王亮 作品数:16 被引量:27 H指数:4 供职机构: 新乡医学院第一附属医院 更多>> 发文基金: 河南省医学科技攻关计划项目 河南省自然科学基金 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
敲除NOR1基因对人肝癌裸鼠移植瘤的影响及作用机制 被引量:1 2020年 目的 探究敲除NOR1基因后对人肝癌裸鼠移植瘤生长、存活率及器官损伤的影响。 方法 SPF级雄性BALB/C裸鼠30 只随机分为Control组(n=10)、Scramble组(n=10)、siNOR1组(n=10),构建阴性对照质粒 (Scramble)和 siNOR1质粒转染至HepG2细胞并接种至裸鼠构建移植瘤裸鼠模型。连续30 d每5 d检测裸鼠移植瘤组织体积;检测移植瘤重量;免疫组化检测Ki-67、Caspase-3、Notch、NOR1表达情况;Western Blot检测Survivin、Notch1、NICD、Hes1、Hey1蛋白表达量情况,HE染色观察肝、肾、肺、脑病理损伤程度。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验;生存分析采用Kaplan-Meier法,生存率的比较采用log-rank检验法。结果 从建模第20天开始,与Control组相比,siNOR1组第20、25、30 天移植瘤体积显著减小[(418.71±78.24)mm3 vs (149.6.16±60.05)mm3、(864.22±125.66)mm3 vs (239.83±100.51)mm3、(1468.45±199.78) mm3 vs (446.54±147.09) mm3,P值均<0.05];第30天时取出移植瘤,与Control组相比,siNOR1组移植瘤质量显著减小[(0.45±0.07)g vs (0.12±0.04)g,P<0.05];与Control组相比,siNOR1组移植瘤组织中Ki-67、Notch、NOR1阳性表达率显著降低[Ki-67:(48.98±9.75)% vs (11.51±5.09)%, Notch: (62.51±9.26)% vs (18.75±4.61)%,NOR1:(76.33±8.31)% vs (16.57±3.76)%, P值均<0.05],Caspase-3阳性表达率显著升高[(6.39±4.67)% vs (38.03±9.28)%, P<0.05];siNOR1组模型裸鼠30 d内生存率显著高于Control组[(77.66±6.75)% vs (25.32±4.63)%,χ^2=6.897,P<0.05];Western Blot检测结果显示,与Control组相比,siNOR1组Survivin、Notch1、NICD、Hes1、Hey1蛋白表达水平均显著降低(Survivin: 0.34±0.06 vs 0.02±0.01;Notch1:0.16±0.03 vs 0.03±0.01;NICD:0.26±0.05 vs 0.04±0.02;Hes1:0.35±0.04 vs 0.06±0.02;Hey: 0.29±0.06 vs 0.05±0.02,P值均<0.05),且siNOR1组裸鼠各组织器官损伤情况均得到有效缓解。结论 敲除NOR1基因抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,提高模型裸鼠生存率,并缓解模型裸 游焜 王大军 王亮 王建国关键词:肝肿瘤 骨髓增生异常综合征合并门静脉海绵样变巨脾切除一例 王建国 李泽信 徐红伟 王迎 王亮长链非编码RNA胃癌相关转录本3在肝癌组织的表达及其对肝癌HepG2细胞生物学特性的影响 被引量:4 2019年 目的探讨长链非编码RNA胃癌相关转录本3(lncRNA GACAT3)在肝癌组织的表达和对肝癌细胞HepG2增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测新乡医学院第一附属医院收治并手术治疗的73例肝癌患者的癌组织、癌旁组织,PLC/PRF/5、Hep3B、HepG2肝癌细胞,以及正常肝细胞THLE-3中lncRNA GACAT3表达水平;阴性对照小干扰RNA(siRNA)和lncRNA GACAT3 siRNA转染HepG2肝癌细胞,Real-time PCR检测转染48 h后细胞lncRNA GACAT3表达,噻唑蓝(MTT)检测转染24、48、72 h各组细胞增殖能力,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白表达.应用SPSS 21.0软件进行统计,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,两组数据采用配对t检验或独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组数据两组间比较采用LSD-t检验.