoid acid,9-cRA,RXR激动剂)组(Sham+9-cRA组)、假手术+HX531 (RXR抑制剂)组(Sham+HX531组)、缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)组、I/R+9-cRA组、I/R+HX531组。采用大鼠在体左侧肺门夹闭30 min再灌注180 min方法制备肺缺血/再灌注(I/R)模型。I/R+9-cRA组和I/R+HX531组大鼠于开胸前腹腔注射9-cRA和HX531。再灌注结束后取左肺组织,评估肺组织损伤,用试剂盒检测肺组织氧化应激等相关指标,用HE染色法和透射电镜分别观察肺组织形态和肺泡上皮细胞超微结构,用免疫荧光标记法观察肺组织RXRα的表达情况,用Western blot检测核因子E2相关因子(nuclear factor E2-related factor 2, Nrf2)蛋白表达情况。结果显示,与Sham组相比,I/R组肺组织出现明显损伤,SOD活性下降,MDA含量和MPO活性升高,Nrf2蛋白表达水平显著降低;与I/R组相比,I/R+9-cRA组肺组织损伤减轻,SOD活性升高,MDA含量和MPO活性下降,RXR和Nrf2蛋白表达水平明显上调。9-cRA的上述改善作用可被HX531逆转。上述结果提示,激动RXR可有效减轻大鼠肺I/R损伤,对肺组织有一定的保护作用,具体机制可能与其激活Nrf2信号途径,增强抗氧化水平,减轻氧化应激反应有关。
- 项冰倩颜王鑫楼国强高慧周卓琳吴益明王万铁
- 关键词：维甲酸X受体氧化应激