结果肝癌组织lncRNA GACAT3表达水平(3.10±1.93)显著高于癌旁组织(1.02±0.59,t=8.086,P<0.01);肝癌细胞PLC/PRF/5(1.92±0.21,t=7.074,P<0.01)、Hep3B(2.42±0.25,t=9.327,P<0.01)和HepG2(2.96±0.31,t=10.582,P<0.01)中lncRNA GACAT3表达水平均显著高于正常肝细胞(0.97±0.10).沉默GACAT3组细胞lncRNAGACAT3表达(0.16±0.02)显著低于沉默对照组(1.03±0.11,t=13.478,P<0.01),48 h和72 h细胞增殖能力显著降低(P<0.01),划痕愈合率、细胞迁移侵袭能力显著降低(P<0.01).细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin(0.15±0.02)及其下游蛋白骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)(0.22±0.02)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)(0.21±0.02)表达较沉默对照组(0.81±0.08,t=13.863;0.65±0.07,t=9.731;0.78±0.08,t=10.230;P均<0.01)显著降低,p-β-catenin蛋白表达(0.75±0.08)显著高于沉默对照组(0.27±0.03,t=11.972,P<0.01).结论lncRNA GACAT3在肝癌中高表达,沉默lncRNA GACAT3能够抑制肝癌细胞增殖迁移侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信� 徐红伟 罗雨田 王大军 王亮 王建国关键词:肝癌 三维适形放疗与手术分别联合TACE治疗PHC对患者血清肿瘤标志物水平的影响 被引量:5 2021年 目的探讨三维适形放射治疗、外科手术分别联合肝动脉栓塞化疗(TACE)治疗原发性肝癌(PHC)对患者血清肿瘤标志物水平的影响。方法 2016年4月—2018年3月新乡医学院第一附属医院收治的98例PHC患者临床资料,根据使用治疗方法分为研究组(三维适形放射治疗联合TACE治疗,n=51)与对照组(外科手术联合TACE治疗,n=47)。观察治疗前与治疗后1个月两组患者血清肿瘤标志物[甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白19可溶性片段(CYFRA21-1)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)],比较治疗后1年及治疗后2年两组患者生存率及复发率,并分析治疗后1个月内两组患者不良事件发生情况差异。结果治疗后2个月,两组患者血清AFP、CYFRA21-1及AFU水平均较治疗前显著降低,且研究组明显低于对照组(P<0.05);治疗后1年及治疗后2年,研究组患者生存率(96.08%,88.24%)均明显高于对照组(80.85%,68.09%),差异有统计学意义(P<0.05),研究组患者复发率均明显低于对照组(P<0.05);治疗后1个月内,两组患者各项化疗不良反应、急性放射损伤及术后并发症发生率比较均差异无统计学意义(P>0.05),但研究组患者不良事件总发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论三维适形放射治疗联合TACE治疗可有效治疗PHC,提高患者生存率、减少复发,且安全性良好。 游焜 王亮 蔡日 王建国关键词:三维适形放射治疗 肝动脉栓塞化疗 肿瘤标志物 环状RNA_101237调控肝癌细胞进展的分子机制 被引量:1 2023年 目的探讨环状RNA(circRNA,Circ)_101237调控肝癌细胞进展的分子机制。方法将新乡医学院第一附属医院2019年7月至2021年7月行手术切除的肝癌组织和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和肝癌组织Circ_101237表达水平。采用sh-Con和sh-Circ_101237慢病毒感染人肝癌细胞系MHCC97H,建立sh-Con组和sh-Circ_101237组细胞系,细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分析Circ_101237对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。双荧光素酶报告实验分析Circ_101237的靶基因。组间数据比较采用t检验。结果癌旁组织中Circ_101237表达水平(1.01±0.18)明显低于肝癌组织Circ_101237表达水平(2.09±0.26),差异有统计学意义(t=30.560,P<0.05)。sh-Con组细胞吸光度值(A)、细胞克隆形成数量、划痕愈合率和侵袭数量[(1.97±0.09),(164.67±14.40)个,(62.50±5.51)%,(130.83±25.18)个]明显高于sh-Circ_101237组细胞A值\细胞克隆形成数量、划痕愈合率和侵袭数量[(1.33±0.18),(111.33±9.07)个;(28.63±6.84)%,(92.33±14.05)个],差异有统计学意义(t=7.782、7.675、9.444、3.270,P<0.05)。Circ_101237与miR-490-3p存在连续互补结合位点。sh-Con组细胞miR-490-3p表达水平(0.99±0.14)明显低于sh-Circ_101237组细胞miR-490-3p表达水平(2.17±0.24),差异有统计学意义(t=10.280,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞A值(1.01±0.13)明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组细胞A值(1.60±0.09),差异有统计学意义(t=9.143,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞划痕愈合率[(27.41±5.15)%]明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组划痕愈合率[(49.19±7.81)%],差异有统计学意义(t=5.703,P<0.05)。miR-NC+sh-Circ_101237组细胞侵袭数量[(90.83±9.87)个]明显低于miR-490-3p抑制剂+sh-Circ_101237组细胞侵袭数量[(122.33±11.09)个],差异有统计学意义(t=5.197,P<0.05)。结论Circ_101237在肝癌组织中呈高表达,通过miR-490-3p调节� 王迎 王亮 徐红伟 李泽信关键词:肝癌 微小RNA 骨髓增生异常综合征合并门静脉海绵样变巨脾切除一例 本例患者最终诊断为门静脉海绵样变性合并骨髓增生异常综合征,但两种疾病之间是什么关系尚不清楚,骨髓增生异常综合症是病因还是伴发疾病或是危险因素,仍需进一步探讨。骨髓增生异常综合征合并脾大患者行脾切至今仍有争议。因此,临床上... 王建国 李泽信 徐红伟 王迎 王亮关键词:骨髓增生异常综合征 门静脉海绵样变性 病理诊断 脾切除手术 肝细胞癌患者血清外泌体mRNA表达谱及临床意义分析 被引量:5 2020年 背景与目的:外泌体是包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡,其中肿瘤细胞分泌的外泌体中的mRNA携带了大量肿瘤细胞遗传信息,因此对外泌体中特异性mRNA的分析,有望找到肿瘤诊断的新型分子标志物和治疗靶点。本研究通过高通量筛选与生物信息学方法探讨肝细胞癌(HCC)患者血清外泌体mRNA的表达特征及其潜在功能。方法:采集3例HCC患者及3例正常人的静脉血,用外泌体提取试剂盒提取血清外泌体,用Magen试剂盒提取外泌体RNA,对血清外泌体mRNA进行纯化、行反转录形成cDNA、PCR扩增、测序,最后将对所得数据质量进行评价后与参考数据进行比对,分析得到差异表达外泌体mRNA,并采用GO和KEGG通路富集分析对差异基因进行功能与通路注释。结果:与正常人比较,HCC患者有397个外泌体mRNA表达上调,192个外泌体mRNA表达下调;其中,NRGN、PF4、RGS18等17个基因表达明显上调,CXCL8、MORF4L2、SYCP1等14个基因显明显下调。GO富集分析显示,表达上调的外泌体mRNA的靶基因与蛋白质结合、蛋白质异二聚化活性、免疫系统过程的调节、胞外囊泡、细胞外细胞器、应激反应等有关,表达下调的外泌体mRNA的靶基因与嗅觉受体活性、细胞因子活性、CXCR趋化因子受体结合、中间丝、中间丝状细胞骨架等有关;KEGG通路分析显示,在上调的外泌体mRNA中,30条通路被显著富集,在下调的外泌体mRNA中9条通路被显著富集,其中,在上调的外泌体mRNA中,血小板激活、Rap 1信号通路、吞噬体、病毒致癌、肌动蛋白细胞骨架的调节与抗原处理和呈递等是最丰富和最有意义的通路;在下调的外泌体mRNA中,基础转录因子和细胞因子-细胞因子受体相互作用分别是最丰富和最有意义的通路。结论:HCC患者与正常人的血清外泌体mRNA表达特征存在较大差异,其与HCC发生、发展、转移可能密切相关,这为寻找新的诊断标志物及治疗靶点提 杨佳兴 徐红伟 王迎 王亮 王建国 李世朋关键词:外泌体 微小RNA-33对小鼠肝再生的影响及其作用机制 被引量:2 2020年 目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-33对小鼠肝再生的促进作用及其分子机制。方法2018年9月到2019年12月,将40只C57/B6小鼠(购自上海斯莱克实验动物有限公司)按照数字随机分组法分为模型组和miR-33 KD组。模型组小鼠经尾静脉注射对照腺相关病毒1×1011 vg/ml,miR-33 KD组小鼠经尾静脉注射miR-33敲降的腺相关病毒1×1011 vg/ml。在注射20 d后,模型组和miR-33 KD组采用70%肝切除方法建立小鼠肝再生模型。分别在肝切术后4 d计算肝重/体重比,采用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)免疫组织化学染色分析肝脏细胞分裂能力;采用生物信息学分析miR-33的靶基因,采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞增殖指标细胞核增殖抗原(Ki-67)和靶蛋白在两组肝组织中的表达。组间比较采用t检验。结果模型组和miR-33 KD组小鼠术后4 d肝脏/体重比分别为(4.10±0.61)%和(4.98±0.72)%。与模型组比较,miR-33 KD组术后4 d肝脏/体重比显著增加,差异有统计学意义(t=2.019,P<0.05)。与模型组肝脏细胞BrdU阳性率(32.47±7.99)%比较,miR-33 KD组小鼠肝脏细胞BrdU阳性率(75.38±10.56)%显著增加,差异有统计学意义(t=4.391,P<0.05)。与模型组肝脏细胞Ki-67蛋白表达水平(0.43±0.11)比较,miR-33 KD组小鼠肝脏细胞Ki-67蛋白表达水平(1.37±0.31)显著增加,差异有统计学意义(t=3.281,P<0.05)。生物信息学显示细胞周期素依赖性激酶(CDK6)是miR-33的靶基因。与模型组CDK6蛋白表达水平(0.25±0.15)比较,miR-33 KD组CDK6蛋白表达水平(1.02±0.28)显著增加,差异有统计学意义(t=3.108,P<0.05)。结论miR-33通过靶向作用于CDK63’端非编码区(3’UTR)区域,调控CDK6蛋白表达水平,进而影响细胞周期,调节正常肝脏细胞增殖。 游焜 王大军 王亮 王建国关键词:肝再生 细胞增殖 门冬氨酸鸟氨酸治疗肝癌切除术患者对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用研究 被引量:5 2018年 目的研究应用门冬氨酸鸟氨酸注射液治疗对肝癌切除术患者肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法 2015年8月~2017年3月我院行择期肝癌切除术患者101例,采用随机数字表法将患者分为对照组50例和试验组51例。术后,给予两组血制品和护肝治疗,另给试验组门冬氨酸鸟氨酸注射液静脉滴注治疗7 d。采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA),采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD),采用酶联免疫法测定一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)。结果治疗后,试验组血清MDA水平显著低于对照组[(5.4±0.6)μmol/L对(7.3±0.9)μmol/L],ET-1水平显著低于对照组[(115.2±14.3) pg/L对(216.6±26.8) pg/L],而试验组血清SOD水平显著高于对照组[(18.6±2.3) U/mL对(13.3±1.6) U/mL],NO水平也显著高于对照组[(37.9±5.7)μmol/L对(22.5±3.1)μmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05);试验组血清胆红素水平为(23.4±7.7)μmol/L,显著低于对照组的(31.3±7.8)μmol/L(P<0.05);观察组患者呼吸频次显著慢于对照组(P<0.05),而两组血常规变化无显著性差异(P>0.05)。结论应用门冬氨酸鸟氨酸注射液能够减轻肝癌切除术患者肝脏缺血再灌注损伤,保护肝功能,可能与其能够提高机体对氧自由基的清除能力、抑制过氧化反应和恢复肝脏代谢有关。 闫书鸣 王建国 李泽信 游焜 王亮 郭鹏威关键词:肝癌切除术 门冬氨酸鸟氨酸 缺血再灌注损伤 乙酰肝素酶与CD34在乳腺癌组织中的表达及意义 李泽信 王建国 游焜 王迎 李建 王亮 翁昆仑 张鹏